HPLC法測定復方苯巴比妥溴化鈉片中丹酚酸B的含量

2017-07-07 15:17:23劉震凌王佳楠

中國現代藥物應用 2017年6期

劉震凌王佳楠

劉震凌王佳楠

目的采用高效液相色譜法(HPLC)測定復方苯巴比妥溴化鈉片中丹酚酸B的含量。方法采用CAPCELLPAK-C18色譜柱；以乙腈-0.05%磷酸溶液(20∶80)為流動相；檢測波長為286 nm。結果 HPLC法測定丹酚酸B進樣量在0.1742～2.0904 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系,平均加樣回收率為99.00%,相對標準偏差(RSD)=0.6%(n=9)。結論 HPLC測定方法簡便、準確,專屬性強,重現性好,可用于該制劑的質量控制。

復方苯巴比妥溴化鈉片；高效液相色譜法；丹酚酸B

復方苯巴比妥溴化鈉片原標準收載于國家藥品監督管理局《國家藥品標準》(化學藥品地方標準上升國家標準第十二冊),由溴化鈉、苯巴比妥兩種化藥成分,及丹參干膏等五種中藥組成的中、西藥復方制劑［1-4］?！吨袊幍?010年版一部》“丹參”藥材中丹酚酸B為含量測定主要控制指標之一,《中國藥典2010年版一部》中丹參的含量測定方法,建立高效液相色譜法測定本品中丹參干膏中丹酚酸B的含量［1］。

1 儀器與試藥

島津LC -2010C高效液相色譜儀,丹酚酸B(中國食品藥品檢定研究院提供,批號：111562-201110),乙腈、甲醇均為色譜純(Fisher Chemical公司),磷酸為色譜純(天津市科密歐化學試劑有限公司)。復方苯巴比妥溴化鈉片(吉林省中研藥業有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗色譜柱：CAPCELLPAKC18(5.0 μm,4.6 mm×250 mm)；流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液(20∶80)；流速：0.8 ml/min；柱溫：35℃；檢測波長：286 nm；進樣量：10 μl。

2.2 丹酚酸B對照品溶液精密稱取丹酚酸B對照品10 mg,置于50 ml量瓶中,加50%甲醇適量使溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取10 ml,置25 ml量瓶中,用50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得(80 μg/ml)。

2.3 供試品溶液精密稱取重量差異項下供試品,研細,稱取細粉適量(約相當于1片量),置10 ml量瓶中,加入50%甲醇溶液約8 ml,超聲處理(功率：250 W,頻率：33 kHz)30 min,放冷,用50%甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,即得。

2.4 丹酚酸B陰性對照溶液提供缺丹參干膏的空白樣品,按供試品溶液項下方法操作制備丹酚酸B的陰性對照溶液,精密量取10 μl,注入液相色譜儀,結果在陰性對照溶液色譜圖中未檢出與丹酚酸B對照品保留時間一致的色譜峰。

2.5 標準曲線精密稱取丹酚酸B對照品10.89 mg,置25 ml量瓶中,加50%甲醇溶液適量使溶解,并稀釋至刻度,搖勻,精密量取10 ml,置25 ml量瓶中,搖勻(0.174 mg/ml)。精密吸取對照品溶液1、2、4、6、8、10 μl,分別注入液相色譜儀。以進樣量(μg)為橫坐標,峰面積為縱坐標,繪制標準曲線,回歸方程為Y=1236991.20X-21592.75,結果表明,丹酚酸B進樣量在0.1742～2.0904 μg范圍內,與峰面積呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗精密量取供試品溶液10 μl,注入液相色譜儀,重復進樣6次,記錄峰面積,均值為826773,RSD為0.3%(n=6),表明精密度良好。

2.7 穩定性試驗取供試品溶液(批號：20120302),分別于0、5、9、11、14、17、19 h時進樣10 μl,丹酚酸B峰面積在17 h后有下降趨勢,結果表明供試品溶液在17 h內基本穩定。

2.8 重復性試驗取供試品(批號：20120302),制備6份供試品溶液,進行測定,其平均含量為0.6959 mg/片,RSD= 0.5%(n=6),表明重復性良好。

2.9 回收率試驗取相當于0.5片量的已知含量的供試品(批號：20120302),共9份,置10 ml量瓶中,分別精密加入每1毫升含丹酚酸B 0.1742 mg的對照品溶液1.6、2.0、2.4 ml,各3份,分別加入50%甲醇溶液約6 ml,超聲處理(功率：250 W,頻率：33 kHz)30 min,放冷,用50%甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續濾液,注入液相色譜儀,記錄峰面積,按外標法計算［5-7］丹酚酸B的平均回收率為99.00%,RSD=0.6%(n=9),表明具有良好的回收率。見表1。

2.10 樣品測定結果按上述方法測定三批樣品中的丹酚酸B含量。見表2。