熊膽粉和豬膽粉干預脂肪肝大鼠的實驗研究

李曄曾建偉歐余航婁云云湯錦周

（1福建醫科大學附屬龍巖第一醫院龍巖 364000；2福建中醫藥大學中西醫結合研究院福州 350122；3福建中醫藥大學附屬第三人民醫院福州 350122；4福建中醫藥大學藥學院福州 350122）

熊膽粉和豬膽粉干預脂肪肝大鼠的實驗研究

李曄1曾建偉2#歐余航3婁云云4湯錦周4

（1福建醫科大學附屬龍巖第一醫院龍巖 364000；2福建中醫藥大學中西醫結合研究院福州 350122；3福建中醫藥大學附屬第三人民醫院福州 350122；4福建中醫藥大學藥學院福州 350122）

目的：探討熊膽粉和豬膽粉干預高脂飲食引起脂肪肝大鼠的差異，為替代使用提供實驗依據。方法：32只SD大鼠隨機分為四組（每組8例）：空白對照組、高脂飲食模型組、熊膽粉干預組和豬膽粉干預組，分別記錄體重和肝臟重量的變化，HE染色法檢測肝臟組織的形態變化，并檢測每組血清的谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和總膽固醇四個生化指標分析對比肝功能的變化情況。結果：熊膽粉和豬膽粉對高脂飲食引起的大鼠體重和肝臟重量的非正常升高均有下降趨勢，但熊膽粉有統計學意義；HE染色觀察熊膽粉和豬膽粉對脂肪肝大鼠肝損傷病理狀態的影響，發現熊膽粉能有效改善肝組織的損傷情況，而豬膽粉對脂肪肝引起的肝損傷變化沒有作用；肝功能生化指標的檢測結果發現，熊膽粉能有效降低脂肪肝引起的谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和總膽固醇指標的升高，而豬膽粉只對乳酸脫氫酶有影響。結論：對脂肪肝大鼠的干預效果，熊膽粉優于豬膽粉。

脂肪肝；熊膽粉；豬膽粉；實驗研究

脂肪肝是一種常見的肝功能代謝紊亂引起的肝細胞中脂質積累過多引起的病變[1]。它正嚴重威脅人們的健康，在我國成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病[2]。中醫藥多途徑、多層次、多靶點的治療肝損傷的優勢日益明顯，故值得深入研究[3～5]。熊膽作為傳統名貴藥材具有清熱解毒，提高免疫力、利濕、退黃、利膽、保肝、抗病毒等作用，在臨床上已經廣泛應用于各種肝病，主要包括慢性乙型肝炎、慢性肝病殘留黃疸、慢乙肝并膽囊炎、黃疸型肝炎、高黃疸慢性乙型肝炎等[6]。由于熊膽來源的特殊性，使得熊膽粉極為珍貴。同樣含有天然膽汁酸成分，并且來源廣泛的豬膽是否也具有治療慢性肝病的藥效作用，能否替代熊膽，有待進一步研究。本研究以高脂喂養誘導脂肪肝大鼠為模型，用熊膽和豬膽對其進行干預治療，比較兩種膽汁對慢性肝損傷的治療作用，為臨床用藥提供實驗依據。現報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗材料供試樣品熊膽粉為市面上購買的熊膽凍干粉，豬膽粉為豬膽汁高速減壓離心干燥得到的膽汁晶體；實驗動物和高脂飼料購自上海斯萊克實驗動物有限公司。

1.2 實驗動物模型32只6周齡清潔級SD大鼠（實驗動物和高脂飼料購自上海斯萊克實驗動物有限公司），按體重隨機分成四組：空白對照組，模型組，熊膽粉干預組和豬膽粉干預組，每組8例。動物自由進食、飲水，基礎飼料，溫度20～24℃，濕度40%～70%[（50±5）%]，風速0.1～0.2m/s，氣流≥28次/m in。自然光照環境中飼養，常規觀察1周后實驗。造模時，除空白對照組以基礎飼料外，其余各組飼料以高脂飼料（豬油10%、膽固醇2%、豬膽鹽0.7%、基礎飼料87.3%），飼養6周，自由飲水。6周后脂肪肝模型制備完成[7]。從第7周起，干預組分別用熊膽粉和豬膽粉[0.05 g/（kg·d）]對造模大鼠進行灌胃干預4周，空白對照組灌等體積的生理鹽水。每周稱體重，4周后取材，主動脈采血，取全肝組織。

1.3 實驗方法

1.3.1 一般情況觀察大鼠體重稱量，觀察不同膽粉對大鼠一般狀態的影響。

1.3.2 肝臟形態學變化取10%甲醛溶液中固定的肝組織，通過常規脫水、石蠟包埋進行切片，后經HE染色，光鏡下觀察肝組織病理改變。

1.3.3 生化指標檢測全自動生化分析儀分析大鼠血清肝生化指標：谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和總膽固醇。

1.4 統計學分析采用SPSS18.0軟件分析數據，實驗數據以（±s）表示，多組均數間比較采用單因素方差分析檢驗，P＜0.05表示有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠一般狀態實驗結果觀察實驗全程，空白組大鼠精力充沛，始終保持常規食物攝入量，毛皮白凈光滑，尿液呈淡黃色。相比之下，模型組大鼠活動明顯減少，同時飲食量較空白組大鼠明顯減少。此外，毛皮顏色變得油膩，暗淡，而尿液變成了暗黃色。然而，接受熊膽粉和豬膽粉干預后一般狀態有顯著提高，包括運動恢復，毛色不油膩，尿液顏色相對模型組較淡。

2.2 熊膽粉和豬膽粉干預后對肝損傷模型大鼠體重的影響高脂飲食的大鼠體重和肝臟重量顯著增加。用不同的膽粉藥物干預高脂飲食大鼠在體重和肝臟重量上有不同程度的改善。值得注意的是，熊膽粉干預后的模型大鼠體重和肝重都有明顯的恢復，且具有統計學意義，而豬膽粉干預的模型大鼠雖然體重和肝重都有下降，但結果并不顯著。見圖1，圖2。

圖1 熊膽粉和豬膽粉對脂肪肝大鼠體重的影響

圖2 熊膽粉和豬膽粉對脂肪肝大鼠肝重的影響

2.3 病理組織學結果光鏡下觀察四組大鼠肝臟病理組織學改變，空白對照組可見肝小葉輪廓清晰，細胞分界清，核圓，位于細胞中央，胞質豐富，呈嗜堿性；高脂飲食模型組可見肝小葉結構破壞，肝板排列紊亂，呈點、片狀壞死，肝細胞明顯腫脹，胞質中可看到大小不等、數量不一的圓形脂肪空泡，散在肝細胞嗜酸性變，小葉中央靜脈周圍有炎性細胞浸潤，有的肝細胞質中有紅色顆粒狀Mallory小體；熊膽粉干預組大鼠肝細胞渾濁明顯減輕，肝板排列恢復，細胞內偶有小脂滴；豬膽粉干預組與模型組沒有顯著差別。見圖3。

圖3 HE染色觀察熊膽粉和豬膽粉對脂肪肝大鼠肝組織病理狀態的影響

2.4 生化測定結果與空白對照組相比，模型組大鼠血清谷草轉氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶和總膽固醇水平明顯高于正常組（P＜0.05，P＜0.01）。與模型組比較，熊膽粉干預組四種生化指標均有顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）；豬膽粉干預組降低乳酸脫氫酶的活力有統計學意義，對谷草轉氨酶和堿性磷酸酶的活力影響有下降的趨勢，但無統計學意義（P＞0.05），同時，對總膽固醇含量未起到抑制作用。見表1。

表1 熊膽和豬膽對脂肪肝大鼠肝生化指標的影響（±s）

表1 熊膽和豬膽對脂肪肝大鼠肝生化指標的影響（±s）

注：與空白對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別谷草轉氨酶（U/L）堿性磷酸酶（U/L）乳酸脫氫酶（U/L）總膽固醇（mmol/L）空白對照組模型組熊膽粉干預組豬膽粉干預組57.88±8.75 84.23±11.06##68.19±11.93*80.49±12.66 132.25±17.43 169.13±33.83#159.00±17.71*167.38±35.27 229.18±38.45 290.64±33.58##212.28±60.59**249.11±58.70*1.36±0.12 1.95±0.19#1.78±0.29*2.21±0.30

3 討論

在中醫臨床實踐中，動物膽粉常用于中藥治療各種慢性肝病。然而，對動物膽粉療效對比的研究甚少。目前的研究表明，在高脂飲食誘導的大鼠脂肪肝模型中，不同膽汁粉對脂肪肝有不同的生物效應。熊膽粉作為一種名貴動物類中藥，具有清熱解毒、息風止痙、清肝明目的功效，現代藥理學研究發現熊膽粉所含的膽汁酸鹽能促進脂肪、類脂質及脂溶性維生素的消化吸收，因此，熊膽粉在控制脂肪肝大鼠體重、肝重、肝臟病理狀態及肝生化指標上均有顯著性的效果；豬膽粉對高脂模型大鼠的整體變化有降低趨勢，但效果不顯著。這種結果可能是由于豬膽粉所含的成分與熊膽粉不同所致。特別是熊膽粉不僅可以抑制高脂飲食引起的體重和肝臟重量的增加，而且還大大減輕肝組織中炎癥細胞的浸潤和脂質積累。這為臨床動物膽粉的選擇使用提供了實驗依據。

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R285.5

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2017.04.101

2017-03-05）

#通訊作者：曾建偉，E-mail：zjw tcm@qq.com