半滑舌鰨潰瘍病原殺鮭氣單胞菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

周紅霞，姚俊杰，房文紅，李新蒼，趙 姝，王 元，吳俁學(xué)，周俊芳

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院水產(chǎn)科學(xué)系，貴陽 550025；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090）

半滑舌鰨潰瘍病原殺鮭氣單胞菌的
分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

周紅霞1，姚俊杰1，房文紅2，李新蒼2，趙 姝2，王 元2，吳俁學(xué)1，周俊芳2

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院水產(chǎn)科學(xué)系，貴陽 550025；2.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090）

半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis Günther）是廣受我國消費(fèi)者認(rèn)可的名優(yōu)魚類，具有很高的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，然而，隨著工廠化養(yǎng)殖模式的不斷發(fā)展，疾病成為制約半滑舌鰨養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的關(guān)鍵因素，其中，體表潰瘍病為其常見病癥。從嚴(yán)重潰瘍病半滑舌鰨體內(nèi)分離到1株優(yōu)勢菌株HX0416，該菌可在TCBS培養(yǎng)基上生長，并可在綿羊血平板上形成清晰的β-溶血環(huán)；經(jīng)過16S rRNA和rpoD基因序列同源性分析并結(jié)合生化特性鑒定為殺鮭氣單胞菌（Aeromonas salmonicida）。健康半滑舌鰨幼魚感染試驗(yàn)表明，該菌對半滑舌鰨具有較強(qiáng)致病性，感染72 h（1.04×106cfu·mL-1）對攻毒魚的致死率達(dá)91.7%。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，該菌對環(huán)丙沙星、恩諾沙星、諾氟沙星等喹諾酮類和頭孢曲松、頭孢吡肟等頭孢菌素類藥物比較敏感，而對硫酸新霉素、土霉素等氨基糖苷類和四環(huán)素類藥物多重耐藥，尤其是對磺胺甲噁唑、氨芐西林等磺胺類和β-內(nèi)酰胺類藥物嚴(yán)重耐藥。

半滑舌鰨；殺鮭氣單胞菌；潰瘍病；生化特征；藥敏試驗(yàn)

半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis Günther）屬鰈形目（Pleuronectiformes），舌鰨科（Cynoglossidae），舌鰨屬，主要分布于我國黃渤海海域。半滑舌鰨生長速度快，營養(yǎng)豐富，味道鮮美，具很高的營養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是倍受消費(fèi)者推崇的名優(yōu)品種，養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大。然而，隨著工廠化、集約化養(yǎng)殖模式的不斷推進(jìn)，半滑舌鰨病害問題日趨嚴(yán)重，臨床常見體表潰瘍病、爛尾病、腹水癥和腸炎病等［1-4］，對半滑舌鰨養(yǎng)殖業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。

到目前為止，研究人員已經(jīng)對半滑舌鰨相關(guān)疾病進(jìn)行了廣泛的探究，但是，由于半滑舌鰨疾病命名的依據(jù)主要是臨床表現(xiàn)，而且在養(yǎng)殖生產(chǎn)中常常呈現(xiàn)兩種以上臨床癥狀并存等原因［1］，導(dǎo)致其病原認(rèn)定存在一定分歧，僅導(dǎo)致半滑舌鰨“潰瘍病”的病原就有多種報(bào)道：徐曉麗等［5］從潰瘍病半滑舌鰨體表病灶、肝臟和腎臟分離得到2株優(yōu)勢菌株，經(jīng)16S rDNA序列分析鑒定為牙鲆腸弧菌（Vibrio ichthyoenteri）和哈維弧菌（V.harveyi）；陳政強(qiáng)等［6-7］從患有嚴(yán)重潰瘍病的半滑舌鰨病灶中分離出4種優(yōu)勢菌，人工感染后確認(rèn)其中哈維弧菌和輪蟲弧菌（V.rotiferianus）均為潰瘍病病原；除了弧菌外，還有報(bào)道認(rèn)為半滑舌鰨潰瘍病與美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種（Photobacterium damselae subsp.piscicida）［2］和鰻利斯頓菌（Listonella anguillarum）［3］的感染密切相關(guān)。本研究從嚴(yán)重潰瘍病半滑舌鰨病灶深處分離到1株優(yōu)勢菌株HX0416，人工感染表明其可導(dǎo)致健康半滑舌鰨幼魚死亡。隨后，本研究利用分子生物學(xué)和生化特征鑒定方法對該分離菌株進(jìn)行了種屬鑒定，并對其藥物敏感性進(jìn)行了檢測，以期為半滑舌蹋潰瘍病的防治提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

江蘇某工廠化養(yǎng)殖（流水養(yǎng)殖模式）的半滑舌鰨發(fā)生嚴(yán)重的皮膚潰瘍病，本研究采集部分瀕死半滑舌鰨，充氧空運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室；健康半滑舌鰨幼魚（≈48.13 g）購自山東半滑舌鰨養(yǎng)殖戶，充氧空運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌分離與純化

用75%的酒精棉對瀕死半滑舌鰨體表消毒后，從病魚的初期潰瘍點(diǎn)深處截取少量潰爛肌肉，用無菌鹽水沖洗并剪碎，劃線接種于2216E海水細(xì)菌培養(yǎng)基（海博），28℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，挑取形態(tài)特征一致的優(yōu)勢菌落再次劃線分離，獲得純培養(yǎng)菌株，命名為HX0416。同時(shí)，把純化后的菌株接種于TCBS平板（海博）和含5%綿羊血營養(yǎng)瓊脂平板上，28℃恒溫箱培養(yǎng)24 h，觀察菌落顏色及形態(tài)特征。

1.2.2 分子鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析

挑取少量純化菌株HX0416，參照細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（天根）說明書提取細(xì)菌基因組DNA，作為PCR模板，分別用下列引物擴(kuò)增分離菌株的16S rRNA和rpoD基因片段。16S rRNA的引物為：正向27F：5′-AGAGTTTGATC（C／A）TGGCTCAG-3′和反向1492R：5′-TACGG（C／T）TACCTTGTTACGACTT-3′［8］，擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性5 min；然后94℃變性1 min，50℃退火1 min，72℃延伸2 min，循環(huán)30次；最后72℃延伸10min；rpoD基因的引物為：正向rpoD 70Fs：5′-ACGACTGACCCGGTACGCATGTA-3′和反向rpoD 70Rs：5′-ATAGAAATAACCAGACGTAAGT T-3′［9］，擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性5 min；然后95℃變性30 s，47℃退火30 s，72℃延伸1 min 20 s，循環(huán)30次；最后72℃延伸5min。PCR產(chǎn)物直接送上海生物工程有限公司測序，所得序列經(jīng)BLAST比對分析序列同源性；同時(shí)，下載GenBank中相似性較高的菌株16S rRNA序列以及已經(jīng)報(bào)道的鲆鰈類潰瘍病相關(guān)病原的16S rRNA序列，采用MEGA 7.0軟件包中的Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，并通過自舉分析進(jìn)行置信度檢測，自舉數(shù)據(jù)集為1 000次。

1.2.3 生理生化特征

對純化菌株HX0416進(jìn)行革蘭氏染色，確定菌的形態(tài)特性。然后，參照法國生物梅里埃公司API 20NE試劑條說明書對菌株進(jìn)行生化鑒定，參考魚類細(xì)菌性病原生化特征［10］進(jìn)一步確定分離菌株的特征；同時(shí)，利用梅里埃ATB自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀和相應(yīng)的細(xì)菌鑒定卡對其各項(xiàng)理化指標(biāo)進(jìn)行分析。

1.2.4 藥敏試驗(yàn)

采用文獻(xiàn)［11-13］描述的微量肉湯稀釋法測定分離菌株HX0416對16種常用抗菌藥物（表3）的敏感性。以大腸桿菌ATCC25922作為質(zhì)控菌株，并設(shè)置陽性（無抗生素菌液）和陰性（MH肉湯）對照，將無菌生長的最低藥物濃度視為最小抑菌濃度（MIC）。

1.2.5 健康舌鰨感染實(shí)驗(yàn)

將上述鑒定的純化菌株HX0416接種于含鹽TSB肉湯（TSB+1.5%NaCl）培養(yǎng)，28℃培養(yǎng)24 h后，取1 mL菌液用PBS（0.1 mol·L-1，pH 7.4）作10倍梯度稀釋，得到不同濃度的稀釋菌液（100～109）。根據(jù)分離菌生長狀況和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，取3個(gè)較高稀釋度（107～109）的菌液涂布2216E平板培養(yǎng)，50μL／板，采用平板計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)；同時(shí)，另取3個(gè)較低稀釋度（104～106）的菌液腹腔注射，每個(gè)梯度攻毒12 ind，注射量為100μL ·ind-1，對照組注射等量PBS（0.1 mol·L-1，pH 7.4）。試驗(yàn)組和對照組分別暫養(yǎng)于玻纖桶中（6 ind／桶，2桶／組，桶容積300 L，水量200 L），水溫控制在（21±1）℃。正常投喂顆粒飼料，保持充氧和正常換水，觀察并記錄半滑舌鰨的發(fā)病和死亡情況，持續(xù)觀察7 d。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

患潰瘍病半滑舌鰨體表、頭部呈現(xiàn)不同大小、潰爛程度不一的潰瘍灶，體表粘液增多，嚴(yán)重發(fā)病魚創(chuàng)面大且潰爛出血，病魚瀕死（圖1）；背鰭不同程度潰爛，部分魚還有爛尾現(xiàn)象。該病常年都有發(fā)生，2～3月發(fā)病最為嚴(yán)重；不同養(yǎng)殖池和不同時(shí)期養(yǎng)殖魚的發(fā)病率和死亡率差異較大，嚴(yán)重池發(fā)病率達(dá)90%，死亡率60%。

圖1 患潰瘍病半滑舌鰨Fig.1 A C.sem ilaevis Günther suffering from severe skin ulceration disease

2.2 分離菌特點(diǎn)

潰瘍組織初次在2216E上培養(yǎng)出生長快速、表面光滑、輕微隆起、濕潤、圓形的乳白色優(yōu)勢菌落。純化菌株可以在TCBS培養(yǎng)基生長，菌落為黃色，直徑約0.2 cm；在綿羊血平板上出現(xiàn)清晰的β-溶血環(huán)。革蘭氏染色鑒定為G-短桿菌，命名為菌株HX0416。

2.3 16SrRNA和rpoD基因鑒定

PCR擴(kuò)增HX0416分離株16S rRNA基因后得到1466bp左右的產(chǎn)物。利用BLAST程序，對測得產(chǎn)物的序列在GenBank中進(jìn)行同源序列搜索，結(jié)果顯示，該分離菌與多種氣單胞菌的同源性均在99%以上，在16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育樹中與不同種氣單胞菌聚為一簇（圖2），歸在同一分支，而與美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種、哈維弧菌、鰻利斯頓菌以及輪蟲弧菌等親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，分屬不同分支，可見，分離菌株HX0416為氣單胞菌屬細(xì)菌，但是，僅憑16S rRNA結(jié)果不能鑒定到種。

PCR擴(kuò)增氣單胞菌HX0416菌株rpoD基因后得到860bp左右的產(chǎn)物，對應(yīng)序列提交GenBank后獲得序列號為MF071282。經(jīng)過BLAST分析和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹后發(fā)現(xiàn)，氣單胞菌HX0416與多株殺鮭氣單胞菌的同源性均在99%以上，與殺鮭氣單胞菌聚為一簇，而與其它種氣單胞菌遺傳距離較遠(yuǎn)（圖3），因此，氣單胞菌HX0416分離株應(yīng)為殺鮭氣單胞菌。

2.4 生化特征分析

利用梅里埃公司API 20NE試劑條和梅里埃ATB自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀配套G-細(xì)菌鑒定卡獲得HX0416菌株的生化鑒定結(jié)果，如表1和表2所示。全面分析各項(xiàng)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)該菌與氣單胞菌的生化特征相似度最高；而且該菌氧化酶陽性、O／129耐受、β-溶血、吲哚試驗(yàn)陽性、精氨酸雙水解酶陽性、發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，發(fā)酵蔗糖、麥芽糖、阿拉伯糖，且能水解七葉靈等，根據(jù)《細(xì)菌性魚類病原：養(yǎng)殖和野生魚類疾病》中不同細(xì)菌性病原的特征［10］，進(jìn)一步確認(rèn)該分離菌株HX0416為氣單胞菌屬的殺鮭氣單胞菌。

圖2 16S rRNA基因序列分析聚類結(jié)果Fig.2 Cluster results of 16S rRNA gene sequence

圖3 氣單胞菌rpoD基因序列分析聚類結(jié)果Fig.3 Cluster results of rpoD gene of Aeromonas sp.sequence

從表1還可以看到，該菌株只對API 20NE項(xiàng)目中的脲素、癸酸、己二酸、檸檬酸和苯乙酸這5個(gè)鑒定項(xiàng)目反應(yīng)陰性，其它鑒定項(xiàng)目均為陽性，而且具有β-溶血的特點(diǎn)，與殺鮭氣單胞菌各個(gè)亞種的生化特性比對［10］，結(jié)果顯示，HX0416菌株與殺鮭氣單胞菌殺鮭亞種最為接近。

表1 氣單胞菌菌株HX0416的生化特征Tab.1 Biochem ical characteristics of Aeromonas strain HX0416

表2 氣單胞菌菌株HX0416的其它生化特性Tab.2 Other biochem ical characteristics of Aeromonas strain HX0416

2.5 藥物敏感試驗(yàn)

所試的16種抗生素中，氣單胞菌菌株HX0416對環(huán)丙沙星、氯霉素、美洛培南、頭孢曲松、慶大霉素、頭孢吡肟、恩諾沙星和諾氟沙星等8種抗生素敏感，而對硫酸新霉素、利福平、氟苯尼考、土霉素、氨芐西林、磺胺甲噁唑等6種抗生素具有抗性，尤其是對氨芐西林和磺胺甲噁唑耐藥嚴(yán)重（表3）。

2.6 健康舌鰨感染試驗(yàn)

平板計(jì)數(shù)法顯示，107稀釋度組每板平均菌落數(shù)為52個(gè)（50μL／板），因此，107稀釋度組對應(yīng)菌液濃度為1.04×103cfu·mL-1，104～106稀釋度組對應(yīng)的菌液濃度為1.04×106～1.04×104cfu·mL-1。氣單胞菌菌株HX0416經(jīng)腹腔注射半滑舌鰨幼魚36 h后，攻毒魚開始出現(xiàn)死亡，至72 h時(shí)，最高濃度組（1.04×106cfu·mL-1）攻毒魚的死亡率已經(jīng)達(dá)91.7%（表4）。

表3 氣單胞菌菌株HX0416對16種抗菌藥物的M IC結(jié)果Tab.3 M IC of Aeromonas strain HX0416 to 16 antim icrobial agents

表4 健康半滑舌鰨幼魚感染菌株HX0416后的死亡率Tab.4 M ortality of C.sem ilaevis Günther infected w ith Aeromonas strain HX0416

3 討論

氣單胞菌是水生革蘭氏陰性桿菌，廣泛分布于海淡水動(dòng)物及其環(huán)境中，宿主眾多。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖模式向高度集約化發(fā)展之勢和養(yǎng)殖環(huán)境的日趨惡化，氣單胞菌種類及其所致疾病也隨之逐漸增多。其中，對養(yǎng)殖動(dòng)物有重要影響的氣單胞菌有嗜水氣單胞菌（A.hydrophila）、維氏氣單胞菌（A.veronii）和殺鮭氣單胞菌等［14-15］，可導(dǎo)致養(yǎng)殖動(dòng)物腸炎、腹水、潰瘍等多種疾病。其中，嗜水氣單胞菌還是一種典型的人-獸-魚共患病原菌，可致患者腹瀉或其它病原繼發(fā)感染［16］，因此，氣單胞菌及其所致疾病受到廣泛重視。

殺鮭氣單胞菌最初從鮭科魚類［17］分離獲得，近年來在鯉科魚類、鲆鰈類等魚［15，18-19］中也有相關(guān)報(bào)道，以導(dǎo)致感染動(dòng)物體表疥瘡、潰瘍?yōu)橹饕卣鳌ｋS著發(fā)病動(dòng)物和分離菌的增多，該種已有殺鮭亞種（salmonicida）、無色亞種（achromogenes）、殺日本鮭亞種（masoucida）、史氏亞種（smithia）和非典型亞種（atypical）共5個(gè)［10］，而且，新的亞種［20］還在不斷增加中：張曉君等［20］從患細(xì)菌性敗血癥的石鰈（Kareius bicoloratus）體內(nèi)分離到一株優(yōu)勢菌，通過形態(tài)特征、理化特性等表觀分類學(xué)指征以及16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育分析，鑒定該分離菌株為殺鮭氣單胞菌，但其與殺鮭氣單胞菌所有已知亞種在生化特性上差異較大，因此，命名為新的亞種——?dú)Ⅵl亞種（A.salmonicida subsp.flounderacida subsp.nov）。本研究分離的殺鮭氣單胞菌生化特性（API 20NE）與經(jīng)典殺鮭亞種［10］非常接近，但是，也存在少數(shù)生化特征的差異：經(jīng)典殺鮭亞種不能分解色氨酸（TRP），且不能利用阿拉伯糖（ARA）和甘露糖（MNE），而本研究分離的殺鮭氣單胞菌菌株HX0416不僅能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，而且既能利用阿拉伯糖又能利用甘露糖。我們推測，造成這種差異的原因可能是由于生存環(huán)境改變、宿主動(dòng)物種屬差異等致使病原自身的某些生物學(xué)特性發(fā)生了輕微變化。

由于分離菌株的生化特征常常與經(jīng)典菌株不完全相同［3，5］，因此，隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，基因水平的分子生物學(xué)鑒定方法被廣泛應(yīng)用于細(xì)菌種屬的鑒定中。由于細(xì)菌16S rRNA基因序列在系統(tǒng)發(fā)育過程中高度保守而最先被廣泛用于細(xì)菌的種屬鑒定，但是，在應(yīng)用過程中越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，16S rRNA基因序列在某些細(xì)菌屬內(nèi)高度保守，以致不能有效鑒別細(xì)菌的不同種或亞種［6，20］，因此，目前分離菌株的鑒定常常采用生化特征分析與基因鑒定相結(jié)合的方法，相互印證［3，5-6，21］。本研究結(jié)合16S rRNA、rpoD基因系統(tǒng)發(fā)育分析以及氣單胞菌及其種和亞種的生化特征、菌落特點(diǎn)等經(jīng)典分類學(xué)指征，最終將分離菌株HX0416鑒定為殺鮭氣單胞菌，并與殺鮭亞種最為接近。從該菌的16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育分析中，我們發(fā)現(xiàn)，菌株HX0416與前期報(bào)道的半滑舌鰨潰瘍相關(guān)病原菌——美人魚發(fā)光桿菌殺魚亞種、哈維弧菌、鰻利斯頓菌以及輪蟲弧菌等不在同一個(gè)大的分支，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。造成這種潰瘍病相關(guān)病原種類較多的原因，我們認(rèn)為主要有以下兩種：1）不同養(yǎng)殖環(huán)境以及不同抗菌藥物的使用可能導(dǎo)致不同養(yǎng)殖場出現(xiàn)不同的優(yōu)勢菌種，這些不同的菌種有可能導(dǎo)致同樣的潰瘍癥狀，而半滑舌鰨疾病命名的依據(jù)主要是其臨床癥狀（如潰瘍病），因此，同為“潰瘍病”卻有多種病原菌。2）半滑舌鰨養(yǎng)殖生產(chǎn)中常常存在兩種以上臨床癥狀并存的情況，比如有些潰瘍病也存在腹水的癥狀［5-7］，有些腹水病也存在爛尾的情況［3］等，細(xì)菌或其它病原的并發(fā)與繼發(fā)可能導(dǎo)致了優(yōu)勢病原種屬的差異。因此，除了建議盡可能從病原角度進(jìn)行疾病命名外［22］，本研究認(rèn)為這些研究并不矛盾，這些病原對半滑舌鰨的健康養(yǎng)殖均具有重要影響，均為半滑舌鰨養(yǎng)殖過程中需要重點(diǎn)關(guān)注的病原。

本研究對分離菌株HX0416的藥敏試驗(yàn)顯示，雖然該殺鮭氣單胞菌對喹諾酮類和頭孢菌素類的多種藥物比較敏感，但是對氨基糖苷類、四環(huán)素類藥物多重耐受，尤其是對β-內(nèi)酰胺類和磺胺類藥物嚴(yán)重耐受，胡夢華等［23］在研究海水副溶血弧菌時(shí)也發(fā)現(xiàn)了類似耐藥現(xiàn)象。這些結(jié)果既說明同為海水來源菌可能攜帶了類似的耐藥基因／質(zhì)粒［24-26］，但也可能像YI等［27］指出的那樣，我們在養(yǎng)殖生產(chǎn)中藥物使用的頻繁與偏好導(dǎo)致了耐藥的累積與傳播。總之，本研究結(jié)果表明，在半滑舌鰨養(yǎng)殖過程中存在多種病原感染、致病的情況，在疾病防治過程中要加強(qiáng)綜合管理，注重用藥的針對性和科學(xué)性，避免多種病原并發(fā)或繼發(fā)感染，嚴(yán)防耐藥菌的產(chǎn)生與傳播。

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Isolation and identification＆antim icrobial susceptibility test of Aeromonas salmonicida associated w ith the skin ulceration disease of Cynoglossus sem ilaevis Günther

ZHOU Hong-xia1，YAO Jun-jie1，F(xiàn)ANGWen-hong2，LIXin-cang2，ZHAO Shu2，WANG Yuan2，WU Yu-xue1，ZHOU Jun-fang2
（1.Department of Fisheries Science，College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang 550025，China；2.East China sea Fisheries Research Institute，CAFS，Key Laboratory of East China Sea and Oceanic Fishery Resources Exploitation and Utilization，Ministry of Agriculture，Shanghai 200090，China）

Cynoglossus semilaevis Günther is known as a famous fish in China for its high nutritional and economic value.However，with the continuous development of factory farmingmodel，diseases have become the key factor to restrict the healthy development of Cynoglossus semilaevis Günther aquaculture，and skin ulceration disease was themost common one.In this study，one dominant strain HX0416 was isolated from Cynoglossus semilaevis Günther with severe skin ulceration disease.The bacterium could grow well on the TCBS agar and form the obvious beta hemolytic ring on the sheep blood agar.Analysis of16S rRNA and rpoD gene sequence combined with biochemical characteristics demonstrated that the isolate HX0416 was Aeromonas salmonicida.Animal infection experiment showed that the strain was pathogenic to Cynoglossus semilaevis Günther.When the concentration of bacterium was 1.04×106cfu／mL，about91.7%juvenile fishes died at 72 h after infection.Antimicrobial susceptibility tests indicated that strain HX0416 was sensitive to quinolones and cephalosporins such as ciprofloxacin，enrofloxacin，norfloxacin，ceftriaxone and cefepime，while resistant to aminoglycosides and tetracyclines such as neomycin sulfate and oxytetracycline，and severely resistant to both sulfonamides andβ-lactams such as sulfamethoxazole and ampicillin.

Cynoglossus semilaevis Günther；Aeromonas salmonicida；skin ulceration disease；biochemical characteristics；antimicrobial susceptibility test

Q 93-331

A

1004-2490（2017）03-0322-09

2017-03-19

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201303047）；國家自然科學(xué)基金（31372550）

周紅霞（1989-），女，碩士研究生，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物繁殖與發(fā)育生物學(xué)。

周俊芳，副研究員。Tel：021-65699301，E-mail：zhoujf＠ecsf.ac.cn