高效毛細管電泳法測定阿齊沙坦含量

李 歡， 劉芷含， 關 瑾， 閻 峰， 石 爽， 王思林

(沈陽化工大學 應用化學學院， 遼寧 沈陽 110142)

高效毛細管電泳法測定阿齊沙坦含量

李 歡， 劉芷含， 關 瑾， 閻 峰， 石 爽， 王思林

(沈陽化工大學 應用化學學院， 遼寧 沈陽 110142)

采用高效毛細管電泳法測定阿齊沙坦的含量.在背景電解質為10 mmol/L 磷酸氫二鉀-10 mmol/L四硼酸鈉(pH=6.5)、分離電壓為28 kV的條件下，阿齊沙坦分析時間小于4 min.阿齊沙坦質量濃度在2～100 mg/L內線性關系良好；方法的檢測限和定量限分別為0.6 mg/L和2.0 mg/L；加標回收率為 100.0 %～101.5 %，相對標準偏差為0.25 %～0.75 %.該方法簡便快捷，為阿齊沙坦的定量分析提供了可靠方法.

阿齊沙坦； 毛細管電泳法； 檢測

阿齊沙坦(Azilsartan)化學名為1-[[2′-(4,5-二氫-5-氧代-1,2,4-噁二唑-3-基)[1,1′-聯苯基]-4-基]甲基]-2-乙氧基-1H-苯并咪唑-7-羧酸，是由日本武田公司研發的血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑[1]，于2012年1月18日在日本批準上市，用于高血壓的治療，化學結構式見圖1.毛細管電泳是20世紀80年代后期在全世界范圍內迅速發展起來的一種分離分析技術，它具有高效、快速、微量的特點[2]，是一種綠色的分析方法，該方法廣泛用于藥物的含量分析[3-6].目前，國內外沒有分析阿齊沙坦原料藥含量的報道.本文首次采用高效毛細管電泳紫外檢測法分析阿齊沙坦含量，對方法的有效性進行了驗證并應用于實際樣品的分析.

圖1 阿齊沙坦化學結構式

1 儀器與試劑

高效毛細管電泳儀，配有HV-301高壓電源，UV-K-2501型紫外檢測器，北京彩陸科學儀器有限公司；熔融石英毛細管，50 μm I.D.，河北永年銳灃色譜器件有限公司.

阿齊沙坦標準品，質量分數≥99 %，廠家提供；阿齊沙坦原料藥樣品，本實驗室自制；水為二次蒸餾水，其它試劑為分析純.

2 方法與結果

2.1 毛細管電泳條件

毛細管，有效長度45 cm，內徑50 μm；分離電壓為28 kV；檢測波長250 nm；背景電解質為10 mmol/L 四硼酸鈉-10 mmol/L 磷酸氫二鉀(pH=6.5).使用前毛細管柱依次用0.1 mol/L 氫氧化鈉沖洗10 min，二次蒸餾水沖洗10 min，背景電解質沖洗10 min后進樣；兩次進樣之間用背景電解質沖洗3 min；采用虹吸進樣，進樣高度差10 cm，進樣時間20 s；背景緩沖溶液和樣品溶液在使用前均經0.45 μm微孔濾膜過濾.

2.2 溶液配置

取阿齊沙坦標準品適量，精密稱量，用乙腈溶液定容，配置成1 g/L儲備液；根據需要用乙腈將其逐級稀釋，配置成50 mg/L的工作溶液及適當質量濃度的系列標準溶液.

2.3 毛細管電泳條件優化

實驗分別考察了背景電解質含有5～50 mmol/L硼酸鹽、磷酸鹽以及醋酸鹽溶液和5～30 kV分離電壓對分析結果的影響.隨著分離電壓的增大，電滲流增大，阿齊沙坦的遷移時間縮短；同時導致焦耳熱增大，色普峰展寬.最終確定緩沖液為10 mmol/L四硼酸鈉-10 mmol/L磷酸氫二鉀(pH=6.5)，分離電壓為28 kV，在此條件下阿齊沙坦保留時間在4 min內且峰形較好，可以滿足快速測定其含量的分析要求，阿齊沙坦分析電泳圖見圖2.

圖2 阿齊沙坦的毛細管電泳圖

2.4 標準曲線

分別精密量取0.02 、0.25、0.5、0.75、1.0 mL儲備液置于10 mL容量瓶中，用乙腈溶液定容，搖勻，配制成阿齊沙坦質量濃度為2、25、50、75、100 mg/L的溶液，分別進樣20 s，記錄峰面積，以峰面積(A)對質量濃度(ρ)線性回歸，阿齊沙坦回歸方程為：A=588.87ρ+4 091(R2=0.999 2).結果表明阿齊沙坦質量濃度在2～100 mg/L范圍內與峰面積呈良好的線性關系.

2.5 方法的檢出限及定量限

用乙腈將儲備液進行一系列稀釋，分別進樣20 s，測定.按信噪比(S/N)為3∶1，測得阿齊沙坦的檢出限為0.6 mg/L，按信噪比(S/N)為10∶1，測得阿齊沙坦的定量限為2.0 mg/L.

2.6 方法的精密度

制備50 mg/L阿齊沙坦供試液6份，按前面2.1節的電泳條件進樣，記錄峰面積和保留時間，計算峰面積和保留時間的RSD分別為 0.95 %和0.50 %，表明方法的精密度良好.

2.7 方法的準確度

制備25 mg/L阿齊沙坦原料藥9份，分別加入質量濃度為20、25、30 mg/L的阿齊沙坦標準品各3份，計算回收率.回收率為100.0 %～101.5 %，相對標準偏差為0.25 %～0.75 %.

2.8 溶液穩定性實驗

取50 mg/L阿齊沙坦供試液，避光，放置在4 ℃的冰箱里，分別在0、1、2、4、6、8 h按2.1節的電泳條件進樣，計算峰面積RSD為0.95 %，表明樣品溶液避光并在4 ℃的冰箱里放置8 h穩定.

2.9 實際樣品分析

利用新建立的方法測定了本實驗室自制的阿齊沙坦原料藥樣品3批，結果見表1，樣品中阿齊沙坦的質量分數為98.0 %～100.2 %.

表1 阿齊沙坦實際樣品含量測定結果(n=3)

3 結 論

建立了阿齊沙坦的高效毛細管電泳分析方法.考察了背景電解質組成和濃度、分離電壓等因素對分析的影響，在優化電泳條件下阿齊沙坦分析時間為4 min，并且對該方法進行了方法學驗證及實際樣品中阿齊沙坦的含量檢測.該方法簡單、快速，靈敏度、準確度和精密度均令人滿意，適用于阿齊沙坦的快速含量測定，為阿齊沙坦含量的測定分析提供了可靠的參考方法.

[1] 楠本啓司.新規アンジオテンシン AT1 受容體ブロッカーアジルサルタンの in vitro および in vivo 薬理作用[J].日本薬理學雑誌,2012,139(6):236-240.

[2] KENNDLER E.A Critical Overview of Non-aqueous Capillary Electrophoresis.Part Ⅱ： Separation Efficiency and Analysis Time[J].J Chromatography A，2014,1335:31-41.

[3] ATURKI Z,ROCCO A,ROCCHI S,et al.Current Applications of Miniaturized Chromatographic and Electrophoretic Techniques in Drug Analysis[J].J Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2014,101:194-220.

[4] 趙新穎,屈鋒,王勇,等.2013年毛細管電泳技術年度回顧[J].色譜,2014,32(1):1-6.

[5] 關瑾,牛秋玲,何傳昌,等.毛細管電泳法測定對乙酰氨基酚的含量[J].華西藥學雜志,2013,28(6):615-616.

[6] 閻峰,關瑾,陳星,等.高效毛細管電泳法測定乳氟禾草靈的含量[J].農藥,2010,49(9):662-663.

Determination of Azilsartan by High Performance Capillary Electrophoresis

LI Huan, LIU Zhi-han, GUAN Jin, YAN Feng, SHI Shuang, WANG Si-lin

(Shenyang University of Chemical Technology, Shenyang 110142， China)

A high performance capillary electrophoresis (HPCE) method has been established for the analysis of azilsartan.The analysis was completed in less than 4 min in 10 mmol/L sodium tetraborate and 10 mmol/L dipotassium hydrogen phosphate buffer (pH 6.5) at 28 kV of separation voltage.A good linearity was obtained for azilsartan in the range from 2 to 100 mg/L.The limits of detection (LOD) and quantification (LOQ) were 0.6 mg/L and 2.0 mg/L,respectively.The average recoveries were in the range of 100.0 %～101.5 %,and relative standard deviations (RSD) were between 0.25 % and 0.75 %.The method is rapid,simple and accurate which provides new and reliable means for the analysis of azilsartan.

azilsartan; high performance capillary electrophoresis; determination

2014-12-06

遼寧省教育廳高等學校科學研究基金項目(L-2012150，L-2014160)

李歡(1989-)，男(蒙古族)，黑龍江雙鴨山人，碩士研究生在讀，國家獎學金獲得者，主要從事藥物分析的研究.

關瑾(1967-)，女(錫伯族)，遼寧沈陽人，副教授，博士，主要從事藥物分離分析新方法與新技術的研究.

2095-2198(2017)02-0116-03

10.3969/j.issn.2095-2198.2017.02.004

R927.2

： A