萬壽菊粉對錦鯉生長及抗氧化能力的影響

林城麗，張寶龍，白東清*，朱國霞，方珍珍，崔培，喬秀亭

（1.天津農學院水產學院天津市水產生態及養殖重點實驗室，天津300384；2.天津現代晨輝科技集團有限公司天津市水族動物功能性飼料企業重點實驗室，天津301800）

水產養殖

萬壽菊粉對錦鯉生長及抗氧化能力的影響

林城麗1，張寶龍2，白東清1*，朱國霞1，方珍珍1，崔培1，喬秀亭1

（1.天津農學院水產學院天津市水產生態及養殖重點實驗室，天津300384；2.天津現代晨輝科技集團有限公司天津市水族動物功能性飼料企業重點實驗室，天津301800）

為探究萬壽菊（Tagetes erecta L）粉對黃金錦鯉（Yamabaki ogon）生長性能及抗氧化能力的影響，試驗選用初始體重為（25.39±1.23）g的黃金錦鯉540尾，隨機分為6組，分別標記為D1～D6，其中D1組為對照組，D2~D5組為試驗組，每組3個重復，分別投喂含0.00%、0.50%、1.00%、2.00%、4.00%、8.00%萬壽菊粉的6組等氮等能飼料。飼養60 d后分析不同水平萬壽菊粉對黃金錦鯉生長和抗氧化能力的影響。結果表明：在生長方面，D5組增重率和蛋白質效率提升最顯著且比對照組分別提高了58.66%、92.77%，D6組肥滿度提升最顯著且比對照組提高了36.95%，D5組餌料系數降低最顯著且比對照組降低了63.69%（P＜0.05）。抗氧化能力方面，D5組的血清、頭腎和脾超氧化物歧化酶（SOD）活力提高最顯著且分別比對照組提高了71.21%、117.92%、230.76%，D4組肝胰臟和中腎SOD活力提高最顯著且分別比對照組提高了110.82%、92.28%（P＜0.05）；D5組肝胰臟、頭腎和脾過氧化氫酶（CAT）活性提升最顯著且分別高于對照組93.50%、50.38%100.83%，D4組血清和中腎CAT活性提升最顯著且分別高于對照組4.11%、66.31%（P＜0.05）；D5組的血清、肝胰臟、頭腎、中腎和脾的谷光甘肽（GSH）含量提升最顯著且分別比對照組提高了341.38%、223.91%、230.33%、372.26%、439.07%（P＜0.05）；D5組的血清、頭腎和脾GSH-PX含量提升最顯著且分別比對照組提高了112.07%、155.67%、236.28%，D6組肝胰臟谷光甘肽過氧化物酶（GSH-PX）含量提升最顯著且分別比對照組提高了157.47%（P＜0.05），試驗組的中腎GSH-PX含量提高不顯著（P＞0.05）；D5組血清、肝胰臟、頭腎和脾的丙二醛（MDA）含量降低最顯著且分別比對照組降低了36.94%、51.25%、47.79%、81.25%（P＜0.05），而試驗組中腎MDA含量降低不顯著（P＞0.05）。研究表明，飼料中添加4.00%萬壽菊粉能夠有效促進黃金錦鯉生長性能，并提高其抗氧化能力。

萬壽菊粉；黃金錦鯉；生長；抗氧化能力

萬壽菊（Tagetes erecta L）屬菊科一年生草本植物，作為一種多用途、高價值的經濟作物，國內外對其研究越來越廣泛，主要包括種質資源創新、栽培措施、形態結構和葉黃素提取及應用等（Santosa等，2005；Krinsky等，2003；Bosma等，2003），另外，作為食品、化妝品、煙草、醫藥及禽類飼料添加劑也被廣泛研究。研究表明，萬壽菊粉富含天然維生素E、類胡蘿卜素、腺嘌呤、膽堿、水蘇堿、黃酮類及多種維生素，具有疏風清肝之功效，可有效防止脂肪肝的發生，增強機體耐缺氧能力（袁玲等，2010）。萬壽菊作為一種觀賞性花卉，不僅具有藥用性和營養性，還可作為免疫增強劑用于長毛兔、獺兔和肉兔（王秀，2010）、塞北兔（楊國忠，2008）、斷奶仔豬（花城，2009），以及鯉魚、鯽魚、草魚（劉春東，2002）等動物，具有很高的經濟價值，市場應用潛力很大。

黃金錦鯉（Yamabaki ogon）是觀賞魚中比較名貴的品種之一，具有很高的經濟價值。黃金錦鯉由于近親交配，導致其免疫力下降、發病率高、經濟損失大（崔培等，2011）。因此，針對性地篩選適宜的免疫增強劑以替代抗生素成為當務之急。本試驗以黃金錦鯉為研究對象，在飼料中添加不同水平的萬壽菊粉，通過養殖試驗，探討萬壽菊粉對黃金錦鯉生長及抗氧化能力的影響，為黃金錦鯉養殖開發促生長劑和免疫增強劑提供參考。

1材料與方法

1.1試驗魚與飼料同批次單色黃金錦鯉購自天津藍科水產養殖有限公司，初始體重（25.39± 1.23）g，初始體長（10.1±0.25）cm，投喂基礎飼料，每2 d換水1/3，在養殖箱中暫養1周后挑選540尾體格健壯、體色鮮艷、無病無傷、規格一致的作為試驗魚。以魚粉、豆粕、花生粕為主要蛋白源，面粉、麩皮為糖源，大豆油為脂肪源，配制試驗基礎飼料，并作為對照組。基礎飼料中添加不同含量（0.00%、0.50%、1.00%、2.00%、4.00%、8.00%）的萬壽菊粉（購于翔森精細化工，純度為96%），配制成6種飼料，飼料所要投喂的養殖組分別記為D1～D6。飼料組成及實際測定的營養成分分析見表1。

表1 試驗飼料組成%

1.2試驗設計與養殖540尾黃金錦鯉隨機分成6組，分別記為D1～D6，其中D1組為對照組，D2～D6組為試驗組。每組3個重復，每個重復30尾魚，隨機分到18個規格相同的水族箱（86 cm×56 cm×48 cm）中。馴化7 d后正式試驗。每天9∶00和17∶00投喂飼料；每2 d換水1次（吸底），水質要求：pH 7.5～8.0，水溫25～28℃，溶氧6.0～7.0 mg/L，氨氮0.4～0.5 mg/L。試驗周期60 d。

1.3指標測定及方法養殖60 d后測量各組魚的體重、體長，計算增重率、肥滿度、蛋白質效率及飼料系數。每個重復隨機撈取10條魚，抽取其血液后離心，血清放入2 mL的離心管，標號后進行指標測定。解剖魚體，將采集的肝胰臟、脾、頭腎、中腎等放進3號自封袋（整個過程在冰袋上操作以保持組織新鮮），凍存于-80℃冰箱。組織測定前用微量勻漿器研磨，將勻漿液倒入離心管中，于4℃、3000 r/min離心20 min后，吸取上清液進行各指標的測定（閆珊珊，2010）。飼料系數（FCR）、增重率（WG）、肥滿度（CF）、蛋白質效率（PER）的計算公式：

式中：Id為攝食總量，g；W0、Wt為初始、終末魚體質量，g；L為魚體長，cm；Pd為飼料中蛋白質含量，%。

用黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶（SOD）活力，采用TBA法測定丙二醛（MDA）含量，過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）等指標均采用南京建成生物公司的試劑盒測定。

1.4數據分析與統計試驗數據均以“平均值±標準差”表示，采用統計軟件SPSS 16.0中的單因素方差分析進行數據處理。統計分析采用Duncan’s法進行平均值的多重比較。

2結果

2.1萬壽菊粉對錦鯉生長和飼料利用的影響由表2可知，到了第60天（終末均重），D5、D6組錦鯉體重顯著高于其他組（P＜0.05），其中D5組增高最多且比對照組提高了30.32%。D6組的增重率、肥滿度、蛋白質效率等指標均呈現先上升后下降的趨勢，試驗組各項指標均高于對照組；而餌料系數呈先下降后上升趨勢，試驗組均低于對照組。D5、D6組增重率、肥滿度和蛋白質效率顯著高于D1～D4組（P＜0.05），其中D5組增重率最高且比對照組提高了58.66%，D6組肥滿度最高且比對照組提高了36.95%，D5組蛋白質效率最高且比對照組提高了92.77%；D4～D6組飼料系數顯著低于D1～D3組（P＜0.05），其中D5組餌料系數最低且比對照組降低了63.69%。

表2 萬壽菊粉對錦鯉生長指標的影響

2.2萬壽菊粉對錦鯉血清及組織中抗氧化指標的影響

2.2.1萬壽菊粉對錦鯉血清及組織中SOD活力的影響由表3可知，D4、D5組血清SOD活力顯著高于對照組，D5組最高，較對照組提高了71.21%（P＜0.05）；D5組的頭腎和脾SOD活力均顯著高于對照組，分別提高了117.92%、230.76%（P＜0.05）；各試驗組的肝胰臟SOD活力均顯著高于對照組，其中D4組活力最大，比對照組提高了110.82%（P＜0.05）；D4、D5組的中腎SOD活力顯著高于對照組，其中D4組活力最大，比對照組提高了92.28%（P＜0.05）。

表3 萬壽菊粉對錦鯉SOD活力的影響

2.2.2萬壽菊粉對錦鯉血清及組織中MDA含量的影響由表4可知，各組血清及各個組織的MDA含量均低于對照組，其中D5組血清、肝胰臟、頭腎、脾的MDA含量最低（P＜0.05），比對照組分別降低了36.94%、51.25%、47.79%、81.25%。D6組中腎的MDA含量最低，比對照組降低了16.07%，但各組間變化不顯著（P＞0.05）。

2.2.3萬壽菊粉對錦鯉血清及組織中CAT活力的影響根據表5所示，各試驗組的CAT活力均高于對照組，D3、D4組中的血清CAT活力顯著高于對照組，其中D4組活力最高且比對照組提高了4.11%（P＜0.05）；D5組的肝胰臟CAT活力顯著高于對照組，提高了93.50%（P＜0.05）；D3～D5組的頭腎中CAT活力顯著高于對照組和D2組，其中D5組活力最高，較對照組提高了50.38%（P＜0.05）；D4～D6組中腎CAT活力顯著高于對照組，其中D4活性最高，較對照組提高了66.31%（P＜0.05）；D4～D5組的脾CAT活力顯著高于其余各組，其中D5組CAT活力最高，較對照組提高了100.83%（P＜0.05）。

表4 萬壽菊粉對錦鯉MDA含量的影n響mol/mL

表5 萬壽菊粉對錦鯉CAT活力的影響U/mL

2.2.4萬壽菊粉對錦鯉GSH含量的影響從表6可以看出，各組的錦鯉組織、血清中GSH含量均高于對照組。其中，D3～D6組的血清GSH含量均顯著高于對照組（P＜0.05），D5、D6組的肝胰臟和脾GSH含量均顯著高于對照組（P＜0.05），D5組的頭腎、中腎GSH含量均顯著高于對照組（P＜0.05）；D5組血清、頭腎、中腎、脾中GSH含量均最高，比對照組分別提高了341.38%、223.91%、230.33%、372.26%、439.07%。

表6 萬壽菊粉對錦鯉的GSH含量的影響

2.2.5萬壽菊粉對錦鯉GSH-PX活力的影響從表7可以看出，各試驗組的組織、血清中GSHPX活力均高于對照組。其中，D2～D6組的血清GSH-PX活力均顯著高于對照組，D5組活力最大，相比對照組提高了112.07%（P＜0.05）；D3～D6組的頭腎GSH-PX活力顯著高于對照組，D5組活力最大，相比對照組提高了155.67%（P＜0.05）；D5組的脾GSH-PX活力顯著高于對照組，相比對照組提高了236.28%（P＜0.05）；D3～D6組的肝胰臟GSH-PX活力顯著高于對照組和D2組（P＜0.05），其中D6組活力比對照組提高了157.47%；各組的中腎GSH-PX活力變化不明顯（P＞0.05）。

表7 萬壽菊粉對錦鯉GSH-PX活力的影響

3討論

3.1萬壽菊粉對錦鯉生長指標的影響在飼料中添加菊粉分別投喂刺參（梁超，2011）、鯉魚（任永林，2008）、肉仔雞（張艷，2004）發現，其飼料轉化率、特定生長率（SGR）、相對生長率、飼料系數和增重顯著提高。從本試驗生長指標可以看出，在飼料中添加不同含量的萬壽菊粉飼喂黃金錦鯉，對促進魚體的增重率、肥滿度、蛋白質效率及降低飼料系數均有顯著影響，其中4%水平的萬壽菊粉對錦鯉增重率、蛋白質效率、飼料系數效果最佳，而8%水平的萬壽菊粉對錦鯉的肥滿度效果最佳。隨著萬壽菊粉添加水平的提高，黃金錦鯉的增重率、蛋白質效率、肥滿度明顯提高，而飼料系數明顯降低，這是因為飼料所含蛋白質為魚的主要營養物質，試驗組飼料系數降低意味著飼料中營養物質的利用效率更高。萬壽菊粉促生長的原因：一方面是因為萬壽菊粉中含有多種氨基酸、常量及微量礦物元素及維生素等營養成分，尤其是菊糖，能促進攝食動物的生長。萬壽菊粉含有的菊糖具有益生素作用，能增強胃腸道蠕動，提高腸胃功能，增加消化和食欲，從而促進了腸道對食物營養物質的吸收，進而促進生長。另一方面是其濃烈的芳香氣味可提高錦鯉的食欲，增加魚對飼料的攝入量。而胡月明（2002）用添加萬壽菊花粉的餌料飼喂鯉魚發現，對餌料系數沒有影響，這與本試驗結果不同，這可能與養殖品種、養殖環境以及飼料營養組成不同有關，因此萬壽菊粉促進生長的作用機制還需進一步研究。

3.2萬壽菊粉對錦鯉生化指標的影響從生化指標結果可以看出，試驗組的SOD、CAT活力和GSH、GSH-PX、MDA含量與對照組有顯著差異，表明萬壽菊粉能提高黃金錦鯉的非特異性免疫力。這是由于葉黃素是萬壽菊的主要成分，其主要與月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸酯化的形式存在。Kumar等（2010）以及WANG等（2006）研究發現，葉黃素能夠淬滅單線態氧，從而抑制具有破壞性的自由基的形成，因此擁有較強的抗氧化功能。

本試驗結果表明，隨著萬壽菊粉含量的增多，血清及組織的SOD、CAT活力隨之增加，MDA含量隨之降低，說明萬壽菊粉可通過誘導錦鯉機體內抗氧化酶和還原性物質的生成，提高魚體抗氧化能力。且血清中的SOD活力遠遠低于組織，這是由于細胞膜通透性穩定，細胞內SOD酶較少釋入血液，組織中的SOD酶活性就相對較高，血清中的SOD酶活性就偏低（魏軼男，2013）。SOD活性的升高促使SOD催化分解超氧陰離子，使得體內過氧化氫含量增加。CAT可清除組織器官中的過氧化氫，因此其活性也隨之升高。梁超（2011）研究發現，飼料中添加菊粉對刺參的SOD活性有著顯著影響，表明菊粉可提高刺參非特異性免疫能力。任永林（2008）研究表明，在飼料中添加紫錐菊提取物投喂鯉魚，能顯著提高其組織中相關免疫酶的活性、降低MDA含量。

本試驗結果表明，隨著萬壽菊粉含量的增加，血清和組織的GSH、GSH-PX含量也隨之增加，且肝胰臟含量最大。這是因為GSH的合成主要在肝內，其合成方式有多種，其中一種是GSSG與蛋白質分子中的巰基通過巰基轉移酶作用生成GSH。由于蛋白質效率的提高，致使蛋白質分子的巰基增多，從而促進GSH的生成（王魯波等，2012）。GSH-PX的生理功能主要是催化GSH參與過氧化反應，清除在細胞呼吸代謝過程中產生的過氧化物和羥自由基，因此，GSH-PX和GSH含量成正比關系。魏軼男（2013）發現添加1.0%菊粉可顯著降低1～42日齡肉仔雞肝臟和血清中的MDA含量，并可顯著提高GSH-PX含量（P＜0.05），與本試驗結果相近，但最適添加量不同，這可能與養殖品種不同有關。

由于各項生長指標、生化指標沒有一個統一的最適濃度，只是各自的最佳結果固定在一個范圍。因此萬壽菊粉在錦鯉基礎飼料中的最適添加量及其作用機理還有待進一步研究。

4結論

本試驗結果顯示，萬壽菊粉能有效提高黃金錦鯉生長和抗氧化能力，且在錦鯉飼料中添加4%萬壽菊粉較為適宜。

[1]袁玲，王學梅，王秋菊，等.萬壽菊粉的營養價值評定[J].東北農業大學學報，2010，41（10）：77~81.

[2]崔培，姜志強，韓雨哲，等.飼料脂肪水平對紅白錦鯉體色、生長及部分生理生化指標的影響[J].天津農學院學報，2011，18（2）：23~31.

[3]花城.菊粉對斷奶仔豬生長性能及免疫功能影響的研究[D].長沙：湖南農業大學，2009.

[4]胡月明.增強魚體抗病力的天然添加物——萬壽菊花粉[J].動物科學與動物醫學，2002，19（2）：63~64.

[6]金立志.植物提取物添加劑在動物營養中的應用及其機制的研究進展[J].動物營養學報，2010，5：1154~1164.

[7]劉春東.菊花粉在水產養殖中應用的效果[J].動物科學與動物醫學，2002，19（2）：62.

[8]梁超.飼料中添加二甲酸鉀、低聚木糖和菊粉對刺參的生長、免疫和抗燦爛弧菌感染能力的影響[D].青島：中國海洋大學，2011.

[9]任永林.紫錐菊提取物對鯉生產性能和免疫功能的影響[D].雅安市：四川農業大學，2008.

[10]上官明軍，王芳，張紅崗，等.菊粉對蛋雛雞生長性能免疫器官指數和血清免疫球蛋白的影響[J].動物營養學報，2009，1：118~122.

[11]王秀.菊花粉在兔飼料中的應用[J].江西飼料，2010，2：41.

[12]王魯波，薛敏，王嘉，等.天然葉黃素對黃顙魚生長性能和皮膚著色的影響[J].水產學報，2012，7：1102~1110.

[13]魏軼男，黃倩倩，呂亞軍，等.菊粉對肉仔雞生長性能、免疫器官指數及抗氧化指標的影響[J].西北農林科技大學學報（自然科學版），2013，11：13~18.

[14]楊國忠，王立春，章月萍.菊花粉和苜蓿草粉顆粒料飼喂肉兔對比試驗[J].中國飼料，2008，18：42~43.

[15]閆珊珊.紅白錦鯉著色效果的初步研究[D].天津：天津農學院，2010.

[16]張艷.菊粉對肉雞生產性能、血液指標及腸道菌群的影響[D].保定：河北農業大學，2004.

[17]Bosma T L，Dole J M，Maness N O.Optimizing Marigold（Tagetes erecta L.）Petal and Pigment Yield[J].Crop Science，2003，43，2118~2124.

[18]Krinsky N I，Landrum J T，Bone R A.Biologic mechanisms of the protective role of lutein and zeaxanthin in the eye[J].Annu Review Nutrition，2003，23：171~201.

[19]Kumar R，Yu W，Jiang Cet all.Improment of the isolation and purification of lutein from marigold flower（Tagetes erecta L.）and its antioxidant activity[J].Journal of Food Process Engineering，2010，33（6）：1065~1078.

[20]Santosa S，Jones P J H.Oxidative stress in ocular disease：Dose lutein play a protective role[J].Canadian Medical Association Journal，2005，173（8）：861~862.

[21]Wang M C，Tsao R，Zhang F，et al.Antioxidant activity，mutagenicity/antimutagenicity，and clastogenicity/anti-clastogenicityof lutein from marigold flowers[J].Food and Chemical Toxicology，2006，44（9）：1522~1529.■

The study was investigated the effects of different levels of marigold powder（0%-D1，0.5%-D2，1%-D3，2%-D4，4%-D5，8%-D6）on growth and antioxidant capacity in Gold brocade carp（Yamabaki ogon）.A total of 540 Gold brocade carp with initial average body weight of（25.39±1.23）g were randomly divided into 6 treatment groups with 3 replicates of 30 each.The indicators of samples were measured at 60 d.The results showed that：In terms of growth，the rate of weight growth rate and protein efficiency ratio of D5 group that were the most significantly increased and 58.66%，92.77%higher than the control group，the condition factor of D6 group that was the most significantly increased and 36.95%higher than the control group（P＜0.05）；the feed conversion ratio of D5 group that was the most significantly decreased 63.69%lower than the control group（P＜0.05）.In terms of antioxidant capacity，superoxide dismutase（SOD）activity of serum，head kidney and spleen in D5 group that were the most significantly increased and respectively 71.21%，117.92%，230.76%higher than the control group，SOD activity of hepatopancreas and kidney in D4 group that were the most significantly increased and respectively 110.82%，92.28%higher than the control group（P＜0.05）；Catalase（CAT）activity of hepatopancreas，head kidney and spleen in D5 group that were the most significantly increased and 93.50%，50.38%100.83%higher than the control group，CAT activity of the serum and kidney that were the most significantly increased and 4.11%，66.31%higher than the control group（P＜0.05）；Glutathione（GSH）activities ofserum，hepatopancreas，head kidney，kidney and spleen in D5 group that were the most significantly increased and 341.38%，223.91%，230.33%，372.26%，439.07%higher than the control group（P＜0.05）；Glutathione peroxidase（GSHPX）activities of serum，head kidney and spleen in D5 group that were the most significantly increased respectively 112.07%，155.67%，236.28%higher than the control group，GSH-PX activities of hepatopancreas that was the most significantly increased and 157.47%higher than the control group（P＜0.05），but kidney GSH-Px activities of treated group had no significant difference with control group（P＞0.05）.Methane dicarboxylic aldehyde（MDA）contents of serum，hepatopancreas，head kidney and spleen in D5 group that were the most significantly decreased and 36.94%，51.25%，47.79%，81.25%lower than the control group（P＜0.05），but kidney MDA contents of treated group had no significant difference with control group（P＞0.05）.These data indicate that 4%marigold powder can promote the growth，enhance the oxidation resistance of Yamabaki ogon.

marigold powder；Yamabaki ogon；growth；antioxidant capacity

S963

A

1004-3314（2017）12-0037-05

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20171210

國家級星火計劃項目（2012GA610003；天津市水產產業技術體系創新團隊（ITTFRS2017001）

*通訊作者