蝴蝶蘭花梗腋芽組織培養探究

摘 要 以蝴蝶蘭花梗腋芽為外植體，在誘導培養基為MS+3～5 mg/L BA，增殖培養基為MS+3 mg/L BA+15%椰汁，生根培養基為1/2MS+1.5 mg/L IBA+0.05 mg/L NAA+150 g/L香蕉泥時獲得了最理想的培養效果。

關鍵詞 蝴蝶蘭；組織培養；激素

中圖分類號：S682.31 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2017.09.065

蝴蝶蘭也叫洋蘭，是蘭科蝴蝶蘭屬植物，多年生熱帶氣生蘭。蝴蝶蘭株形美觀、花姿婀娜、色彩艷麗、花期持久，在熱帶蘭中素有“蘭花皇后”之美稱。蝴蝶蘭因花形似蝴蝶而得名，在世界各國廣為栽培，是近年來在國際花卉市場上最受歡迎的洋蘭。蝴蝶蘭常規繁殖方法有分株法和播種法。在常規繁殖中，有3個難題：一是蝴蝶蘭屬單莖類蘭花，植株極少發育側芽，用分株繁殖方法增殖緩慢；二是蝴蝶蘭的種子非常瘦弱，胚很弱小，種子中幾乎沒有營養物貯藏，若在自然條件下繁殖，幾乎絕大多數種子會在發芽過程中死亡；三是嚴重感染病毒，導致種性降低。采用組織培養的方法進行蝴蝶蘭無性繁殖，可以在一定程度上解決上述問題，因此目前大都是通過植物組織培養的方式來大量繁殖蝴蝶蘭。

雖然根據細胞全能性理論，植物體的任何器官、任何組織和細胞都可以作為組培快繁的外植體，但實際上，蝴蝶蘭的不同器官和組織擁有不同的分化再生能力，因此選擇最適宜的外植體十分重要。蝴蝶蘭的組培外植體主要有葉片、花梗腋芽、花梗節間、莖尖、根尖等，其中花梗腋芽因具有取材和滅菌容易、不傷及母株、組培效果好等優點而成為蝴蝶蘭組培的最佳外植體。

1 材料與方法

1.1 外植體

選擇已過盛花期帶休眠芽的花梗作為外植體。

1.2 初代培養

取蝴蝶蘭花梗，除去已開放的花朵和未開放的花蕾，在自來水下用細軟毛刷輕刷表面，并吸干表面水分，將花梗剪成長4 cm左右的花梗段（腋芽上下各2 cm），剝去腋芽外的苞片，放入經高溫滅菌過的燒杯中，在工作臺上進行滅菌：加入75%的酒精浸泡10 s；0.1%的HgCl2滅菌

6 min，滅菌后用無菌水沖洗5次，每次2 min；將帶芽莖段接種到誘導培養基上。切取外植體的工具要銳利，同時切割動作要快，防止擠壓，以免使材料受傷；切取外植體時切口或切點要適宜、準確，例如：切花梗時，下端切口45°，上端切口平面。

蝴蝶蘭花梗接種到不同激素濃度的培養基上，每天光照12 h，光強1 600 Lx，溫度（25±2）℃，生長7 d后在花梗的基部有褐色物質產生，腋芽開始萌動，1 月后腋芽可以長到1.5 cm高，出芽率可達50%。

1.3 增殖培養

50 d之后，花?；亢团囵B基逐漸變黑，將長出的芽選取約1.5 cm高的苗，取出后切去葉片和基部褐化部分，轉接到增殖培養基中，大約40 d后，增殖倍數可達到3倍以上。

1.4 生根培養

將高約2.0 cm的蝴蝶蘭試管苗接種到生根培養基中，50 d后全部生根，平均生根3.5條，長2.5 cm。

1.5 馴化移栽

移栽前7 d內，在培養室內將蝴蝶蘭培養瓶封口膜松開，使空氣進入培養瓶與幼苗接觸。2 d之后，移栽到基質中轉移到煉苗室內，使幼苗完全暴露在自然空氣中，煉苗期間要用遮陽網適當遮陽，避免高溫灼燒和強光直接照射。移栽方法：將已生根的蝴蝶蘭組培苗從培養瓶取出，小心洗去根部的培養基，移栽到滅菌后的苔鮮基質中。用鑷子劃出痕跡后，夾住蝴蝶蘭組培苗的根部，插入基質中，深度以至第1輪葉為好，用手仔細壓實，覆蓋薄膜，室溫保持在21～25 ℃，相對濕度65%～80%，控制好溫度和水分，移栽成活率可達85%以上。當幼苗長出新葉、新根伸長時，用0.3%～0.5%磷酸二氫鉀進行葉面施肥，每周1次即可，成苗率可以達到85%以上。

2 結果討論

第一，以蝴蝶蘭花梗腋芽為外植體，在誘導培養基為MS+3～5 mg/L BA，增殖培養基為MS +BA3 mg/L +椰汁15%，生根培養基為1/2MS+1.5 mg/L IBA+0. 05 mg/L NAA+150 g/L香蕉泥時獲得了最理想的培養效果。

第二，和其他蘭科植物一樣，蝴蝶蘭在組培快繁生產中極易出現褐變死亡的現象。因此防止褐變成了蝴蝶蘭組培快繁成功的關鍵。研究表明，添加2 g/L的活性炭時效果較為顯著；及時去除蝴蝶蘭培養物的褐變部分并經常更換新鮮的繼代培養基，能有效抑制蝴蝶蘭外植體褐變死亡現象的發生。

第三，外植體的來源是決定蝴蝶蘭組培成敗的重要因素。首先，在選擇外植體時，應先選擇生長健壯、無病蟲害、無變異的母株。其次，在采取外植體之前5～7 d，用殺菌劑噴灑蝴蝶蘭母株，這種采前預處理的方式，可在很大程度上預防和降低污染，提高初代培養時誘導出芽的成功率。最后，采取外植體的最佳時間為第一朵花現蕾時的花梗腋芽。

第四，生長素和細胞分裂素對蝴蝶蘭原球莖增殖與芽的分化有著決定性的作用。蝴蝶蘭組培快繁過程中最常用的細胞分裂素為6-BA，大量研究資料表明，當采用低濃度的6-BA時有利于原球莖的增殖，而用高濃度的6-BA時會促進多酚氧化酶作用，產生大量醌類物質，使原球莖發生褐變。低濃度的NAA對原球莖增殖和出苗均有促進作用，高濃度的則不利。

第五，天然復合物對蝴蝶蘭原球莖增殖和分化的影響。往培養基中加入一些天然復合物，如椰汁、黃熟的小香蕉泥等，能為培養物提供一些必要的營養物質，如微量元素、生理活性物質和植物生長激素等，在培養基中加入100～200 g/L的香蕉泥，對培養基的pH值具有較大的緩沖作用，可促進蝴蝶蘭幼苗的發育。水解酪蛋白也是天然復合物，它對蝴蝶蘭原球莖增殖也有明顯的促進作用，但若將水解酪蛋白和香蕉勻漿組合使用卻對適得其反，它會抑制蝴蝶蘭原球莖的增殖，可能天然復合物之間會發生相互作用，或者天然復合物與培養基之間的相互作用也可能對原球莖增殖有影響。許多研究資料表明，添加適量的椰乳、黃熟的香蕉泥或含膠質的果蔬汁等均對原球莖增殖有明顯促進效果。如果在培養基中添加一定量的活性炭也會對原球莖增殖產生影響，低濃度（0.5～1.0 g/L）的活性炭對原球莖增殖影響不明顯，高濃度（2.0～3.0 g/L）的活性炭對原球莖增殖有促進作用，但原球莖易出現黃化現象。蔗糖是培養基的能源物質，也是培養基的滲透調節劑，對原球莖的增殖影響較大，2%濃度的蔗糖有利于原球莖生長，2%～3%濃度的蔗糖可以促進蝴蝶蘭芽的形成，5%的蔗糖則有利于根的分化和生長。

第六，繼代培養次數的控制。大多數蝴蝶蘭品種培養材料在組培過程中會隨著繼代培養次數的增加而逐漸衰退，主要表現在種性退化、生長不良、再生能力和增殖率下降、變異率提高等。

第七，壯苗生根。為了提高移栽成活率，通常在生根移栽之前會進行壯苗培養。壯苗的關鍵在于選擇合適的激素種類和濃度，一般需要適當降低培養基中的激素含量，以便形成健壯苗。常用的植物生長激素有IBA、NAA。研究表明，在壯苗生根階段，無機鹽成分是影響蝴蝶蘭叢生芽生根率的主要原因，其次是培養基中蔗糖的量，最后是NAA和多效唑。

（責任編輯：趙中正）

收稿日期：2017-02-18

作者簡介：盧娟（1978—），女，湖北宜昌人，碩士，講師，主要研究方向為園林園藝、水保、水文等。