農鳳雞新城疫與禽流感母源抗體的衰減規(guī)律研究

俞寧 楊瓊 周大薇

摘要[目的]研究農鳳雞新城疫和禽流感母源抗體的衰減規(guī)律，為農鳳雞新城疫（ND）和禽流感（AI）的預防提供依據。[方法]通過血凝抑制（HI）試驗對1～37日齡的農鳳雞進行新城疫和禽流感（H5和H9）母源抗體水平的檢測，研究農鳳雛雞ND和AI母源抗體的衰減規(guī)律。[結果] AI H5母源抗體水平較低，AI H9和ND的母源抗體水平相對較高，但都在3～5日齡出現高峰，此后隨著日齡的增長，抗體水平逐漸下降。[結論] 農鳳雞AI H5的首免日齡推薦為5～8日齡，AI H9和ND的首免日齡推薦為7～12日齡。

關鍵詞 新城疫；禽流感；母源抗體；農鳳雞

中圖分類號 S858.31 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2017）02-0129-02

Abstract[Objective] To study the decay laws of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI） in Xinfeng Chicken and provide basis for the prevention of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI） in Xinfeng Chicken.[Method] The maternal antibody levels of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI H5 and H9）in 1-37 dayold Xinfeng Chichen were detected by using hemagglutination inhibition（HI） test to study the decay laws of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI）maternal antibodies in Xinfeng Chicken.[Result] H5 maternal antibody level of AI was lower. The maternal antibody level of AI H9 and ND was relatively higher， and they reached the maximum values in 3-5 dayold Xinfeng Chichen， and they gradually decreased with the dayold.[Conclusion] The first immunization age of AI H5 in Xinfeng Chicken was 5-8 dayold， and the first immunization age of AI H9 and ND was 7-12 dayold.

Key words Newcastle disease（ND）； Avian influenza（AI）； Maternal antibody； Xinfeng Chicken

農鳳雞是成都農業(yè)科技職業(yè)學院以矮小型品系（即宮廷鳳凰雞，帶鳳頭）為母本，與正常型青脛麻羽公雞雜交，培育出帶鳳頭性狀的矮小型青脛麻羽雞，作為優(yōu)質雞母系。該品系個體矮小、矮腳、短頸、鳳頭、青脛、青喙、白膚、黑麻羽、尾羽高翹及胸肌和腿肌較發(fā)達，肉質佳，肉味極鮮，具有廣闊的發(fā)展前景。

雞新城疫（ND）和禽流感（AI）均是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)生產的重要疫病，其暴發(fā)將會給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經濟損失，疫苗免疫被認為是當前預防和控制這2種疫病的主要手段。母源抗體與免疫程序的合理制訂直接相關，特別是確定不同疫苗的首免日齡時是重點考慮的因素[1-2]。為了更好地進行ND和AI的防控，筆者通過對四川農鳳雞新城疫、禽流感母源抗體水平及其衰減情況進行檢測，旨在為該品種雞制訂科學合理的免疫程序提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 抗原和血清。禽流感H5（Re-6）血凝抑制（HI）抗原、陽性血清和陰性血清，禽流感H9（Re-2）HI抗原、陽性血清和陰性血清，新城疫HI抗原、陽性血清和陰性血清，均購自中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.1.2 1%雞紅細胞懸液。采自成年健康公雞的枸櫞酸鈉抗凝血，用生理鹽水反復洗滌3次，配制成1%雞紅細胞懸液。

1.1.3 儀器與試劑。儀器有96孔V型反應板、微量移液器、微型振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱等；試劑有3.8%枸櫞酸鈉抗凝劑、生理鹽水等。

1.2 方法

1.2.1 試驗設計。四川農鳳雞父母代種雞按照常規(guī)免疫程序免疫，選取抗體水平較高的種雞群，取50份血清，用于父母代種雞免疫抗體檢測。1日齡健康農鳳雛雞（自繁自養(yǎng)）90只分成6個小組，每小組15只雞，不進行任何免疫，按照常規(guī)方法進行飼養(yǎng)管理和消毒。在1、3、5、8、11、15、19、23、30、37日齡分別采集各個小組雞的血樣，6個小組輪流采血。

1.2.2 血樣處理。將采集的血液0.8～1.0 mL放入1.5 mL離心管中，待血液充分凝集后，對血液進行3 000 r/min離心3 min，分離的血清在-20 ℃下保存，每個日齡段采集的血清用自封袋裝好，做好標記，最后統一對所有樣品同時測定其AI H5、 AI H9和ND的HI抗體滴度。

1.2.3 血清HI效價的檢測。采用血凝（HA）試驗與血凝抑制（HI）試驗《高致病性禽流感診斷技術》（GB /T 18936—2003）及《新城疫診斷技術》（GB/T 16550—2008）。

根據AI H5、AI H9和ND的抗原血凝價，用生理鹽水稀釋，配制成4單位病毒抗原液，通過HI試驗測定血清樣品抗體效價。

2 結果與分析

2.1 農鳳雞父母代種雞的免疫抗體檢測結果

通過血凝試驗與血凝抑制試驗進行農鳳雞父母代種雞的免疫抗體效價檢測，結果發(fā)現新城疫抗體平均效價為9.98log2，禽流感H9（Re-2）抗體平均效價為10.05log2，禽流感H5（Re-6）抗體平均效價為8.12log2。

2.2 不同日齡農鳳雛雞新城疫母源抗體

從圖1可以看出，農鳳雛雞新城疫母源抗體水平在3日齡達到最高（7.87log2），此后隨著日齡的增長，抗體水平逐漸下降，8日齡后抗體水平已降至臨界值（6.00log2）以下，37日齡抗體水平為0.40log2。

2.3 不同日齡農鳳雛雞禽流感H9母源抗體

從圖2可以看出，農鳳雛雞禽流感H9母源抗體水平在5日齡達到最高（9.13log2），此后隨著日齡的增長，抗體水平逐漸下降，15日齡后抗體水平已下降到臨界值（6.00log2）以下，37日齡抗體水平為0.93log2。

2.4 不同日齡農鳳雛雞禽流感H5母源抗體

從圖3可以看出，農鳳雛雞禽流感H5母源抗體水平在3日齡較高（6.53log2），此后隨著日齡的增長，抗體水平逐漸下降，5日齡后抗體水平已降至臨界值（6.00log2）以下，30日齡抗體水平基本消失。

3 討論與結論

預防接種是防控禽流感和新城疫兩大疫病的重要措施，因此確定符合四川農鳳雞實際、科學的免疫程序十分重要。若首免時間過早，來自疫苗的抗原被高母源抗體中和，使免疫達不到理想效果；若首免時間過晚，母源抗體消退，雛雞在免疫前就可能會感染強毒，風險大大增加[3]。一般認為，ND和AI的母源抗體滴度低于6.00log2時就應當進行免疫。

該試驗中農鳳雛雞在出殼時通過父母代種雞獲得了母源抗體，足以抵抗禽流感H5（Re-6型）、H9亞型和新城疫病毒的侵襲[4-6]，并在3～5日齡母源抗體水平出現高峰值，均在6.001og2以上。H5（Re-6）亞型及ND均在3日齡達到高峰，H9則在5日齡達到高峰。

該試驗結果表明，農鳳雛雞AI H5（Re-6型）母源抗體水平不高，且在8日齡己降至6.00log2左右，因此認為在該種母源抗體水平下農鳳雛雞在5～8日齡進行禽流感病毒（AIV） H5（Re-6）亞型疫苗首次免疫較為合理。此外，推薦農鳳雛雞AI H9和ND的首免日齡為7～12日齡。條件較好的雞場，最好根據抗體效價的監(jiān)測情況來確定最佳的首免日齡。

為保證試驗結果的準確度與代表性，試驗前對農鳳種雞群的ND和AI抗體水平進行了檢測，在此基礎上選取抗體水平較高的種雞群及其雛雞進行試驗。采用組內循環(huán)法采血，避免因單一個體在短時間內采血過多而對雛雞造成不良影響。此外，為了減少人為誤差，對同一樣品、同一時間采集的紅細胞及同一批抗原，由3人獨立進行3次重復試驗[3]。

該檢測結果為農鳳雞免疫程序的制訂提供了技術支持，同時也可為矮小型品種雞在新城疫、禽流感的免疫防制中首免日齡的確定提供參考。

參考文獻

[1] 刁有祥.禽病學[M].北京：中國農業(yè)科學技術出版社，2012.

[2] 卡爾尼克 B W.禽病學[M].高福，蘇敬良，譯.12版.北京：中國農業(yè)出版社，2012：171.

[3] 潘孝成，趙瑞宏，余麗萍，等.青腳麻雞新城疫和禽流感母源抗體的衰減規(guī)律研究[J].安徽農業(yè)科學，2012，40（25）：12549-12550.

[4] 顧洪娟.海蘭褐蛋雞新城疫母源抗體消長規(guī)律的研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013（3）：85-86.

[5] 劉方娜，趙全興，李梅，等.海蘭褐蛋雞新城疫、禽流感母源抗體消長規(guī)律的研究[J].山東畜牧獸醫(yī)，2010，31（12）：5-6.

[6] 王延樹，李建麗，鄒麗紅，等.禽流感（H9）和新城疫母源抗體消長規(guī)律及其免疫效果[J].獸醫(yī)導刊，2011（6）：67-68.