廣西壯族代謝綜合征患者血清脂聯素水平及其基因多態性分析

馬升俊，鄭利平，楊蘭，朱旭

(南寧市第二人民醫院，南寧 530031)

廣西壯族代謝綜合征患者血清脂聯素水平及其基因多態性分析

馬升俊，鄭利平，楊蘭，朱旭

(南寧市第二人民醫院，南寧 530031)

目的 觀察廣西壯族代謝綜合征(MS)患者血清脂聯素(APN)水平及其基因多態性。方法 將100例廣西壯族MS患者作為觀察組，100例廣西壯族健康者作為對照組，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測兩組血清APN，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性技術觀察兩組APN基因位點+45 T/G、+276 G/T的多態性。結果 觀察組、對照組血清APN水平分別為(79.67±7.91)、(104.42±10.67)mg/L，兩組相比P<0.05。觀察組APN+45位點TT、TG、GG基因型分別為16、38、46例，對照組分別為20、59、21例，兩組GG基因型比例比較P<0.01。觀察組ANP+276位點GG、GT、TT基因型分別為61、30、9例，對照組分別為91、8、1例，兩組GT、TT基因型比例比較P均<0.01。觀察組APN+45位點TT、TG、GG基因型患者血清APN水平分別為(81.49±9.42)、(76.17±8.29)、(75.68±8.91)mg/L，TT與TG、GG基因型相比P均<0.05。觀察組APN+276位點GG、GT、TT基因型患者血清APN水平分別為(80.73±9.58)、(75.49±8.83)、(75.21±8.39)mg/L，GG與GT、TT基因型相比P均<0.05。結論 廣西壯族MS患者血清APN水平低；APN+45 G等位基因、APN+276 T等位基因可能是廣西壯族MS患者的易感基因。

代謝綜合征；脂聯素；基因多態性；廣西壯族

代謝綜合征(MS)是多種代謝成分異常聚集的一種病理狀態，是一組以腹型肥胖、脂代謝紊亂、糖耐量減低及血壓升高為特征的臨床綜合征。大量流行病學資料表明，MS與心血管疾病和糖尿病的發病率密切相關，已成為嚴重的公共衛生問題[1]。脂聯素(APN)是由脂肪細胞特異性分泌的活性因子，具有抗炎、抗動脈粥樣硬化、抗血小板聚集等生物學作用[2]。近年來基因掃描發現APN所在基因區域與2型糖尿病和MS有關，且基因多態性具有地區、種族特異性[3]。本研究觀察了廣西壯族MS患者血清APN水平，并分析其基因多態性。現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將2013年2～10月在廣西馬山縣人民醫院和南寧市第二人民醫院就診的100例壯族MS患者作為觀察組，其中男52例、女48例，年齡46～75歲、平均53.1歲。另選擇壯族健康者100例作為對照組，其中男55例、女45例，年齡50～71歲、平均53.9歲。所有研究對象均來自廣西地區，三代中未有與外族通婚的壯族家族，且均為第三代；無遺傳性疾病家族史及其他相關疾病如肝炎、腎病綜合征、腎功能不全等急、慢性疾病史。MS診斷標準參照《中國成人血脂異常防治指南》[4]。觀察組與對照組年齡、性別具有可比性。觀察組、對照組BMI分別為(26.35±2.62)、(22.18±2.32)kg/m2，FPG分別為(5.67±2.01)、(4.38±0.68)mmol/L，收縮壓分別為(137.5±16.5)、(114.5±15.7)mmHg，舒張壓分別為(82.4±12.5)、(72.1±8.2)mmHg，TG分別為(2.85±0.61)、(1.13±0.52)mmol/L，TC分別為(5.51±1.69)、(4.27±1.12)mmol/L，LDL-C分別為(3.32±1.51)、(1.79±0.89)mmol/L，HDL-C分別為(1.29±0.42)、(1.62±0.54)mmol/L，兩組相比P均<0.05。所有研究對象知情同意，彼此無血緣關系。本研究經馬山縣人民醫院和南寧市第二人民醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 血清APN檢測 使用真空負壓采血技術，分別采集兩組空腹靜脈血3 mL于干燥試管中，靜置30 min后，低速(3 000 r/min)離心10 min分離血清。使用RT-6000酶標儀(深圳雷杜公司)采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測兩組血清APN，嚴格按照說明書進行操作。

1.3 APN基因多態性觀察 采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性技術。采集2 mL靜脈血于EDTA-K2抗凝管中，充分混勻后，取200 μL抗凝全血，使用DNA抽提試劑(北京天根生化科技有限公司)，按照試劑盒說明書提取DNA，用微量紫外分光光度儀(美國賽默飛世爾公司)檢查DNA的純度和濃度，取吸光度(A260 nm/A280 nm)值為1.8～2.0的樣本置-20 ℃冰箱保存。根據GenBank中APN基因的序列號(224589815)，用Primer Premier 5.0軟件設計引物。APN+45和APN+276兩個基因位點的上游引物序列分別為5′-CTTGGTGAGGAAAGGAGAC-3′，下游引物序列分別為5′-GAGGAATCAGAATATGAATG-3′，退火溫度為55 ℃，產物片段大小為745 bp。用ABI-9700擴增儀(美國ABI公司)進行擴增，PCR總反應體系包括PCR混合反應液8 μL(含2 mmol/L dNTP 3 μL、PCR緩沖液5 μL)、5 U/μL Taq酶 0.5 μL、無菌水37.5 μL、DNA模版2 μL和10 pmol/L的上、下游引物各1 μL，共50 μL。經過94 ℃預變性5 min；94 ℃ 1 min，55 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min，共35個循環；最后72 ℃延伸7 min。取PCR擴展產物20 μL、限制性內切酶1 μL，酶切緩沖液3 μL，無菌水6 μL，37 ℃酶切1 h。酶切后產物5 μL在2%瓊脂糖凝膠上點樣，經電泳儀(北京六一儀器廠)用電壓100 V，電泳30 min后，在凝膠圖像分析儀(珠海黑馬生物公司)下觀察電泳結果并攝像保存。APN+45位點的PCR產物經BspHⅠ 內切酶酶切電泳后，GG基因型為745 bp單片段，GT基因型為745、291、454 bp的3個片段，TT基因型為291、454 bp的2個片段。APN+276位點的PCR產物經BsmⅠ內切酶酶切電泳后，TT基因型為745 bp單片段，TG基因型為745、225、520 bp的3個片段，GG基因型為225、520 bp的2個片段。

2 結果

2.1 兩組血清APN水平比較 觀察組、對照組血清APN水平分別為(79.67±7.91)、(104.42±10.67)mg/L，兩組相比P<0.05。

2.2 兩組APN+45、+276基因位點多態性比較 兩組APN+45和APN+276基因多態性經H-W平衡檢驗，P均>0.05。兩組APN+45、+276基因位點多態性比較見表1。

表1 兩組APN+45、+276基因位點多態性比較

注：與對照組相比，*P<0.01。

2.3 觀察組APN+45、+276位點不同基因型血清APN水平比較 觀察組APN+45位點TT、TG、GG基因型患者血清APN水平分別為(81.49±9.42)、(76.17±8.29)、(75.68±8.91)mg/L，TT與TG、GG基因型相比P均<0.05。觀察組APN+276位點GG、GT、TT基因型患者血清APN水平分別為(80.73±9.58)、(75.49±8.83)、(75.21±8.39)mg/L，GG與GT、TT基因型相比P均<0.05。

3 討論

MS是一組以中心肥胖、脂代謝紊亂、胰島素抵抗為特征的臨床綜合征。隨著社會經濟和生活方式的改變，MS的患病率逐年上升，據統計中國MS患病率為14%～18%，在糖尿病患者為60%～80%[5]。MS的危害極大，其發生心血管疾病的概率為正常人的2倍[6]。因此，早期發現及預防MS非常重要。APN是脂肪細胞因子家族成員中一種重要的特異蛋白質，有多種生物學功能，如增加胰島素的敏感性、降低血糖和甘油三酯、調節血管活性物質的生成、參與免疫反應、抑制動脈粥樣硬化的形成等。目前認為APN水平下降是導致MS的一種新的發病因素[7]。本研究發現，觀察組血清APN水平較對照組降低，這與之前研究[8,9]結果相似，證實了血清中低APN水平可能與MS的發生密切相關，APN是拮抗MS發生發展的重要因素。

APN基因位于人染色體3q27區域，該區域有3個外顯子和2個內含子，具有豐富的多態性[10]。此區域也是2型糖尿病、MS、冠心病的易感基因區域[11～13]。但APN基因多態性存在種族和地區差異，以致國內外研究結果不一致，甚至對同一種族不同地區人群的研究也會有相互矛盾的結果產生[14]。本研究結果發現，觀察組APN+45位點的GG基因型頻率較對照組高，且G等位基因在壯族MS患者中較多見，說明APN+45 G基因可能是廣西壯族MS患者的易感基因。進一步分析APN+45位點的多態性與血清APN水平相關性時發現，攜帶G等位基因的患者血清APN水平低，提示攜帶APN+45 G等位基因的個體所致的低水平APN可能是MS的一個危險因素，這與國內外有關研究[8,15]相似。目前關于APN內含子3第276位點G/T變異的研究結果不一致，部分研究[16]表明APN+276位點G/T變異與肥胖個體的低APN水平相關，而另一些研究[15]表明該變異位點與MS不相關。本研究結果發現，觀察組APN+276的GT、TT基因型頻率高于對照組，攜帶T等位基因的患者血清APN水平低，提示APN+276 T等位基因可能是廣西壯族MS患者的易感基因。

綜上所述，廣西壯族MS患者血清APN水平低；APN+45位點攜帶G等位基因患者血清APN水平低，APN+276位點攜帶T等位基因患者血清APN水平低。APN+45 G等位基因、APN+276 T等位基因可能是廣西壯族MS患者的易感基因。

[1] Carr DB, Utzschneider KM, Hull RL, et al. Intra-abdominal fat is a major determinant of the national cholesterol education program adult treatment panel criteria for the metabolic syndrome[J]. Diabetes, 2004,53(8):2087-2094.

[2] 劉運端.脂聯素及其基因多態性與某地冠心病的相關性研究[J].檢驗醫學與臨床,2015,12(11):1567-1569.

[3] 修良昌,張楊,林美華,等.脂聯素基因多態性與2型糖尿病的關聯研究[J].現代預防醫學,2014,41(7):1262-1264.

[4] 中國成人血脂異常防治指南制訂聯合委員會.中國成人血脂異常防治指南[J].中國實用鄉村醫生雜志,2012,19(18):5-15.

[5] 徐成斌.代謝綜合征(2)[J].中國醫刊,2005,40(3):130-133.

[6] 朱曉巍,吳文君,卜瑞芳,等.代謝綜合征患者脂聯素基因多態性分析[J].山東醫藥,2010,50(49):10-12.

[7] 鄧擁軍,柯宗明.血清脂聯素水平、胰島素抵抗與代謝綜合征的相關性[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(1):49-50.

[8] Kizer JR, Barzilay JI, Kuller LH, et al. Adiponectin and risk of coronary heart disease in older men and women[J]. J Clin Endocrinol Metab, 2008,93(9):3357-3364.

[9] 韓延柏,汪宏莉,劉宇,等.血清脂聯素水平與代謝綜合征關系[J].中國公共衛生,2011,27(11):1476-1477.

[10] Flynn C, Bakris GL. Interaction between adiponectin and aldosterone[J]. Cardiorenal Med, 2011,1(2):96-101.

[11] 孫琳,廖羽,葉琳,等.FADS1/FADS2基因多態性與冠心病發病的關聯性分析[J].吉林大學學報(醫學版),2012,38(1):115-118.

[12] 何慧婧,衛大英,王淳秀,等.四川涼山漢族2型糖尿病與脂聯素基因多態性[J].中國公共衛生,2012,28(3):302-304.

[13] 王遂軍,賈偉平,包玉倩,等.脂聯素基因多態性與代謝綜合征相關性研究[J].中華實用診斷與治療雜志,2012,26(7):659-661.

[14] 徐麗,凌文華.脂聯素基因多態性研究進展[J].國外醫學:內分泌學分冊,2005,25(z1):1-3.

[15] 卜瑞芳,吳文君,華嘉臨,等.聯素基因多態性和血清聯素水平與老年人代謝綜合征的相關性[J].中國老年學雜志,2011,31(21):4112-4114.

[16] 薛磊,李丹丹,龐嫵燕.代謝綜合征患者脂聯素基因多態性與胰島素抵抗的相關性[J].山東醫藥,2014,54(33):78-79.

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《山東醫藥》關于醫學名詞與統計學符號的應用說明

醫學名詞要以1989年及以后由全國自然科學名詞審定委員會審定、公布，科學出版社出版的《醫學名詞》和相關科學的名詞為準，暫未公布者仍以人民衛生出版社出版的《英漢醫學詞匯》為準。中文藥物名稱應使用1995年藥典(法定藥物)或衛生部藥典委員會編輯的《藥名詞匯》(非法定藥物)中的名稱，英文藥物名稱則采用國際非專利藥名，不用商品名。

廣西壯放自治區南寧市科學研究與技術開發計劃項目(20123135)。

鄭利平(E-mail: lipingzheng88@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.22.034

R589

B

1002-266X(2017)22-0091-03

2016-07-01)