秦嶺太白山南方紅豆杉組織培養條件研究

王鋒，秦靜遠，何高社

（楊凌職業技術學院生物工程分院，陜西楊凌712100）

秦嶺太白山南方紅豆杉組織培養條件研究

王鋒，秦靜遠，何高社

（楊凌職業技術學院生物工程分院，陜西楊凌712100）

研究不同采集時間、不同培養基以及不同植物生長調節劑對太白山南方紅豆杉愈傷組織誘導、生長的影響。結果表明，采集時間為5月，以1/2 MS為基礎培養基，添加NAA 1.0 mg/L，6-BA 0.5 mg/L的愈傷組織誘導效果好。

太白山；南方紅豆杉；組織培養

南方紅豆杉（Taxus chinensis var.mairei）又名美麗紅豆杉，為我國特有的第三紀孑遺植物，現主要分布于長江流域、南嶺山脈以及山西、陜西等省，現存資源很少，處于瀕危狀態，1992年被列為一級珍貴保護樹種[1]。

由于紅豆杉的提取物紫杉醇具有獨特的抗癌機理，美國科學家稱紫杉醇是繼阿霉素、順鉑以后，被認為是對多種癌癥療效好、副作用小的新型抗癌藥物。紫杉醇的市場開發、應用潛力巨大，所以，紅豆杉的身價也因此倍增[2]。正因如此，我國的野生紅豆杉在短短的十幾年中遭到了史無前例的砍伐和破壞，野生存量銳減，有的地區甚至已瀕臨滅絕。因此，保護現有資源、人工擴大紅豆杉資源總量，就成為急需解決的問題，而常規的扦插、播種繁殖手段已不能滿足市場需要。植物組織培養技術為這一問題的解決提供了一條有效途徑。

當前對南方紅豆杉組織培養的研究主要集中在細胞培養和紫杉醇含量的影響因素上[3-5]，而營養器官組織培養再生植株方面的研究很少。本研究以太白山南方紅豆杉為培養材料，對不同培養基、不同采樣時間及不同外源激素組合對枝條離體快繁的影響進行研究，旨在為建立優質的南方紅豆杉種苗生產體系及快速繁殖優良品種提供基礎材料。

1 材料和方法

1.1 材料

試驗材料采自秦嶺太白縣靖口鎮廟臺村，30 a樹齡南方紅豆杉的當年生嫩枝和前1 a長出的未萌發的休眠枝作為外植體。

1.2 外植體消毒和接種

將試驗材料先用流水沖洗40 min，加入少量洗潔精洗滌10 min，再用流水沖洗1 h。轉至超凈工作臺中用75%酒精消毒30 s，無菌水沖洗3～4次。再用10%次氯酸鈉+洗潔精2滴，5月采集的嫩枝浸泡消毒15～16 min，8，11月采集的當年生嫩枝和前1 a長出的未萌發的休眠枝浸泡消毒18～20 min。

將浸泡次氯酸鈉消毒后的外植體用無菌水沖洗4～5次，轉移至無菌托盤上吸干水分，用剪刀剪取2.0～2.5 cm的莖段，每莖段帶1～2個腋芽，以形態學下端插入培養基，每瓶接種2～3段。培養條件為光照12 h/d，光照強度1 500 lx，溫度（24±1）℃。

1.3 試驗設計

1.3.1 基本培養基篩選分別以1/2 MS，MS，B5為基本培養基[6-9]，加入6-BA 0.5 mg/L和NAA 1 mg/L，篩選出最佳培養基。

1.3.2 采集時間對外植體生長和愈傷組織誘導的影響分別于5，8，11月采集30 a樹齡南方紅豆杉的當年生嫩枝和前1 a長出的未萌發的休眠枝作為外植體，接種在3種基本培養基上，分析采集時間對外植體生長和愈傷組織誘導的影響。

1.3.3 不同激素配比對愈傷組織誘導效果的影響

在篩選出的基本培養基上，分別添加不同濃度的NAA，2，4-D，6-BA，分析其對外植體生長和愈傷組織誘導的影響。

1.4 數據統計

接種后每日記錄外植體發育情況，統計初愈時間（每處理重復中第1塊外植體長出愈傷組織所需時間），計算愈傷組織誘導率。

愈傷組織誘導率=產生愈傷組織外植體個數/（接入外植體個數-被污染外植體個數）×100%。

2 結果與分析

2.1 基本培養基篩選結果

外植體在1/2 MS，MS和B5這3種培養基上培養結果表明，誘導率由大到小的順序為1/2 MS＞MS＞B5；初愈時間先后排序為1/2 MS，B5，MS（表1）。因此，選1/2 MS為最適基本培養基。

表1 外植體愈傷組織誘導情況

2.2 采集時間對外植體生長和愈傷組織誘導的影響

從表1可以看出，5月采集的最好，誘導率高，初愈時間短；11月采集的較好；8月采集的最差。

2.3 不同激素配比對愈傷組織誘導效果的影響

為研究不同激素種類及水平對愈傷組織誘導的影響，選取了11種不同組合激素處理（表2）進行研究。結果顯示，在NAA質量濃度為1.0 mg/L，6-BA質量濃度為0.5 mg/L（處理4）時，愈傷組織誘導效果優于其他激素組合處理。在只添加2 mg/L 2，4-D（處理11）的培養基中，其愈傷組織誘導率也遠高于除處理4，10以外的其他處理，生長狀態及速度也較好。結果表明，NAA質量濃度為1.0 mg/L，6-BA質量濃度為0.5 mg/L時，對愈傷組織的誘導和生長有顯著影響。

表2 不同激素配比對愈傷組織誘導的影響

3 結論與討論

通過基本培養基的篩選，1/2 MS培養基是太白山南方紅豆杉莖段培養最適的培養基。本試驗中，1/2 MS培養基培養的外植體愈傷組織誘導率高，小苗健壯，褐化程度輕。而在MS和B5培養基中培養的外植體誘導率較低，小苗瘦弱，褐化程度較高。MS培養基較B5培養基效果好一些，這與蘇應娟等[6-7]的研究結果一致。1/2 MS培養基是在MS培養基基礎上對無機鹽成分減半，有機成分不變，褐化程度較輕與此有關。據報道，降低鹽濃度可以減少酚類外溢，從而減輕褐變[10-13]。

對不同采集時間對外植體生長和愈傷組織誘導的影響研究表明，3個不同月份采集的外植體中，5月采集效果最好，與已報道的是一致的[14]。這可能與樹體本身的生理狀態和芽的休眠度有關。

在以1/2 MS為基本培養基的基礎上，添加NAA 1.0 mg/L，6-BA 0.5 mg/L的愈傷組織誘導效果好。同時，2，4-D的單獨使用，效果也很明顯，但有報道認為，2，4-D本身具有致癌活性，不適用于作為藥源的南方紅豆杉組織培養，適宜濃度的NAA可以替代2，4-D[15]。

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Study on Tissue Culture of Taxus chinensis var.mairei of Taibai Mountain in Qinling Mountains

WANGFeng，QINJingyuan，HE Gaoshe
（School ofBioengineering，Yangling Vocational&Technical College，Yangling 712100，China）

The paper studied the influence of different sampling time,different medium,different kinds and concentrations of plant growth regulators on induction,growth of Taxus chinensis var.mairei.The results showed that selecting the shoots as explants in May was suitable.1/2 MS medium containing NAA 1.0 mg/L and 6-BA 0.5 mg/Lcombination was applicable to induce callus out,and grewwell.

Taibai Mountain;Taxus chinensis var.mairei;tissues culture

S791.49

：A

：1002-2481（2017）07-1072-03

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.07.07

2017-01-19

楊凌職業技術學院科學研究基金項目（A2013001）

王鋒（1982-），男，陜西延川人，講師，碩士，主要從事植物生產和生物發酵等方面的教學研究工作。