老年三陰乳腺癌組織中MMP-9和CD147的表達及意義

張玉揚 張 丹 孫麗麗 董奇觀 程 麗 張 偉 程日霞 趙 林

(撫順礦務局總醫院腫瘤內二科，遼寧 撫順 113008)

老年三陰乳腺癌組織中MMP-9和CD147的表達及意義

張玉揚 張 丹 孫麗麗 董奇觀 程 麗 張 偉 程日霞 趙 林

(撫順礦務局總醫院腫瘤內二科，遼寧 撫順 113008)

目的 探討基質金屬蛋白酶(MMP)-9和CD147在老年三陰乳腺癌(TNBC)中的表達及對預后的影響。方法 行手術切除治療的年齡≥60歲TNBC患者組織標本63例，51例老年乳腺纖維瘤組織，采用免疫組化方法，檢測MMP-9和CD147的表達情況，并分析其與臨床病理特征的相關性，通過Kaplan-Meier生存曲線法計算不同組別的老年TNBC的生存率。結果 MMP-9和CD147在老年TNBC中的表達明顯高于老年乳腺纖維瘤(P<0.05)；MMP-9和CD147的表達與老年TNBC腫瘤直徑、病理學分級、組織學分級、淋巴轉移情況以及Ki67高表達(>30%) 有關(均P<0.05)，而與P53的表達無關(P>0.05)；34例MMP-9陽性的老年TNBC中位生存時間(OS)為28.0個月，95%CI為10.0～41.3個月，29例MMP-9陰性的老年TNBC OS為34.0個月，95%CI(12.0～49.6個月)，MMP-9陽性生存率明顯低于MMP-9陰性(P=0.015)；37例CD147陽性的老年TNBC OS為26.0個月，95%CI為10.0～35.2個月，26例CD147陰性的老年TNBC OS為35.0個月，95%CI為11.0～51.7個月，CD147陽性生存率明顯低于CD147陰性(P=0.007)。結論 MMP-9和CD147在老年TNBC中表達顯著增高，且與TNBC的惡性進展密切相關，有可能成為老年TNBC臨床治療新靶點。

三陰乳腺癌；基質金屬蛋白酶-9；CD147

三陰乳腺癌(TNBC)是指孕激素受體(PR)、雌激素受體(ER)、人表皮生長因子受體(Her)-2均陰性的乳腺癌，是一種特殊類型的乳腺癌亞型，占乳腺癌的15%～25%〔1〕，但國內外對老年人TNBC的研究甚少。老年TNBC的組織學特點表現為組織分級高、核分裂數目多、易發生局部浸潤轉移、總生存率和無瘤生存率較低〔2，3〕。由于其不表達激素受體和Her-2，則不能進行內分泌及抗Her-2靶向治療(曲妥珠單克隆抗體)。本研究通過免疫組化方法，檢測老年TNBC組織切片中CD147和基質金屬蛋白酶(MMP)-9蛋白表達水平，結合其臨床病理特征指標以探討MMP-9和CD147在老年TNBC表達中的相關性及對預后的影響。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2008年6月至2010年6月來撫順礦務局總醫院行手術切除治療的年齡≥60歲TNBC患者組織標本63例，標本均經甲醛固定，石蠟包埋，經病理學、免疫組化等證實。患者均為女性，年齡60～77〔平均(67.5±4.3)〕歲。根據《NCCN乳腺癌臨床實踐指南》(中國版)2014進行分型〔4〕，其中Ⅰ期22例，Ⅱ期19例，Ⅲ期19例，Ⅳ期3例。腫瘤直徑≤2 cm 25例，>2 cm 38例。腋窩淋巴結未轉移者33例，轉移者30例。病例分型：浸潤性導管癌48例，非浸潤性導管癌15例。本組研究所選的TNBC患者均經過有效的臨床治療，包括保乳+腋淋巴結清掃術和乳腺癌根治術等。同時收集51例老年女性乳腺纖維瘤組織作為對照。本研究經過本院醫學倫理委員會審查，獲得批準?；颊呒凹覍倬炇鹬橥鈺?/p>

1.2 主要試劑 免疫組化SP試劑盒、二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑、鼠抗人單克隆PR抗體、鼠抗人單克隆ER抗體、鼠抗人單克隆Her-2抗體、鼠抗人單克隆MMP-9抗體均購自福州邁新生物技術開發有限公司，兔抗人多克隆CD147抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 免疫組化染色及結果判定 對所有石蠟切片采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法染色，具體操作步驟按照試劑盒說明書進行，采用已知陽性片作陽性對照，同時采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。MMP-9定位組織細胞膜或胞質，CD147蛋白表達定位組織細胞的細胞膜和細胞質，出現明顯的黃色或棕黃色顆粒視為著色陽性，參考袁中玉等〔5〕提出的染色標準(在高倍鏡下對每張切片隨機選擇5個視野，計數200個細胞/視野，共1 000個)綜合陽性細胞率合計染色強度進行綜合評估：未見陽性細胞為陰性(-)，陽性細胞數<10%為弱陽性(+)，10%～50%為中度陽性()，≥50%為強陽性()。

1.4 術后隨訪 隨訪至2015年12月，隨訪時間為10～80個月，中位隨訪時間49個月，總生存時間(OS)的計算為治療開始到死于任何疾病、最后隨診或觀察截止的時間。

1.5 統計學方法 應用SPSS19.0軟件進行χ2檢驗，Kaplan-Meier法計算生存率、繪制生存曲線，各組生存率比較用Log rank檢驗。

2 結 果

2.1 MMP-9和CD147在老年TNBC和乳腺纖維瘤組織中的表達情況 MMP-9和CD147均定位于乳腺癌切片組織細胞膜和(或)細胞質，染色陽性為黃色或棕黃色顆粒狀，分布不均，顯色深淺不同，呈現片狀、灶狀或散在分布，而在對照組乳腺纖維瘤病變中導管腺上皮細胞中輕度著色或不著色(見圖1)。63例老年TNBC切片組織中，MMP-9和CD147陽性率分別為54.0%(34/63，-29例，+14例，11例，9例)和58.7%(37/63，-26例，+12例，15例，0例)；51例老年乳腺纖維瘤組織中，MMP-9和CD147的陽性率分別為33.3%(17/51，-34例，+15例，2例，0例)和29.4%(15/51，-36例，+13例，2例，0例)，MMP-9和CD147在老年TNBC中的表達明顯高于老年乳腺纖維瘤(P<0.01)。

2.2 MMP-9和CD147在老年TNBC中的表達與臨床病理因素的關系 MMP-9和CD147的表達與老年TNBC腫瘤直徑、病理學分級、組織學分級、淋巴轉移情況及Ki67高表達(>30%)有關(P<0.05)，而與P53的表達無關(P>0.05)。見表1。

圖1 MMP-9和CD147在老年TNBC和老年乳腺纖維瘤中的表達 (SP法，×200)

表1 老年TNBC中MMP-9和CD147的表達與臨床病理參數的關系(n)

2.3 MMP-9和CD147表達對預后的影響 對TNBC患者隨訪期間，死亡52例，其中46例死于乳腺癌的進一步進展，6例死于其他疾病。隨訪的34例MMP-9陽性的老年TNBC中29例死亡，生存率14.7%，中位生存時間28.0個月，95%CI為10.0～41.3個月，29例MMP-9陰性的老年TNBC中死亡23例，生存率為20.7%，中位生存時間為34.0個月，95%CI為12.0～49.6個月，MMP-9陽性生存率明顯低于MMP-9陰性(P=0.015)；37例CD147陽性的老年TNBC中32死亡，生存率為13.5%，中位生存時間為26.0個月，95%CI為10.0～35.2個月，26例CD147陰性的老年TNBC中死亡20例，生存率為23.1%，中位生存時間為35.0個月，95%CI為11.0～51.7個月，CD147陽性生存率明顯低于CD147陰性(P=0.007)。見圖2，圖3。

圖2 MMP-9陽性表達組與陰性表達組OS曲線比較

圖3 CD147陽性表達組與陰性表達組OS曲線的比較

3 討 論

TNBC的臨床特征包括病理組織學分級高、腫瘤體積大、易轉移、內分泌及抗HER-2靶向治療無效，因而TNBC處于何種TNM分期，其預后均較差，5年生存率不足15%〔5〕。研究發現，TNBC與患者年齡和組織學分型相關，已證實老年TNBC中浸潤性導管癌占83%〔6〕，其次是腺癌和小葉癌。由于老年人生物功能有所減退，手術放化療耐受性差，同時TNBC的治療缺乏明確的治療靶點，揭示老年TNBC的預后更差。

MMP是Zn2+依賴性高度保守的內肽酶，能夠降解細胞外基質以及基底膜的所有膠原蛋白質，目前共發現20種MMP，按照其靶向作用物的不同，將其分為4大類：肽原酶、明膠酶、膜型MMP和基質降解素。MMP-9(明膠酶B，92 kD)隸屬于明膠酶中的一個亞型，具有MMP的共同結構特點，在細胞基質的代謝調節中起重要作用，其可通過降解基底膜Ⅳ型膠原從而破壞其完整性，利于腫瘤的局部浸潤、生長以及遠處轉移〔7〕。CD147是一種表達于腫瘤細胞表面的黏附分子，參與細胞間及細胞與基質間的黏附，在惡性腫瘤細胞表面呈現過表達狀態。CD147在機體內廣泛分布，具有不同的生理功能并參與多種生理及病理過程。研究表明〔8〕，CD147是MMP-9的上游調節因子，能夠通過多種信號轉導途徑調控MMP的產生。研究發現〔9〕，在腫瘤組織中，CD147的高表達能夠刺激MMP-9基因高轉錄及其高分泌而導致腫瘤細胞侵襲轉移。Li等〔10〕通過將CD147的反義RNA轉染肝癌細胞，MMP-9的分泌明顯減少，癌細胞的侵襲和轉移也出現明顯抑制。

本研究結果表明，MMP-9和CD147在老年TNBC組織中的表達水平明顯增加，高于老年乳腺纖維瘤組織，而且，MMP-9與CD147的表達水平呈現正相關趨勢，這與前期文獻報道結果類似〔11〕。同時，本研究結果表明MMP-9和CD147在老年TNBC腫瘤細胞發生、生長以及轉移中相互影響，相互作用。黃曉曦等〔12〕研究發現，乳腺癌 MMP-2和(或)MMP-9的表達與腋窩淋巴結轉移呈正相關，薛松等〔13〕發現，CD147蛋白表達與轉化生長因子(TGF)β1及其Ⅰ型受體(TGFβR I)表達均呈顯著正相關，這可能與它的生物學特性更具侵襲性及缺乏有效的減危手段有關，腫瘤惡性程度越高，轉移越早，陽性表達越高，提示患者的預后越差。

1 杜 娟，阮祥燕.三陰乳腺癌的特點及研究進展〔J〕.首都醫科大學學報，2015；36(4)：578-82.

2 王 琢，王麗娟，張穎超，等.老年三陰型乳腺癌患者和青年患者臨床生物學特征對比〔J〕.中國老年學雜志，2013；33(3)：694-5.

3 高 靜.老年三陰性乳腺癌的臨床病理特征及治療〔J〕.國際腫瘤學雜志，2013；40(12)：921-3.

4 李榮萍，張 芳，韓 猛，等.PARP-1與HMGA2在三陰型老年局部晚期乳腺癌中的表達及對預后的影響〔J〕.山西醫藥雜志，2014；43(23)：2736-9.

5 袁中玉，王樹森，高 巖，等.305例三陰乳腺癌患者的臨床特征及預后因素分析〔J〕.癌癥，2008；27(6)：561-5.

6 陳洪流.三陰性乳腺癌患者的臨床特征及預后因素〔J〕.中國老年學雜志，2013；33(23)：5840-1.

7 劉桃桃，申夢琴，王丹丹，等.三陰性乳腺癌中MMP-9及E-cadherin表達的意義〔J〕.實用腫瘤學雜志，2014；28(1)：19-23.

8 Kreike B，Van Kouwenhove M，Horlings H，etal.Gene expression profiling and histopathological characterization of triple-negative/basal-like breast carcinomas〔J〕.Breast Cancer Res，2007；9(5)：R65.

9 Kim JY，Kim WJ，Kim H，etal.The stimulation of CD147 induces MMP-9 expression through ERK and NF-kappaB in macrophages：implication for atherosclerosis〔J〕.Immune Netw，2009；9(3)：90-7.

10 Li Y，Shang P，Qian AR，etal.Inhibitory effects of antisense RNA of HAb18G/CD147 on invasion of hepatocellular carcinoma cells in vitro〔J〕.World J Gastroenterol，2003；9(10)：2174-7.

11 王善偉，陳麗榮.CD147、MMP-9和P-ERK在乳腺癌中的表達及臨床意義〔J〕.實用腫瘤雜志，2007；22(2)：133-7.

12 黃曉曦，許東坡，王力群，等.MMP-2/MMP-9在乳腺癌組織中的表達及其生物學意義〔J〕.癌癥，2001；20(11)：1251-5.

13 薛 松，李守新，吳正生，等.CD147、基質金屬蛋白酶和轉化生長因子β1在乳腺癌中的表達與腫瘤轉移和預后及其相互間的關系〔J〕.中華病理學雜志，2009；38(8)：524-8.

〔2016-12-11修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

趙 林(1980-)，女，副主任醫師，主要從事乳腺癌綜合治療研究。

張玉揚(1980-)，男，副主任醫師，主要從事腫瘤的綜合治療研究。

R73

A

1005-9202(2017)13-3257-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.061