春上枝頭洗發水質量控制研究

陳萍，李娜，薛佩蕓，趙宏

(1.陜西中醫藥大學，陜西咸陽712046；2.陜西省中醫藥研究院，陜西西安710003；3.蘇州春上枝頭化妝品有限公司，江蘇蘇州215300）

·實驗研究·

春上枝頭洗發水質量控制研究

陳萍1，2，李娜1，薛佩蕓1，趙宏3

(1.陜西中醫藥大學，陜西咸陽712046；2.陜西省中醫藥研究院，陜西西安710003；3.蘇州春上枝頭化妝品有限公司，江蘇蘇州215300）

目的研究春上枝頭洗發水的質量控制方法。方法采用薄層色譜法對方中人參、丹參、川芎、當歸、何首烏、苦參進行鑒別；采用加水稀釋及柱層析除雜法制備測定樣品；采用紫外分光光度法(UV法)測定總皂苷含量，繪制標準曲線，制訂回歸方程，計算人參總皂苷含量。結果薄層色譜鑒別靈敏、專屬性好、準確性高、重復性好。總皂苷（以人參皂苷Re計）進樣量在0.101～0.606 mg范圍內與吸光度線性關系良好（r＝0.999 3）；平均回收率為94.87%～98.57%，RSD為0.70%～4.82%（n＝6）。結論該方法可用作春上枝頭洗發水的質量控制方法。

春上枝頭洗發水；薄層色譜鑒別；人參總皂苷；含量測定

春上枝頭洗發水由人參、丹參、女貞子、川芎、當歸、白芷、何首烏、補骨子、苦參、側柏葉、土荊皮、旱蓮草、桑葉組方，其傳承了清代外治吳師機所著《理論駢文》[1－2]中“各種湯劑都可以制成外用之方”之洗法，采用高壓滲漉萃取工藝[3]、微乳靶向給藥技術[4]研制而成，具有洗發、養發、護發、控油、固根、密發、生發功效的外洗產品。方中人參具有抗癌、護膚、護發功能[5]，其主要活性物質人參皂苷類[6]（人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Re、人參皂苷Rd及其苷元）的羥基與頭發角朊中的親水基團生成氫鍵，大量皂苷被吸入頭發纖維內部而起到護發作用，人參中多種活性多肽、氨基酸、有機酸、糖等重要營養物質，在養護洗發水產品中能增加頭皮營養、保護頭發、增強發質[7－9]，還可以防止與減少脫發，促進頭發生長發育[10]，從而減少斷發和脫發。本研究中采用紫外分光光度法(UV法)測總皂苷含量，以人參總皂苷為本品的定量質控指標；采用薄層色譜（TLC）法對人參、丹參、川芎等組方藥材進行了定性鑒別研究，擬控制洗發水的質量。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U－2910型紫外分光光度計（日本日立公司）；AG285型雙量程電子天平(美國梅特勒－托利多公司)；101型電熱鼓風恒溫烘箱(北京市永光明醫療儀器廠)；SK2200H型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；溶劑過濾器(Millipore)；HH－S4型恒溫水浴鍋（上海科偉儀器公司）；BP211D型電子天平(美國梅特勒公司，十萬分之一)，PB1502－S型天平(美國梅特勒公司，千分之一)；SYNSV0000型純水機(Millipore)。

1.2 試藥

對照品：人參皂苷Rg1(批號為913－9960)，人參皂苷Re(批號為120955－200607，供含量測定用)，人參皂苷Rb1(批號為121028－200608)，擬人參皂苷F11 (批號為110841－200404)，丹參酮ⅡA(批號為121117－200605)，阿魏酸對照品（批號為110773－201012，供含量測定用），人參皂苷Re對照品（批號為110754－200421，供含量測定用），均購于中國食品藥品檢定研究院。

對照藥材：人參對照藥材（批號為0719－9905），三七對照藥材（批號分別為0941－9803，120941－200506），西洋參對照藥材（批號為0997－9804），黃芪對照藥材（批號為121462－200702），川芎對照藥材（批號為120918－200809），當歸(批號為120927－201315)，何首烏(批號為120934－20140)，苦參(批號為121019－201407)，均購自中國食品藥品檢定研究院。

試劑：甲醇、乙腈（Fisher)為色譜純，三氧化二鋁、香草醛、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、冰乙酸、高氯酸、乙醚、乙醇等均為分析純，水為超純水。自制硅膠G板、GF254板（薄層層析硅膠，青島海洋化工有限公司）。

供試品：規格為每瓶120mg，批號分別為20170312，20170316，20170320，由陜西省中醫醫院制劑中心提供。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 人參

取本品內容物10 g，加水30mL，超聲處理20min，加乙醚50m L萃取，棄去乙醚液，下層溶液繼以水飽和的正丁醇50m L輕搖萃取，放置分層，吸取上清液，加3倍量以正丁醇飽和的水（150m L），搖勻，放置分層，取正丁醇層，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加甲醇4m L使溶解，作為供試品溶液。再依據處方，取不含人參的其他藥材，按照洗發水制備工藝和供試品溶液的制備方法制備缺人參的陰性溶液，作為陰性對照品溶液。另取人參對照藥材，同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再取三七皂苷R1，加甲醇制成每1m L含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。按2015年版《中國藥典(一部)》通則（0502)試驗[11]，吸取上述4種溶液各2μL，分別點于同一以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外燈（365 nm）下檢視。

供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點；置紫外光（365 nm）下檢視，顯相同的熒光斑點。陰性對照品溶液無此斑點，故將其列入標準正文中。由于三七、西洋參均含有人參類皂苷，本研究中進行了人參、三七、西洋參三者的薄層色譜鑒別比較，以保證產品的質量。色譜圖見圖1和圖2。

2.1.2 丹參

1.人參對照藥材溶液2.混合對照品溶液（Rg1＋Rb1＋R1）3－5.供試品溶液（批號20170312，20170316，20170320）6.陰性對照品溶液7.人參藥材溶液A.日光檢視B.紫外燈（365 nm）檢視圖1人參薄層色譜圖

1.混合對照品溶液（R1＋Rb1＋Rg1＋Re）2.人參藥材溶液3.西洋參藥材溶液4.擬人參皂苷F11對照品溶液5.三七藥材溶液6.三七皂苷R1對照品溶液圖2人參與三七、西洋參薄層色譜圖(365 nm紫外燈檢視)

取本品內容物10 g，置具塞三角瓶中，加水10m L，超聲處理20min，加乙酸乙酯12mL，密塞，振搖10min，放置1 h靜置分層，分取乙酸乙酯層約5 m L作為供試品溶液。另取丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯制成每1m含1 mg溶液，作為對照品溶液。再取丹參對照藥材，同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再按洗發水制備方法制成缺丹參藥材的制劑，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。按2015年版《中國藥典(一部)》通則（0502)試驗，吸取上述4種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二甲苯－乙酸乙酯（9∶1）為展開劑展開，晾干。

供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同的暗紅色斑點，而陰性對照無干擾，故收入標準正文。色譜圖見圖3。

1，7.丹參對照藥材溶液2.丹參酮ⅡA對照品溶液3－5.供試品溶液（批號20170312，20170316，20170320）6.陰性對照品溶液圖3丹參薄層色譜圖（日光檢視）

2.1.3 川芎與當歸

取本品內容物10 g，加乙醚30mL，置水浴上加熱回流10min，取出，放冷，分取乙醚層，揮去乙醚至約5m L作為供試品溶液。分別取川芎、當歸對照藥材1 g，按供試品溶液制備方法，分別制成對照藥材溶液。再按洗發水的制備方法制成缺川芎、當歸藥材的制劑，按供試品溶液的制備方法制成雙陰性對照品溶液。按2015年版《中國藥典(一部)》通則（0502)試驗，分別吸取上述4種溶液各10μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（3∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。

供試品色譜中，在與對照藥材相應位置上顯相同顏色的斑點，雙陰性對照無干擾，該方法納入質量標準中。色譜圖見圖4。

2.1.4 何首烏

取本品內容物10 g，置具塞三角瓶中，加水10m L，超聲處理20 min，加乙酸乙酯12 mL，密塞，振搖10 min，靜置1 h分層，分取乙酸乙酯層約5 m L作為供試品溶液。取何首烏對照藥材2 g，同法制成對照藥材溶液。再按洗發水的制備方法制成缺何首烏藥材的制劑，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。取何首烏對照藥材，按供試品溶液制備方法，制成對照藥材溶液。按2015年版《中國藥典(一部)》通則（0502)試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（5∶2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。

1.川芎對照藥材溶液2－4.供試品溶液（批號20170312，20170316，20170320）5.缺川芎、當歸雙陰性對照品溶液6.當歸對照藥材溶液圖4川芎、當歸薄層色譜圖（254 nm紫外燈檢視）

供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同橙色熒光斑點，置氨氣中熏后，斑點變為橙紅色，陰性對照無干擾，色譜圖見圖5。

1－3.供試品溶液（批號20170312，20170316，20170320）4.何首烏對照藥材溶液5.陰性對照品溶液6.何首烏藥材溶液圖5何首烏薄層色譜圖（365 nm紫外燈檢視）

2.1.5 苦參

取本品20 g，加水20mL，加氯仿50mL、濃氨試液1.0m L，振搖提取，取氯仿液，蒸干，殘渣加氯仿1m L使溶解，作為供試品溶液。取苦參對照藥材1 g，按供試品溶液制備方法，分別制成對照藥材溶液。再按洗發水的制備方法制成不含苦參藥材的制劑，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。按2015年版《中國藥典(一部)》通則（0502)試驗，吸取上述3種溶液各2μL，分別點于同一以0.4%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿－甲醇－濃氨（8∶2∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。

供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上，顯相同橙紅色斑點，陰性對照無干擾，該法納入質量標準中，色譜圖見圖6。

1－3.供試品溶液（批號20170312，20170316，20170320）4.陰性對照品溶液5.苦參對照藥材溶液圖6苦參薄層色譜圖（日光檢視）

2.2 總皂苷含量測定

2.2.1 溶液制備

對照品溶液：稱取人參皂苷Re對照品50.48 mg，精密稱定，用甲醇溶解并定容至50m L，即得每1m L含人參皂苷Re 1.01mg的對照品溶液。

供試品溶液：取春上枝頭洗發水5 g，精密稱定，置100m L容量瓶中，用水溶解并稀釋至100 mL刻度。樣品凈化，用15mL層析管，內裝8m LAmberlite－XAD－2大孔樹脂，加上1 cm中性氧化鋁。柱預先活化，先用25 m L 75%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25 m L水洗柱，棄去洗脫液。在活化后的柱上精密加入1 m L已處理好的試樣溶液，用25 m L水洗柱，棄去淋洗液，用25 mL 75%乙醇洗脫人參皂苷，收集洗脫液置50mL容量瓶中，并用75%乙醇稀釋至50m L刻度，作為供試品溶液。

2.2.2 檢測波長選擇

精密移取人參皂苷Re對照品溶液和供試品溶液各0.1m L于具塞試管中，氮氣吹干溶劑，分別加入新配制的5%香草醛－冰乙酸溶液0.2m L，高氯酸0.8m L，溶液呈玫瑰紅色，在60℃的水浴中加熱15min，冰水冷卻，加入冰乙酸5m L，搖勻，放置20min，以隨行試劑為空白，在400～700 nm波長下掃描，確定最大吸收波長為590 nm，詳見圖7。

2.2.3 方法學考察

A.人參皂苷Re B.樣品圖7紫外－可見光譜掃描圖

標準曲線制備：分別精密量取上述對照品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.40，0.60 m L，置具塞試管中，氮氣吹干溶劑，加入新配制的5%香草醛－冰乙酸溶液0.2m L，高氯酸0.8m L，溶液呈玫瑰紅色，在60℃水浴中加熱15min，冰水冷卻，加入冰乙酸5mL，搖勻，放置20min，隨行試劑為空白，照分光光度法，在590 nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標（Y）、質量濃度為橫坐標（X）繪制標準曲線。結果表明，總皂苷進樣量在0.101～0.606mg范圍內與峰面積線性關系良好，回歸方程為Y＝0.002 5X－0.073 9，R2＝0.999 3(n＝7)。

檢測限確定：根據《保健食品衛生檢驗方法理化部分總則》GB/T5009.1－2003附錄A中的要求，本標準方法的檢出限為0.002 5 g/100 g。

精密度試驗：取供試品溶液（批號為20170312）0.1mL置具塞試管中，按標準曲線制備項下方法操作，連續測定6次。結果的RSD為0.1%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：對照品重復性試驗，取上述人參皂苷Re對照品溶液（1.01 mg/mL）40μL，并依法測定吸光度，測得RSD為1.78%，說明方法重復性良好。供試品重復性試驗，取上述供試品溶液（批號為20170312）0.1m L，并按標準曲線制備項下方法重復測定6次，測得RSD為3.68%，說明方法重復性良好。

穩定性試驗：取供試品溶液（批號為20170312）0.1mL置具塞試管中，按標準曲線制備項下方法操作，每隔1 h測定1次吸光度，連續測定6 h，觀察其穩定性。結果的RSD為1.2%(n＝6)，表明供試品溶液在6 h內顯色穩定。

方法重復性試驗：取樣品（批號為20170312）6份，精密稱定，按2.2.1項下供試品溶液制備方法制備樣品，并按標準曲線制備項下方法測定吸光度，計算。測得樣品含人參皂苷Re 5.52mg/g，結果的RSD為3.97% (n＝6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：按上述檢驗方法，選用3個空白樣品，分別加入3個水平的人參皂苷Re對照品溶液（1.01 g/L）各20，40，80μL，按標準曲線制備項下方法依次分析，重復6次。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n＝6）

2.2.4 樣品含量測定

取3批樣品(批號為20170312，20170316，20170320)各3份，精密稱定，按2.2.1項下方法制備供試品溶液。分別吸取供試品溶液各0.1m L置具塞試管中，氮氣吹干溶劑，加入新配制的5%香草醛－冰乙酸溶液0.2mL，高氯酸0.8 m L，溶液呈玫瑰紅色，在60℃水浴中加熱15min，冰水冷卻，加入冰乙酸5m L，搖勻，放置20min，于590 nm波長處與標準管采用比色法測定。3批樣品人參總皂苷含量分別為5.42，6.32，4.83mg/g。

根據多批樣品實測數據，考慮到藥材來源、制劑生產、貯藏等可能的誤差因素，結合現行藥典，暫定本品含總皂苷以人參皂苷Re計每克不得少于4.0mg。

3 討論

依據皂苷理化性質及文獻[12－15]，分別采用熱回流、超聲方法。結果表明，回流、超聲測得人參皂苷含量基本一致，故確定室溫加水溶解及過柱除雜質法，提取率最高且其他組分干擾小。本研究中對女貞子、白芷、補骨子、側柏葉、土荊皮、旱蓮草、桑葉進行了薄層色譜鑒別，但陰性樣品存在干擾，故暫不能納入指控標準，有待進一步研究。

目前，對多效天然植物洗發液大多以配方、工藝研究為主，對洗發類產品中植物的定性鑒別缺乏依據，本研究中提升了藥用洗發液的定性定量質控標準，但還需對作用機制進行深入研究。

隨著市場的發展、競爭的加劇以及消費群體需求的不斷提高，開發具有性能突出與功能奇特的洗發液乃是大勢所趨，集養發、柔軟、護發、美觀和藥物治療等的產品會更加引人注目，研制的洗發產品市場缺口較大，今后的社會效益、經濟效益顯著。

[1]吳師機.理論駢文：外治醫說[M].北京：人民衛生出版社，1956：1－2.

[2]王軍，曹建春.理瀹駢文(中醫經典誦讀叢書)(新校版)[M].北京：人民軍醫出版社，2006：7－9.

[3]陳瑞戰.超高壓提取人參皂苷工藝及機理研究[D].長春：吉林大學，2005.

[4]寇欣.微乳給藥系統的研究進展[J].天津藥學，2005，17(6)：49－52.

[5]朱炳泉.人參的抗癌、護膚、護發三功能[J].人人健康，1988(1)：10－11.

[6]楊啟輝.人參與美容化妝品[J].中國化妝品，1997(4)：32.

[7]逄世峰，李亞麗，許世泉，等.人參不同部位人參皂苷類成分研究[J].人參研究，2015，27(1)：5－8.

[8]萬玉華，蔣日瓊，劉丹丹，等.人參活性物質的提取及人參柔順洗發水的研制[J].香料香精化妝品，2011(5)：29－32.

[9]孫旭.鮮人參在洗護產品中的應用[J].口腔護理用品工業，2011，21(6)：42－44.

[10]張瑞，閆梅霞，許世泉，等.人參美容護發功效研究現狀[J].日用化學工業，2014，44(3)：163－166.

[11]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：8.

[12]楊云，馮衛生.中藥化學成分提取分離手冊[M].北京：中國中醫藥出版社，1998：89－91.

[13]張娟，路金才.皂苷的提取方法及含量測定研究進展[J].中國現代中藥，2006，8(3)：25－28.

[14]岳展鵬，王賢英.紫外分光光度法測定參芪三七膠囊中總皂苷含量[J].中國藥業，2017，26(1)：22－24.

[15]萬玉華，張榕文，徐靜，等.人參柔順洗發水中人參皂苷的鑒別和含量測定[J].日用化學工業，2011，41(5)：384－387.

Quality Control of Chunshangzhitou Sham poo

Chen Ping1，2,Li Na1,Xue Peiyun1,Zhao Hong3
(1.Shaanxi University of Chinese Medicine,Xianyang,Shaanxi,China 712046;2.Shaanxi Province Chinese Medicine Research Institute, Xi′an,Shaanxi,China 710003;3.Suzhou Chunshangzhitou Cosmetics Limited,Suzhou,Jiangsu,China 215300)

Ob jective To study the quality control of Chunshangzhitou shampoo.M ethods Thin Layer Chromatography(TLC)was used to identify Panax Ginseng,Salvia Miltiorrhiza,Ligusticum Chuanxiong,Angelia Sinensis,Fallopia Multiflora and Sophora Flavescens.The samples were prepared by dilution with water and purified by column chromatography.The content of total saponins in Chunshangzhitou shampoo was determined by UV,the standard curve was drawn and the regression equation was developed to calculate the total Ginseng saponin content.Results The identification by TLC was sensitive,good specificity,high accuracy and good repeatability,the total recovery rate saponins(Ginsenoside Re)was linear in the range of 0.101－0.606 mg(r＝0.999 3),the average was 94.87%－98.57%,RSD was 0.70%－4.82%(n＝6).Conclusion The method can be used for quality control of the Chunshangzhitou shampoo.

Chunshangzhitou shampoo;TLC;total Ginseng saponins;content determination.

R284.2

A

1006－4931(2017)09－0005－05

2017－01－10；

2017－02－29)

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.09.002

陜西省中醫藥管理局科研項目[zy20]。

陳萍(1964－)，女，研究員，研究生導師，研究方向為中藥精細化學與中藥新藥，（電子信箱）cp3049033＠163.com。