枇杷葉及其炮制品中總三萜的含量分析

汪世浩 閆其朋 周玉波紹興文理學院化學化工學院， 浙江 紹興 312000

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枇杷葉及其炮制品中總三萜的含量分析

汪世浩 閆其朋 周玉波
紹興文理學院化學化工學院， 浙江 紹興 312000

目的：比較枇杷葉生品與不同炮制品中總三萜的含量變化。方法：采用紫外可見分光光度法，以5%香草醛-冰醋酸溶液作顯色劑，高氯酸為穩定劑，建立枇杷葉中總三萜類成分的含量測定方法，分別測定了枇杷葉不同炮制品中總三萜的含量。結果：枇杷葉生品總三萜含量1.56%、清炒制品1.47%、蜜炙品2.36%、姜汁炒制品2.20%、姜湯煮制品1.60%。結論：炮制對枇杷葉中總三萜的含量有影響，其中以蜜炙枇杷葉中的含量為最高。

枇杷葉；總三萜；炮制

枇杷葉，又名巴葉，系薔薇科枇杷屬常綠小喬木植物枇杷Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl.的干燥葉[1]，其藥用歷史悠久，始載于《名醫別錄》。枇杷葉性苦、微寒，歸肺、胃經，能清肺止咳、降逆止嘔，主治肺熱咳嗽、氣逆喘急、胃熱嘔逆及煩熱口渴[2]。枇杷葉具有多種炮制方法[3-5]，臨床上多用其蜜炙品，蜜炙后潤肺止咳功能增強，常用于肺燥咳嗽。其他炮制方法亦廣泛應用于臨床：姜炙后能和胃；清炒后,減少了滋膩之性多用于外感咳嗽及嘔吐。現代藥物化學研究表明,枇杷葉中含有多種化學成分[6]，三萜類成分作為其主要活性物質，具有抗炎、鎮咳、降血糖、抗病毒等作用[7-8]。本文以熊果酸為對照品，利用紫外分光光度法測定了枇杷葉不同炮制品中總三萜的含量，并進行了比較，以期為深入研究枇杷葉的炮制機理提供參考。

1 材料

1.1 儀器 METTLER AL204型分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；粉粹機(FZ102 北京市永光明醫療儀器廠)；HP8453型紫外-可見分光光度計(惠普公司)。

1.2 試劑與試藥 枇杷葉購自浙江震元醫藥連鎖有限公司，產地為浙江，經鑒定為枇杷Eriobotryajaponica(Thunb.)Lindl.的干燥葉。生枇杷葉(枇杷葉用純凈水洗后烘干)；清炒枇杷葉(枇杷葉文火炒至微焦，有香氣)；蜜炙枇杷葉[煉蜜冷開水稀釋(4∶1)后，加入枇杷葉絲拌勻，悶潤后，用文火炒至微黃色，不粘手。枇杷葉每100g，用煉蜜20g；姜汁炒枇杷葉(枇杷葉絲加姜汁拌勻，潤透后文火炒干，枇杷葉每100g用干姜3g。)；姜湯煮枇杷葉(干姜片加水與枇杷葉同煮至水盡后炒干，枇杷葉每100g用干姜3g)。

熊果酸(購自中國食品藥品檢定研究院，批號：110742-201518)，香草醛(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20140923)、冰醋酸(國藥集團化學試劑有限公司，批號：T20150720)、高氯酸(國藥集團化學試劑有限公司，批號：20150930)、乙酸乙酯(國藥集團化學試劑有限公司，批號：T20140517)等試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取熊果酸對照品7.5mg，置于100mL容量瓶中，用無水乙醇溶解，定容至刻度，搖勻，即得濃度為0.075mg/mL的對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取枇杷葉生品及各炮制品粉末各1.0g，加入85%乙醇20mL，攪拌，回流提取3次，每次1h，抽濾后取濾液1mL蒸干，再用20mL蒸餾水分散，加入等體積的飽和正丁醇萃取3次，將正丁醇萃取液合并后，揮干，最后用95%乙醇溶解，定容至100mL容量瓶中。

2.3 測定波長的選擇 對照品溶液和枇杷葉生品的供試液各0.8mL置水浴中加熱至溶劑揮干，加5%香草醛-冰醋酸0.3 mL，高氯酸0.8mL，60℃水浴中加熱10min，取出冷卻后移至10mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻。在400～800nm范圍進行波長掃描，以試劑空白作參比。結果表明兩個樣品在550nm處有最大吸收，且空白對照干擾最小，故選550nm作為樣品測定的波長。

2.4 標準曲線的繪制 精密吸取熊果酸對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置于10mL帶刻度試管中，水浴中加熱揮干溶劑后，依次加入5%香草醛-冰醋酸0.3mL和高氯酸0.8mL，60℃水浴中加熱10min，取出冷水冷卻后移至10mL容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。以隨行試劑作空白參比，在550nm波長處測定吸光度A。以A為縱坐標，以熊果酸濃度(C)為橫坐標，繪制標準曲線。回歸方程為Y=30.101X-0.0304(r=0.9996)，說明熊果酸在0.0015～0.0075mg/mL范圍內，線性關系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取熊果酸對照品溶液0.2mL，置10mL刻度試管中，按2.4項方法連續測定6次，RSD1.57%，表明儀器精密度良好。

2.6 顯色穩定性試驗 取供試品溶液0.2mL，置10mL刻度試管中，按照2.4項方法操作，測定吸光度A，每間隔10min測定1次，連續測定60min，RSD=1.79%，表明在室溫下供試品溶液顯色后60min內穩定。

2.7 重復性實驗 精密稱取枇杷葉生品粉末6份，按2.2項操作制備供試品溶液，取0.2mL置10mL刻度試管中，按照2.4項方法測定，RSD=2.38%，表明重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 稱取已知含量的枇杷葉生品粉末0.5g 6份，精密稱定，分別加入熊果酸對照品8mg，按照2.2項操作方法制備供試品溶液，取0.2mL置10mL刻度試管中，按照2.4項方法測定，計算熊果酸平均回收率為95.79%，RSD為1.04%。結果見表1。

表1 枇杷葉總三萜加樣回收率試驗結果

2.9 樣品含量測定 精密移取枇杷葉及其炮制品供試品溶液各0.2mL，置10mL刻度試管中，按照2.4項操作方法測定，由2.4項中的回歸方程求出供試品中總三萜的濃度。結果見表2。

表2 枇杷葉不同炮制品中總三萜的含量測定結果 (n=3)

3 討論

三萜類化合物在中藥材中廣泛分布，并具有多種生物活性，有很高的藥用價值。文獻報道枇杷葉中富含三萜類化合物[7-10]，是枇杷葉中與其鎮咳、抗炎功能相吻合的有效成分。實驗表明，不同炮制品中總三萜的含量有較大差異，按以下次序依次降低：蜜炙品>姜汁炒制品>姜湯煮制品>生品>清炒制品。除清炒制品以外，枇杷葉經過炮制后總三萜的含量均有所增高，其中蜜炙品中的含量為最高，是臨床常用蜜炙品以增強潤肺止咳功能的原因之一。

本研究比較了枇杷葉不同炮制品中總三萜的含量變化，其研究結果可為枇杷葉的炮制研究及臨床合理應用提供參考。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2015：204

[2]陳劍，李維林，吳菊蘭，等．枇杷葉的化學成分[J]．植物資源與環境學報，2006，15(4)：67-68．

[3]葉廣億，李書淵，陳艷芬，等．枇杷葉不同提取物的止咳化痰平喘作用比較研究[J]．中藥藥理與臨床，2013，29(2)：100-102．

[4]張炳鑫．中藥炮制品古今演變評述[M]．北京：人民衛生出版社，1991：322-324．

[5]上海市衛生局．上海市中藥炮制規范[M]．上海：上海科學普及出版社，1994：263．

[6]郭宇，吳松吉，樸惠善．枇杷葉的化學成分及藥理活性研究進展[J]．時珍國醫國藥，2006，17(6)：928-930．

[7]何英姿．枇杷葉有效成分提取及藥理作用研究進展[J]．廣西工學院學報，2007，18(2)：81-84．

[8]鞠建華，周亮，林耕，等．枇杷葉中三萜酸類成分及其抗炎、鎮咳活性研究[J]．中國藥學雜志，2003，38(10)：752-757．

[9]陳歡，陳光，任紅梅，等．枇杷葉中三萜類成分的研究[J]．北京化工大學學報(自然科學版)，2012，39(3)：40-45

[10]楊慶新，黃建安，劉仲華，等．枇杷葉中三萜酸的研究進展[J]．食品工業科技，2008(3)：282-285

[11]呂寒，陳劍，李維林，等．枇杷葉中三萜類化學成分的研究[J]．中藥材，2008，31(9)：1351-1354．

Content Determination of Total Triterpenoids in Follum Eriobotryae Processed Products

WANG Shihao YAN Qipeng ZHOU Yubo

College of Chemistry and Chemical Engineering, Shaoxing University of Arts and Sciences,Shaoxing 312000, China

Objective To study and compare the content of total triterpenoids in follum eriobotryae from different processing methods. Methods The content of total triterpenoids was determined by UV-visible spectrophotometry with the color agent of 5% vanillin glacial acetic acid solution and stabilizing agent of perchloric acid. Results The content of total triterpenoids in follum eriobotryae by different processing methods was as follows: crud folium eriobotryae 1.56%, plain-frying folium eriobotryae 1.47%, stir-heating folium eriobotryae with honey 2.36%, stir-heating folium eriobotryae with Ginger juice 2.20%, stir-heating folium eriobotryae after boiled with Ginger 1.60%. Conclusion The content of total triterpenoids in follum eriobotryae varied with the processing method. In stir-heating folium eriobotryae with honey the amount of total flavonoids was the highest.

Follum Eriobotryae;Total Triterpenoid; Processing

浙江省教育廳科研項目(Y201122331)，紹興文理學院校級學生科研項目。

汪世浩(1996-)，男，本科在讀，研究方向為藥學。E-mail：wszyb9132000@126.com

R284.1

A

1007-8517(2017)12-0022-03

2017-04-13 編輯：穆麗華)