甲胎蛋白異質體在原發性肝癌中的表達及意義

陳秋英 劉志偉 劉艷芬 時秀菊

·論著·

甲胎蛋白異質體在原發性肝癌中的表達及意義

陳秋英 劉志偉 劉艷芬 時秀菊

目的 研究甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白異質體(AFP-L3)在原發性肝癌患者血清中的表達及意義。方法 分別采用電化學發光法、酶聯免疫吸附實驗(ELISA)測定80例原發性肝癌(原發性肝癌組)、80例良性肝病(良性肝病組)及80例健康體檢者(健康對照組)血清AFP、AFP-L3含量及檢出陽性率，分析AFP-L3與腫瘤大小、臨床分期、組織分化程度的關系。結果 與健康對照組比較，良性肝病組和原發性肝癌組血清AFP、AFP-L3含量、檢出陽性率顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)；良性肝病組和原發性肝癌組比較，差異有統計學意義(P<0.05)。AFP-L3檢出陽性率隨腫瘤直徑增加、臨床分期進展逐漸升高，差異有統計學意義(P<0.05)，而不同組織分化程度間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。原發性肝癌組腹腔積液脫落癌細胞、肝組織AFP、AFP-L3含量和檢出陽性率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。聯合檢測血清AFP、AFP-L3診斷原發性肝癌的敏感性為86.25%，特異性為93.75%。結論 AFP-L3在原發性肝癌的早期診斷中具有一定臨床價值。

甲胎蛋白異質體；原發性肝癌；腫瘤標志物

原發性肝癌是我國最常見的消化系統惡性腫瘤之一，其病死率居惡性腫瘤第二位。近年來，原發性肝癌發病率呈逐年上升趨勢，患者病死率高，預后差[1,2]。因此，早期發現、早期診斷對于疾病治療具有重要意義。血清甲胎蛋白(AFP)是目前應用最為廣泛的原發性肝癌腫瘤標志物，但10%～30%的原發性肝癌患者血清AFP檢測仍呈陰性。此外，AFP對于原發性肝癌早期診斷靈敏性和特異性不高，因此仍需要借助2種或2種以上腫瘤標志物才能提高診斷效率[3]。研究發現，血清甲胎蛋白異質體(AFP-L3)作為肝癌細胞特有的新型腫瘤標志物，對于原發性肝癌的早期診斷價值更高[4,5]。本研究主要探討AFP-L3在原發性肝癌患者血清中的表達及與腫瘤病理特性的關系，并探討AFP、AFP-L3聯合檢測在原發性肝癌中的診斷價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年10月至2017年2月我院收治的原發性肝癌80例，其中男70例，女10例；年齡25～80歲，平均年齡(55.34±7.12)歲；腫瘤直徑：≤5 cm 12例，5～10 cm 39例，≥10 cm 29例；腫瘤分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期32例，Ⅳ期26例；腫瘤分化程度：高分化10例，中分化45例，低分化25例。良性肝病80例(慢性肝炎52例，肝硬化28例)，其中男67例，女13例；年齡22～82歲，平均年齡(53.88±6.72)歲。另設健康對照80例，男64例，女16例；年齡20～78歲，平均年齡(52.59±7.11)歲。3組年齡、性別比等基本資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 診斷標準

1.2.1 原發性肝癌診斷標準：以CT、肝動脈造影等影像學診斷為標準，且術后經病理確診，符合內科學(第8版)制定的原發性肝癌診斷標準[6]。

1.2.2 慢性肝炎診斷標準：乙肝表面抗原(+)持續超過6個月，影像學檢查未見肝硬化、肝內占位性病變及門脈高壓，符合2010年中華醫學會肝病學分會、感染病學分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標準[7]。

1.2.3 肝硬化診斷標準：根據癥狀體征、實驗室檢查及CT、磁共振等影像學檢查排除肝癌，符合肝病診療指南中的肝硬化診斷標準[8,9]。

1.3 觀察指標 觀察3組血清AFP、AFP-L3含量及檢出陽性率。

1.3.1 標本采集:①血清標本：抽取患者清晨空腹靜脈血5 ml，3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20℃保存備用。②腹腔積液標本：采用腹腔穿刺抽取中段腹腔積液10 ml，3 000 r/min離心5 min，分離上清，于2 h內檢測標本。

1.3.2 AFP、AFP-L3含量:采用德國Liaison索林全自動化學發光分析儀及配套試劑檢測AFP含量，嚴格按照試劑盒說明書操作。采用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)檢測AFP-L3含量，試劑盒由美國Sigma公司提供，嚴格按照試劑盒說明書操作。

2 結果

2.1 3組血清AFP、AFP-L3含量比較 與健康對照組比較，良性肝病組和原發性肝癌組血清AFP、AFP-L3含量顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)；良性肝病組和原發性肝癌組比較差異也有統計學意義(P<0.05)。見表1。

組別AFPAFP-L3健康對照組 2.47±0.321.98±0.24良性肝病組 8.43±1.04*6.56±0.81*原發性肝癌組834.19±79.33*#792.43±80.48*#

注：與健康對照組比較,*P<0.05;與良性肝病組比較,#P<0.05

2.2 3組血清AFP、AFP-L3檢出陽性率比較 與健康對照組比較，良性肝病組和原發性肝癌組血清AFP、AFP-L3檢出陽性率顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)；良性肝病組和原發性肝癌組比較差異也有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組血清AFP、AFP-L3檢出陽性率比較 n=80,例(%)

注：與健康對照組比較,*P<0.05;與良性肝病組比較,#P<0.05

2.3 原發性肝癌組AFP、AFP-L3分布情況 與AFP<25 ng/ml原發性肝癌組比較，25 ng/ml≤AFP≤400 ng/ml原發性肝癌組、≥400 ng/ml原發性肝癌組AFP-L3檢出陽性率>10%的比例顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)；AFP<25 ng/ml原發性肝癌組和AFP≥400 ng/ml原發性肝癌組比較差異也有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 原發性肝癌組AFP、AFP-L3分布情況 例(%)

注：與AFP<25 ng/ml比較,*P<0.05;與25≤AFP≤400 ng/ml,#P<0.05

2.4 AFP-L3與原發性肝癌臨床病理特征的關系 原發性肝癌組AFP-L3與腫瘤直徑和腫瘤分期具有相關性，隨著腫瘤直徑增加及病情進展AFP-L3含量、AFP-L3檢出陽性率逐漸升高，差異均有統計學意義(P<0.05)；AFP-L3與腫瘤分化程度不具有相關性，隨著腫瘤分化程度提高AFP-L3含量、AFP-L3檢出陽性率雖顯示逐漸升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

2.5 原發性肝癌組腹腔積液、肝組織中所測AFP、AFP-L3含量比較 腹腔積液脫落癌細胞、肝組織中所測AFP、AFP-L3含量比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表5。

2.6 原發性肝癌組腹腔積液、肝組織中AFP、AFP-L3檢出陽性率比較 腹腔積液脫落癌細胞、肝組織中AFP、AFP-L3檢出陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表6。

2.7 原發性肝癌組血清AFP、AFP-L3聯合檢測結果 80例原發性肝癌組以AFP、AFP-L3任何一個指標陽性作為判定原發性肝癌的標準，AFP(+)AFP-L3(+)62.50%(50/80)，AFP(+)AFP-L3(-)11.25%(9/80)，AFP(-)AFP-L3(+)12.50%(10/80)，AFP(-)AFP-L3(-)13.75%(11/80)，檢測原發性肝癌敏感性達86.25%(69/80)。見表7。

表4 AFP-L3與原發性肝癌臨床病理特征的關系

注：與≤5 cm比較，*P<0.05;與～10 cm比較，#P<0.05；與Ⅰ期比較，△P<0.05；與Ⅱ期比較，☆P<0.05；與Ⅲ期比較，▲P<0.05

組別AFPAFP-L3腹腔積液脫落癌細胞687.08±76.77892.98±85.58肝組織737.56±980.461048.78±88.56

表6 原發性肝癌組腹腔積液、肝組織中AFP、AFP-L3檢出陽性率比較 n=80,例(%)

表7 原發性肝癌組血清AFP、AFP-L3聯合檢測結果

2.8 原發性肝癌組血清AFP、AFP-L3聯合檢測結果 160例非原發性肝癌組(80例良性肝病組和80例健康對照組)以AFP、AFP-L3任何一個指標陰性作為判定非原發性肝癌的標準，AFP(+)AFP-L3(+)0(0/160)，AFP(+)AFP-L3(-)3.75%(6/160)，AFP(-)AFP-L3(+)2.50%(4/160)，AFP(-)AFP-L3(-)93.75%(150/160)，檢測非原發性肝癌特異性達93.75%(150/160)。見表8。

表8 非原發性肝癌組血清AFP、AFP-L3聯合檢測結果

3 討論

研究也表明，AFP并不是原發性肝癌早期診斷的理想腫瘤標志物，其診斷原發性肝癌的靈敏性和特異性不高[10]。因此，有必要尋找新的、最為有效的腫瘤標志物，從而有利于進一步提高腫瘤診斷效率。

目前認為AFP存在3種異質體(AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3)。AFP-L1主要來源于良性肝病，AFP-L2存在于妊娠及卵黃囊腫瘤患者中，而AFP-L3是肝癌細胞特有的一種生物惡性標志物[11,12]。研究表明，AFP-L3診斷原發性肝癌的靈敏度和特異度高達72.0%、82.0%，明顯高于AFP，且其對于良、惡性肝病的早期診斷和肝癌術后預后評估具有重要意義[13,14]。此外，Toyoda等[15]研究提出AFP-L3升高的良性肝病患者發展為原發性肝癌的發生率較AFP升高的患者明顯升高，且以AFP-L3為指標診斷和檢測原發性肝癌不依賴于AFP水平。

本研究采用電化學發光法、酶聯免疫吸附實驗(ELISA)測定80例原發性肝癌、80例良性肝病及80例健康體檢者血清AFP、AFP-L3含量及檢出陽性率，結果顯示，與健康對照組比較，良性肝病組和原發性肝癌組血清AFP、AFP-L3含量、檢出陽性率顯著升高，差異有統計學意義(P<0.05)；良性肝病組和原發性肝癌組比較差異也有統計學意義(P<0.05)，且AFP升高時AFP-L3檢出陽性率逐漸升高，說明AFP陽性時AFP-L3檢出陽性率對于原發性肝癌診斷具有一定指導意義。此外，通過分析AFP-L3與腫瘤大小、臨床分期、組織分化程度的關系，我們發現隨著腫瘤直徑增加和腫瘤分期進展AFP-L3檢出陽性率逐漸升高，然而AFP-L3檢出陽性率與腫瘤組織分化程度不具有相關性，與紀鳳卿等[16]研究結果一致，提示AFP-L3對于判斷腫瘤分期具有一定臨床應用價值。本研究也發現聯合檢測血清AFP、AFP-L3診斷原發性肝癌的敏感性為86.25%，特異性為93.75%。，較單獨一種腫瘤標志物的敏感性顯著升高，與Zhao等[17]報道一致，提示AFP、AFP-L3聯合檢測可作為確診原發性肝癌的較好腫瘤標志物，

綜上所述，AFP-L3作為診斷原發性肝癌的新型腫瘤標志物，對于疾病的早期診斷及腫瘤病理學特性的判斷具有重要臨床意義。聯合檢測AFP、AFP-L3能夠彌補單一指標檢測敏感性和特異性方面的不足，這有助于提高原發性肝癌檢測敏感性并防止漏檢，尤其對于AFP水平較低的早期肝癌患者至關重要，值得臨床推廣應用。

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Expression and clinical significance of alphafetoprotein variant in patients with primary liver cancer

CHENQiuying,LIUZhiwei,LIUYanfen,etal.

People’sHospitalofTangshanCity,Hebei,Tangshan063001,China

Objective To investigate the expression and clinical significance of serum alphafetoprotein (AFP) and alphafetoprotein variant (AFP-L3) in patients with primary liver cancer.Methods The serum levels of AFP and AFP-L3 as well as positive detection rate were detected by electrochemiluminescence method and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),respectively in 80 cases of primary hepatocellular carcinoma (primary liver cancer group),80 cases of benign liver diseases (benign liver disease group) and 80 healthy subjects (control group). Moreover the correlation between serum AFP-L3 and tumor size,cinical staging,tissue differentiation degree was analyzed.Results As compared with those in control group,the serum levels of AFP and AFP-L3 as well as positive detection rate in benign liver disease group and primary liver cancer group were significantly increased (P<0.05),moreover,there were significant differences between benign liver disease group and primary liver cancer group (P<0.05). The positive detection rates of AFP-L3 were closely correlated to tumor size and clinical stages (P<0.05), however, there were no significant differences between different tissue differentiation degree (P>0.05).Besides there were no significant differences in seroperitoneum abscission cancer cells,the levels of AFP,AFP-L3 in liver tissues and positive detection rates in primary liver cancer group (P>0.05). The sensitivity and specificity AFP by combination detection of serum levels of AFP and AFP-L3 in diagnosis of primary liver cancer were 86.25% and 93.75%,respectively.Conclusion The detection of AFP-L3 has certain clinical value in early diagnosis of primary hepatocellular carcinoma.

primary carcinoma of the liver;alphafetoprotein variant; alpha-fetoprotein

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.14.003

063001 河北省唐山市人民醫院

R 735.7

A

1002-7386(2017)14-2094-04

2017-01-19)