荊防除濕茶薄層色譜鑒別研究

周涓，楊瑜珍，陳華杏，劉廷利，彭鎮耀

（廣東省湛江市第一中醫醫院，廣東湛江524043）

·檢驗檢測·

荊防除濕茶薄層色譜鑒別研究

周涓，楊瑜珍，陳華杏，劉廷利，彭鎮耀

（廣東省湛江市第一中醫醫院，廣東湛江524043）

目的建立鑒別荊防除濕茶的薄層色譜（TLC）法。方法通過TLC法對荊防除濕茶中的荊芥和枳殼進行鑒別。結果在荊防除濕茶中檢出荊芥和枳殼，斑點明顯，色譜帶清晰，陰性無干擾。結論該方法重復性好，溫度、相對濕度對TLC鑒別的效果無明顯影響，可用于荊防除濕茶的質量控制，但處方中其他成分的鑒別還需繼續研究。

荊防除濕茶；荊芥；枳殼；薄層色譜鑒別

荊防除濕茶是湛江市第一中醫醫院根據荊防沖劑改進劑型而成的醫療機構制劑[批準文號粵ZB20112354(Z)]。荊防沖劑收錄于衛生部頒藥品標準，可發汗解表，散風祛濕，具有解表、祛風、透疹的功效，臨床主要用于治療風寒感冒、頭痛身痛、惡寒、無汗、鼻塞流涕、咳嗽等外感風寒[1]。荊防除濕茶中，羌活、獨活辛濕發散，一上一下，通治用周身風寒濕邪而止頭身疼，為君藥；荊芥、防風祛風散寒除濕力較強，柴胡辛散解肌，川芎活血祛風，善止頭痛，共為臣藥；桔梗宣肺，枳殼降氣，一升一降，寬胸利氣，前胡化痰，茯苓滲濕，四藥合用，調氣肌，利肺氣，除痰濕，止咳嗽，共為佐藥；甘草調和諸藥，兼益氣和中為佐使之用。諸藥合用，共奏解表、祛風、透疹，治外感風寒之功效。荊防除濕茶在我院經歷了幾十年臨床使用和檢驗，療效顯著，深受患者歡迎。為進一步規范荊防除濕茶質量標準，參考相關標準[2－3]和文獻[4－15]，對處方中荊芥和枳殼進行薄層色譜（TLC）法鑒別，對原有質量標準進行了全面修訂增補。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ZF－20D型暗箱式紫外分析儀，SHZ－D(Ⅲ)型循環水式真空泵，旋轉蒸發器，ZKSY－10S型電子恒溫不銹鋼水（油）浴鍋，均購于鞏義市予華儀器有限責任公司；電熱鼓風干燥箱（北京中興偉業儀器有限公司）。

1.2 試藥

荊防除濕茶（醫院自制，批號分別為141021，141127，150119），原料藥材均購于北京同仁堂（集團）有限責任公司；荊芥對照藥材（批號為1104－20012），枳殼對照藥材（批號為981－9301），均購于中國食品藥品檢定研究院；硅膠G（青島海洋化工廠，批號為0131106），預制板（青島海洋化工廠分廠，批號為20131118），規格均為10 cm×20 cm，厚0.20～0.25mm；玻璃點樣毛細管（華西醫科大學儀器廠，規格為0.3mm）；香草醛（分析純），三氯化鋁（分析純），硫酸（含量為98%），均購于國藥集團化學試劑有限公司；其他試劑（市售）均為分析純。

2 方法與結果

2.1 處方與制備

處方：枳殼、川芎、甘草各1 000 g，防風、羌活和茯苓各1 500 g，荊芥、防風、羌活、獨活、柴胡、前胡、川芎、枳殼、茯苓、桔梗、甘草各1 200 g。

制法：按處方工藝，將荊芥、獨活、枳殼粉碎成粗粉備用，其他藥材水煮提取2次，每次1.5 h，合并2次藥液，濾過，濾液濃縮至稠膏狀，加入3味藥材粗粉，混勻，低溫干燥，粉碎，分裝，即得。共制1 000包，每袋含藥粉12 g。

制劑質量控制：成品為黃棕色粗粉及粉末，氣微香，味苦，水分含量不超過12%，符合2010年版《中國藥典（一部）》茶劑項下各項有關規定。貯存條件為密閉干燥環境。

2.2 溶液制備

荊芥供試品溶液：取3批荊防除濕茶，各5 g，置50m L單口燒瓶，加入石油醚(60～90℃)20mL，密塞，振蕩攪拌使藥粉充分浸潤，靜置過夜；分別濾過，濃縮濾液至1m L，即得。

枳殼供試品溶液：取3批荊防除濕茶，各5 g，置50m L單口燒瓶，加入甲醇20m L，超聲處理30min，分別濾過，濾液蒸干，殘渣各加甲醇5m L，溶解，即得。

荊芥對照品溶液：取荊芥對照藥材5 g，粉碎，置50m L單口燒瓶，加入石油醚（60～90℃）20 mL，密塞，振蕩攪拌使藥粉充分浸潤，靜置過夜，濾過，濃縮濾液至1m L，即得。

枳殼對照品溶液：取枳殼對照藥材5 g，粉碎，置50mL單口燒瓶，加甲醇20mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5m L溶解，即得。

缺荊芥陰性對照溶液：取處方中除荊芥之外的10味藥，按處方比例及制法制成缺荊芥藥材的陰性對照樣品。取相當于供試品的量，置50mL單口燒瓶，加入石油醚（60～90℃）20m L，密塞，振蕩攪拌使藥粉充分浸潤，靜置過夜，濾過，濃縮濾液至1m L，即得。

缺枳殼陰性對照溶液：取處方中除枳殼之外的10味藥，按處方比例及制法制成缺枳殼藥材的陰性對照樣品。取相當于供試品的量，置50mL單口燒瓶，加甲醇20m L，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5m L溶解，即得。

2.3 預試驗

2.3.1 TLC色譜條件選擇

荊芥：取荊芥供試品溶液和對照品溶液，點在同一薄層板上，取3個相同的薄層色譜板，采用石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯（9∶1），正己烷－乙酸乙酯（9∶1），正己烷－乙酸乙酯(17∶3)展開體系分離。噴以5%香草醛硫酸溶液，105℃下加熱顯色。結果，正己烷－乙酸乙酯(17∶3)展開效果較佳，斑點分離良好，色譜清晰，斑點無拖尾現象。荊芥的TLC鑒別以正己烷－乙酸乙酯(17∶3)作為展開劑，以5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，105℃加熱檢視。

枳殼：取枳殼供試品溶液和對照品溶液，點在同一薄層板上，取3個相同的薄層色譜板，采用乙酸乙酯－丁酮－甲醇－水(10∶7∶1∶1)、甲苯－乙酸乙酯－甲醇(13∶7∶2)和三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)下層溶液展開體系分離。噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，105℃下加熱5min，紫外光燈(365 nm)下檢視。結果，三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)下層溶液展開效果較佳，斑點分離良好，色譜清晰，斑點無拖尾現象。枳殼的TLC鑒別以三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)的下層溶液作為展開劑，以3%三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑，105℃加熱后，置紫外燈（365 nm）下檢視。

2.3.2 TLC鑒別

荊芥：2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB照薄層色譜法試驗，分別用點樣毛細管吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液各10μL，點于同一硅膠G薄層板的同一水平位置上；以正己烷－乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，上行展開至距離薄層板上緣約5 mm處；取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至顯色清晰。觀察可見，在與對照藥材溶液色譜相應位置上，供試品溶液色譜中顯相同顏色的斑點，陰性對照溶液色譜中無對應斑點。其色譜圖見圖1 A。

枳殼：照2010年版《中國藥典（一部）》附錄ⅥB薄層色譜法試驗，分別用點樣毛細管吸取供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液各8μL，點于同一硅膠G薄層板的同一水平位置上，以三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)下層溶液為展開劑，上行展開至距離薄層板上緣約5mm處，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105℃加熱約5 min，置紫外光燈(365 nm)下檢視。可見，在與對照藥材溶液色譜相應位置上，供試品溶液色譜中顯相同顏色的斑點，陰性對照溶液色譜中無對應斑點，其色譜圖見圖1 B。

1－3.供試品溶液（批號分別為141021，141127，150119）4.陰性對照溶液5.對照藥材溶液A.荊芥（T＝25℃，RH＝70%）B.枳殼（T＝25℃，RH＝50%）圖1樣品薄層色譜圖

2.4 試驗條件選擇

薄層板選擇：按擬訂方法進行試驗，于溫度（T）為25℃、相對濕度（RH）為70%條件下，分別取手鋪板和預制板，結果兩者對鑒別無影響，其色譜圖見圖2。

溫度選擇：取點樣后的薄層板，分別于6℃和30℃中展開，顯色，檢視。結果兩者對鑒別無影響，其色譜圖見圖3。

濕度選擇：取點樣后的薄層板，分別在用硫酸調節RH為32%和88%的層析缸中展開，顯色，檢視。結果兩者對鑒別無影響，其色譜圖見圖4。

3 討論

3.1 方法學考察

由圖1可見，3批供試品溶液均在荊芥對照藥材溶液的相同位置顯相同斑點，同時缺荊芥的陰性對照溶液在對應位置無斑點，表明該斑點系荊芥特有組分，且該組分存在于受試制劑中，實現了對荊防除濕茶中荊芥的定性鑒別；3批供試驗的荊防除濕茶中都在枳殼對照藥材的相同位置顯示相同斑點，同時缺枳殼的陰性對照溶液在對應位置無斑點。表明該斑點系枳殼特有組分，從而實現了對處方中枳殼的定性鑒別。由圖2可知，本研究中建立的薄層色譜鑒別方法在手鋪硅膠G板與預制板上的分離效果無明顯差異。圖3表明，在6～30℃條件下，對鑒別無明顯影響；圖4表明，RH為32%～88%時，對鑒別無明顯影響。

1－3.供試品溶液（批號分別為141021，141127，150119）4.對照藥材溶液A.荊芥（T＝25℃，RH＝70%）B.枳殼（T＝25℃，RH＝70%）圖2薄層板影響因素考察薄層色譜圖

3.2 色譜板、展開劑選擇

B1（T＝30℃，RH＝70%）1－3.供試品溶液（批號分別為141021，141127，150119）4.對照藥材溶液A.荊芥B.枳殼圖3溫度影響因素考察薄層色譜圖

由預試驗可知，不同的展開劑分離效果不同。荊芥和枳殼適宜展開劑分別是正己烷－乙酸乙酯(17∶3)和三氯甲烷－甲醇－水(32∶17∶5)下層溶液；顯色劑分別以5%香草醛硫酸溶液和3%三氯化鋁乙醇溶液為佳；顯色時均需加熱至105℃；而枳殼的TLC圖置紫外燈（365 nm）更為清晰可辨。由圖1可知，3批供試品溶液的色譜重復性良好。

B1（T＝25℃，RH＝88%）1－3.供試品溶液（批號分別為141021，141127，150119）4.對照藥材溶液A.荊芥B.枳殼圖4相對濕度影響因素考察薄層色譜圖

綜上所述，本研究中建立的TLC鑒別方法，可在不同溫度、濕度和不同薄層板上適用，且對鑒別效果無明顯影響。本研究中參考了2010年版《中國藥典(一部)》中相關處方中相關組分的TLC鑒別方法，經過反復試驗，探究出了對荊防除濕茶中荊芥和枳殼二味藥材組分的TLC定性鑒別方法，展開劑選擇得當，譜圖清晰，特征鑒別組分明顯，方法重復性好，可對荊防除濕茶進行質量控制，為相應指標的建立和相關其他制劑的TLC鑒別提供了參考。不足之處在于，對本處方中其他藥材進行薄層色譜研究時，均表現出陰性干擾大或色譜斑點不清晰等狀況，仍有待進一步研究。

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TLC Identification of Jingfang Elim inating Dam pness Tea

Zhou Juan,Yang Yuzhen,Chen Huaxing,Liu Tingli,Peng Zhenyao
(Zhanjiang First Traditional Chinese Medicine Hospital,Zhanjiang,Guangdong,China 524043)

Ob jective To establish a TLC method for the identification of Jingfang Eliminating Dampness Tea.M ethods The TLC method was used to distinguish the Nepeta Cataria and Fructus Aurantii in Jingfang Eliminating Dampness Tea.Results The Nepeta Cataria and Fructus Aurantii were identified by TLC,the spots were clear and the bands were clear,the negative results were with no disturbance.Conclusion The method has good reproducibility,the temperature and humidity has no significant effect on TLC,it can be used for the quality control of Jingfang Eliminating Dampness Tea.However,the identification of other ingredients in the prescription needs to be further studied.

Jingfang Eliminating Dampness Tea;Nepeta Cataria;Fructus Aurantii;TLC

R284.1

A

1006－4931(2017)09－0022－05

2017－01－06；

2017－02－16)

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.09.007

周涓，女，副主任藥師，研究方向為醫院藥學，（電子信箱）zzqqzzqq83＠163.com。