五味子配方顆粒劑的提取工藝和質量標準研究

趙崇+肖佳

（1.黑龍江威凱洱生物技術有限公司；2.哈爾濱凱程制藥有限公司）

摘 要：本實驗對五味子配方顆粒劑的提取工藝及五味子配方顆粒劑的質量標準進行研究。按照L9（34）正交設計表條件進行試驗，得到最佳提取工藝為加12倍量水，浸泡5小時，回流提取3次，每次1.5小時。本工藝穩定、可行、收率高，本質量標準可以用于五味子配方顆粒劑的質量控制。

關鍵詞：五味子配方顆粒劑；提取；質量標準

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis （Turcz.）Baill.或華中五味子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.的干燥成熟果實。唐等《新修本草》載“五味皮肉甘酸，核中辛苦，都有咸味”，故有五味子之名。五味子具有收斂固澀，益氣生津，補腎寧心的功效。五味子常用于久嗽虛喘、夢遺滑精、自汗、盜汗、津傷口渴、遺尿尿頻、內熱消渴、心悸失眠等。五味子具有保肝、保護心腦血管、抗氧化、抗衰老、鎮靜、催眠等多種功能[1-5]。本實驗對五味子配方顆粒劑的提取工藝及五味子配方顆粒劑的質量標準進行研究。

1 儀器與試藥

HQ-50高端試劑級超純水機（鄭州華新電氣公司）；STIER M8000D實驗室洗瓶機（廣州安一生物科技有限公司）；LC-310液相色譜系統（江蘇天瑞儀器股份有限公司）；15L多功能型超聲波清洗器（上海聲彥超聲波儀器有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；RMB 9044奧豪斯電子天平（上海書培實驗設備有限公司）。乙腈（上海甲美精細化工有限公司）；甲醇（山東浩中化工科技有限公司）；氯仿（山東浩中化工科技有限公司）；乙醇（山東浩中化工科技有限公司）；正己烷（山東浩中化工科技有限公司）；石油醚（30-60℃）（山東浩中化工科技有限公司）；甲酸乙酯（南京維之誠化學試劑有限公司）；甲酸（南京維之誠化學試劑有限公司）。

2 方法與結果

2.1 單因素考察

2.1.1 藥材粉碎

分別選用五味子藥材最初粉、粗粉、細粉進行水提，結果最粗粉、粗粉、細粉的水煎液呈乳濁狀，難以用常規方法濾過，確定以五味子藥材為原料進行試驗。

2.1.2 提取次數

取五味子，加12倍量水，浸泡5小時，回流提取1小時，過濾，濃縮提取膏，將藥渣加12倍量水，回流提取1小時，過濾，濃縮提取膏，再將藥渣加12倍量水，回流提取1小時，過濾，濃縮提取膏。

2.1.3 加水倍數

取五味子，分別提取三次，回流提取時間為1小時，第一次加10倍水，浸泡5小時，連續三次，第二次加12倍水，浸泡5小時，連續三次，第三次加14倍水，浸泡5小時，連續三次，分別過濾，合并濾液，減壓濃縮。

2.1.4 提取時間

取五味子，分別提取三次，加12倍水，浸泡5小時，第一次回流提取時間為1小時，連續三次，第二次回流提取時間為1.5小時，連續三次，第三次回流提取時間為2.0小時，連續三次，別過濾，合并濾液，減壓濃縮。

2.2 正交試驗設計

選擇提取次數、加水倍數和提取時間作為考察因素，采用正交試驗法對影響提取效率的其它工藝條件進行優選。采用3個考察水平，用L9（34）正交表進行試驗，因素水平表見表1。

3 質量標準研究

3.1 檢查應符合《中國藥典》2015版附錄顆粒劑通則項下的檢查項目。重金屬不得超過百萬分之二十、砷鹽不得超過百萬分之十。

3.2 含量測定

3.2.1 色譜條件。色譜柱為KromasilTM C18（250mm×4.6mm，5μm）；乙腈-水（68：32），為流動相；檢測波長為224nm；流速1.0mL·min-1。

3.2.2 供試品溶液的制備。取五味子配方顆粒劑，精密稱定，精密加水20ml，超聲使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加正己烷萃取提取4次，每次20毫升，合并正己烷提取液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解（溶解時加少量氯仿），轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾。取續濾液，即得。量取提取濃縮膏適量，加一倍水稀釋，加正己烷萃取提取4次，每次50毫升，合并正己烷提取液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解（溶解時加少量氯仿），轉移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過濾。取續濾液，即得。

3.2.3 對照品溶液的制備。精密稱取五味子醇甲對照品，用甲醇超聲溶解并稀釋至每1mL溶液中含五味子醇甲30μg的對照品溶液。

4 鑒別

供試液制備：取五味子配方顆粒劑，精密加水20ml，超聲使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次20ml.將氯仿層蒸干，殘渣加氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液。對照藥材溶液的制備：取五味子，加氯仿20ml.回流提取30分鐘，將氯仿蒸干，殘渣加氯仿1ml使溶解，作為對照藥材溶液。對照品溶液制備：取五味子醇甲對照品，加氯仿制成每lml含1mg的溶液，作為對照品溶液。陰性對照液制備：取五味子配方顆粒劑的輔料，精密加水20ml，超聲使溶解，放冷，置于分液漏斗中，加氯仿萃取3次，每次20ml.將氯仿層蒸干，殘渣加氯仿1ml使溶解，作為陰性對照液溶液。分別將供試液、對照藥材溶液、陰性對照液、對照品溶液點于硅膠CF254加0.3%羧甲基纖維素鈉的自制板，以石油醚（30-60℃）一甲酸乙酯-甲酸（15：5：l），置紫外光燈（254nm）下檢視。

5 實驗結果

按照L9（34）正交設計表條件進行試驗，得到最佳提取工藝為加12倍量水，浸泡5小時，回流提取3次，每次1.5小時。本工藝穩定、可行、收率高，本質量標準可以用于五味子配方顆粒劑的質量控制。

參考文獻

[1]齊治，崔景榮，田建柱，秦波，樓之岑.五味子果實揮發油對中樞神經系統的藥理作用研究[J].北京醫科大學學報，1988（06）.

[2]陳延鏞，舒增寶，黎蓮娘.五味子的研究——北五味子降谷丙轉氨酶有效成分的分離和鑒定[J].中國科學，1976（01）.

[3]劉濤，蔡紹先，汪達麗，陳瑋瑩，鄒立，鄭宇瓊，溫博貴.五味子對急性四氯化碳中毒大鼠肝整合素α1的影響[J].醫學臨床研究，2008（12）.

[4]熊雅婷，黃芳，徐麗華，竇昌貴，馬世平.五味子提取物對小鼠睡眠剝奪后腦組織自由基和一氧化氮的影響[J].中國藥科大學學報，2006（03）.

[5]王雯雯，仰榴青，李永金，吳向陽，鄒艷敏，趙江麗.南、北五味子提取物對小鼠鎮靜、催眠作用的影響[J].江蘇大學學報（醫學版），2008（02）.