一氧化氮合酶抑制劑對(duì)七葉蓮花鎮(zhèn)痛作用的影響

孫愛(ài)靜，龐素秋，陳滟湄

·論 著·

一氧化氮合酶抑制劑對(duì)七葉蓮花鎮(zhèn)痛作用的影響

孫愛(ài)靜，龐素秋，陳滟湄

目的 探討一氧化氮合酶(NOS)抑制劑與七葉蓮花鎮(zhèn)痛作用的關(guān)系。 方法 采用小鼠熱板法，將小鼠隨機(jī)分為等滲鹽水組(陰性對(duì)照組)、曲馬多組(陽(yáng)性對(duì)照組)及各實(shí)驗(yàn)組，觀察L-精氨酸(L-Arg)和NOS抑制劑L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)對(duì)七葉蓮花醇提物(SAHF)鎮(zhèn)痛作用的影響。 結(jié)果 與等滲鹽水組比較，L-NAME可顯著增強(qiáng)七葉蓮花的鎮(zhèn)痛作用(P<0.01)；與SAHF組比較，腦組織中NO水平顯著降低(P<0.05)。 結(jié)論 七葉蓮花的鎮(zhèn)痛作用和NOS抑制劑之間存在一定的相互作用，L-NAME可顯著增強(qiáng)七葉蓮花的鎮(zhèn)痛作用，提示SAHF的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制與降低體內(nèi)過(guò)量的NO有關(guān)。

七葉蓮花；一氧化氮合酶；L-硝基精氨酸甲酯；鎮(zhèn)痛作用

七葉蓮為五加科植物鵝掌柴(ScheffleraarboricolaHayata)的根或莖葉，具有祛風(fēng)止痛、活血消腫作用，是我國(guó)南方民間治療三叉神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛、跌打腫痛的中草藥[1]。該植物花為傘形花序，花期7-10月，花產(chǎn)量高，花期長(zhǎng)，福建地區(qū)有以七葉蓮花蜜治療風(fēng)濕性疾病的應(yīng)用。前期研究證明七葉蓮花具有顯著抗炎鎮(zhèn)痛活性[2-3]。本研究采用小鼠熱板模型，探討七葉蓮花醇提物(SAHF)的鎮(zhèn)痛作用及一氧化氮合酶(NOS)抑制劑L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)與七葉蓮花鎮(zhèn)痛作用間的關(guān)系，為進(jìn)一步探討其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 七葉蓮花采自泉州清源山，經(jīng)鑒定為五加科植物鵝掌柴的花序，由本實(shí)驗(yàn)室制成乙醇粗提物(SAHF)。鹽酸曲馬多片，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司，批號(hào)：012110101；L-精氨酸(L-Arg)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20110325；L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)，阿拉丁試劑，批號(hào)：23864；NO試劑盒(化學(xué)法)，南京建成生物工程研究所；七葉蓮片，泉州中僑(集團(tuán))股份有限公司藥業(yè)公司，批號(hào)：110201。其余所需化學(xué)試劑為分析純。

1.2 儀器 DK-S24電熱恒溫水浴鍋，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；JA2003A電子天平，上海精天電子儀器有限公司；SP-752PC紫外可見分光光度計(jì)，上海光譜儀器有限公司；瑞士Tecan Infinite F200/M200型多功能酶標(biāo)儀。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠體重18～22 g，供應(yīng)單位：上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證編號(hào)：2007000521085。小鼠飼養(yǎng)于鼠籠中，每籠10只，每天更換墊料1次，自由攝食和飲水，保持室內(nèi)溫度18～22 ℃，相對(duì)濕度40%～60%，自然光照。

1.4 方法

1.4.1 小鼠熱板法實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[4]方法進(jìn)行。取體重(20±2)g的雌性小鼠，將其放在預(yù)熱之后(55±0.5)℃的金屬板上，以小鼠舔后足所需時(shí)間為痛閾值。實(shí)驗(yàn)前篩選痛閾指標(biāo)5～30 s的合格小鼠，給藥前測(cè)小鼠的基礎(chǔ)痛閾值2次，間隔5 min，取平均值為基礎(chǔ)痛閾值。為了防止小鼠足燙傷，設(shè)定60 s為截止時(shí)間，超過(guò)60 s視痛閾值為60 s。室溫維持在15 ℃左右。將60只受試小鼠隨機(jī)分成6組，每組10只：等滲鹽水組(10 mL/kg)、曲馬多組(鹽酸曲馬多片40 mg/kg)、七葉蓮片組(292.9 mg/kg),以及SAHF高劑量組(24.48 g/kg)、中劑量組(12.38 g/kg)、低劑量組(6.19 g/kg)。實(shí)驗(yàn)開始前30 min灌胃給藥，1次/d，連續(xù)3 d。于末次給藥后30、60、90、120 min分別測(cè)定舔足潛伏期。取實(shí)驗(yàn)中腦組織，按NO試劑盒(化學(xué)法)說(shuō)明書測(cè)定熱板實(shí)驗(yàn)中腦組織中NO的含量。

1.4.2 熱板法測(cè)定L-NAME對(duì)SAHF鎮(zhèn)痛作用的影響 采用1.4.1中小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)中的方法，將50只受試小鼠隨機(jī)分為5組：等滲鹽水組(10 mL/kg)、曲馬多組(40 mg/kg)、SAHF組(48.96 g/kg)、SAHF+L-Arg組(48.96 g/kg+200 mg/kg)、SAHF+L-NAME組(48.96 g/kg+37.5 mg/kg)。各組灌胃給予等滲鹽水、曲馬多、SAHF，SAHF+L-Arg組、SAHF+L-NAME組另分別腹腔注射L-Arg、L-NAME。給藥后30、60 min分別測(cè)定痛閾值[5]。取實(shí)驗(yàn)中腦組織，按NO試劑盒(化學(xué)法)說(shuō)明書測(cè)定實(shí)驗(yàn)中腦組織中NO的含量。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠熱板法實(shí)驗(yàn)結(jié)果 熱板實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與用藥前比較，SAHF高劑量組可明顯延長(zhǎng)小鼠熱板反應(yīng)舔足潛伏期，隨著時(shí)間進(jìn)展，給藥后90 min時(shí)痛閾值最大，隨后下降。SAHF鎮(zhèn)痛作用效果介于鹽酸曲馬多組和七葉蓮片組之間，作用效果與較葉蓮片組更好(P<0.05)。見圖1。

圖1 七葉蓮花醇提物對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)的影響

2.2 SAHF對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)?zāi)X組織中NO的影響 與等滲鹽水組比較，SAHF高劑量能顯著抑制小鼠腦組織中NO的含量(P<0.05)，中、低劑量也有一定的抑制作用趨勢(shì)，但與等滲鹽水組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

組別nNO含量等滲鹽水組106 50±0 67曲馬多組105 23±0 38七葉蓮片組106 14±0 59SAHF低劑量組106 41±0 59?SAHF中劑量組105 77±0 52SAHF高劑量組105 13±0 72#△與曲馬多組比較，?P<0 01；與等滲鹽水組比較，#P<0 05；與七葉蓮片組比較，△P<0 05

2.3 熱板法測(cè)定L-NAME對(duì)SAHF鎮(zhèn)痛作用的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：L-Arg可減弱SAHF的鎮(zhèn)痛作用(P<0.01)，L-NAME可增強(qiáng)SAHF的鎮(zhèn)痛作用(P<0.01)。見表2。

組別n痛閾基礎(chǔ)痛閾給藥后30min給藥后60min等滲鹽水組1018 00±3 6118 17±4 1717 5±2 74曲馬多組1016 00±3 2230 83±6 1517 67±2 73SAHF組1017 50±2 4314 33±1 6323 17±3 31SAHF+L?Arg組1018 00±2 5319 20±3 5621 33±1 65?SAHF+L?NAME組1018 50±2 5127 83±10 2329 50±5 17#△與曲馬多組30min比較，?P<0 01；與等滲鹽水組比較，#P<0 01；與SAHF組比較，△P<0 05

2.4 L-NAME對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)?zāi)X組織中NO的影響 與SAHF組比較，SAHF+L-NAME組小鼠腦組織中NO的含量顯著降低(P<0.05)。見表3。

組別nNO含量等滲鹽水組105 92±0 37曲馬多組105 18±0 78SAHF組104 95±0 43SAHF+L?Arg組105 32±0 65SAHF+L?NAME組104 25±0 81?與SAHF組比較，?P<0 05

3 討 論

NO是一種重要的信號(hào)分子，參與機(jī)體認(rèn)知、痛覺(jué)感受和神經(jīng)分泌等過(guò)程[6]。L-Arg是體內(nèi)合成NO的前體物質(zhì)[7]，正常狀態(tài)下，L-Arg在NOS的作用下生成L-瓜氨酸和NO，而D-精氨酸(D-Arg)則無(wú)此作用。L-NAME是精氨酸類似物，可以競(jìng)爭(zhēng)性地抑制NOS的活性，從而減少內(nèi)源性NO的生成[8-9]。目前已有大量的研究表明NO在中樞及外周的不同痛覺(jué)調(diào)制中起重要作用[10]。研究顯示，脊髓內(nèi)合成的NO參與嗎啡介導(dǎo)的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，而抑制NO的合成則可明顯增強(qiáng)嗎啡的鎮(zhèn)痛作用，提示了NO參與外周和脊髓水平的痛覺(jué)調(diào)制，具有明顯的痛敏效應(yīng)[11]。而向大腦側(cè)腦室內(nèi)微量注射L-NAME后，大鼠痛閾升高明顯，提示中樞神經(jīng)內(nèi)源性NO水平的降低表現(xiàn)一定的鎮(zhèn)痛效應(yīng)[12]。前期實(shí)驗(yàn)表明，SAHF對(duì)多種抗炎鎮(zhèn)痛模型均能起明顯抑制作用，并提示部分通過(guò)中樞系統(tǒng)起作用，呈量效關(guān)系；熱板實(shí)驗(yàn)表明：SAHF可抑制PGE2及MDA的含量，同時(shí)能夠抑制小鼠血清中NO的生成[2-3]。在本實(shí)驗(yàn)中，探索SAHF對(duì)小鼠熱板實(shí)驗(yàn)中腦組織NO的影響，發(fā)現(xiàn)與等滲鹽水組比較，SAHF高劑量能顯著抑制小鼠腦組織中NO的含量(P<0.05)，提示SAHF的鎮(zhèn)痛作用可能與減少NO的生成有關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)中，采用熱板法測(cè)定L-NAME對(duì)SAHF的鎮(zhèn)痛作用的影響，顯示L-NAME可顯著增強(qiáng)SAHF的鎮(zhèn)痛作用(P<0.01)，提示SAHF的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制與降低體內(nèi)過(guò)量的NO有關(guān)，為進(jìn)一步探討其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

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(本文編輯：葉華珍； 英文編輯：王建東)

Effects of nitric oxide synthase inhibitor on the analgesic effects induced byScheffleraarboricolaHayata flower

SUN Ai-jing, PANG Su-qiu, CHEN Yan-mei

(DepartmentofClinicalPharmacy,the180thHospitalofPLA,Quanzhou362000,Fujian,China)

Objective To explore the relationship ofScheffleraarboricolaHayata flower (SAHF) and nitric oxide synthase(NOS) inhibitor on the analgesia. Methods Mice were randomly separated into the normal saline group(negative control group), tramadol group(positive control group) and experimental groups. The analgesic effects of SAHF were observed by hot-plate test, and L-Arg and nitric oxide synthase inhibitor (L-NAME) were administered in combination with SAHF to study the influence on the anti-analgesia effect. Results Contrasted with the normal saline group, L-NAME can enhance the analgesic action of SAHF(P<0.01), and contrasted with SAHF group, L-NAME can reduce the level of nitric oxide in the brain(P<0.05). Conclusion SAHF has significant analgesic effects, which may be related with excessive nitric oxide, and the analgesia of SAHF could be augmented by L-NAME.

ScheffleraarboricolaHayata flower; Nitric oxide synthase; L-NAME; Analgesic

南京軍區(qū)醫(yī)藥衛(wèi)生科研基金(15MS114)

362000泉州，解放軍第180醫(yī)院臨床藥學(xué)科

孫愛(ài)靜，龐素秋，陳滟湄.一氧化氮合酶抑制劑對(duì)七葉蓮花鎮(zhèn)痛作用的影響[J].東南國(guó)防醫(yī)藥，2017,19(3):231-233.

R285.5

A

1672-271X(2017)03-0231-03

10.3969/j.issn.1672-271X.2017.03.002

2017-02-22;

2017-04-19)