滇池高背鯽人工繁殖與胚胎發育觀察研究

陳俊+郗啟文+華澤祥

摘要 對體重200～300 g的三倍體全雌性滇池高背鯽進行人工催產試驗，雄魚選擇體重180 g左右的云南光唇魚和100 g左右的短須裂腹魚，利用雄魚精液刺激滇池高背鯽卵子，觀察受精卵雌核發育情況。結果表明，雌魚注射500 IU/kg魚體重的HCG（水溫14 ℃左右），15～18 h后可進行人工催產，平均催產率93%。受精卵胚體呈青綠色，比重大于水，黏性強，平均卵徑1.8 mm；受精卵經歷胚盤隆起期、細胞分裂期、囊胚期、原腸期、神經胚期、胚孔封閉期、肌節出現期、眼囊期、尾牙期、尾泡期等16個階段、23個時序。水溫12.5～14.2 ℃條件下歷時10 493 min出膜，初孵仔魚全長6.1 mm。滇池高背鯽受精率81%，孵化率77%。

關鍵詞 滇池高背鯽；三倍全雌體；人工繁殖；胚胎發育

中圖分類號 S965.2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）12-0259-02

滇池高背鯽（Carassius sp.）是云南特有三倍體全雌性鯽魚，染色體數為162條，形態上體高、背寬、頭較尖，呈銀灰色。20世紀70年代中期在滇池形成產量，捕撈量占滇池捕撈量的50%左右，常見體重0.5～1.0 kg，因其生長速度快，加之孤雌生殖，能大量補充群體數量，保證了資源的穩定[1-4]。20世紀80—90年代，隨著捕撈強度的加大和外來物種的引進，以及人類活動的加劇和滇池等湖庫水體污染，滇池高背鯽魚產卵場所遭到破壞，群體逐漸縮小，產量逐年下降。為保護滇池高背鯽種質資源，恢復其自然種群，云南省水產技術推廣站基地——云南高背鯽原種場從2000年開始，致力于滇池高背鯽的馴養繁育和種質選育與保種工作。2011年，滇池高背鯽被評為云南“六大名魚”之一，在全省重點推廣。

本試驗采用云南光唇魚和短須裂腹魚的雄魚精液刺激滇池高背鯽卵子，以獲得受精卵，其目的在于進一步探索滇池高背鯽雌核發育雄魚來源的可獲得性，通過對胚胎發育的觀察，為其人工繁殖、種質資源保護和開發利用提供科學依據，為滇池高背鯽增養殖提供基礎參考。

1 材料與方法

1.1 親魚來源

試驗用魚來自于云南省水產技術推廣站基地，為云南高背鯽原種場保種的親本。

1.2 親魚培育

2016年12月，從云南高背鯽原種場3#保種池塘（面積0.8hm2）挑選體重200～300 g、腹部較膨大的滇池高背鯽，置于7-1#（面積300 m2）流水池單獨培育，投喂粗蛋白含量33%的鯉魚魚苗料，加強日常管理和定期流水刺激。

1.3 親魚選擇

選擇腹部膨大柔軟的滇池高背鯽作為母本。雄魚從原種場人工養殖的云南光唇魚和短須裂腹魚中挑選，體重100～180 g/尾，可以人工擠出精液。

1.4 人工催產與授精

2017年3月7日和10日進行2次人工催產，雌魚采用500 IU/kg魚體重的HCG一次性注射，雄魚不注射。平均水溫14 ℃，15～18 h后進行人工授精。受精卵置于塑料大棚中孵化，用于胚胎發育觀察的受精卵置于載玻片上。

1.5 胚胎觀察

每次取受精卵20～30枚，采用Olympus SZ61體視解剖鏡和上海測維光電技術有限公司生產的LW100T生物顯微鏡進行觀察，胚胎發育圖片采集使用Nikon D50相機，圖片制作排版使用Photoshop cs6；胚胎發育按50%受精卵發育至同一時期開始計時。

2 結果與分析

2.1 人工催產情況

3月7日催產滇池高背鯽20尾，雄魚選擇短須裂腹魚；3月10日催產10尾，雄魚選擇短須裂腹魚。雌雄比均為1：1，共獲得受精卵約14.3萬枚。催產率93%，受精率（以發育至原腸中期計）均達81%以上，孵化率77%以上，人工繁殖情況詳見表1。

2.2 胚胎發育情況

滇池高背鯽受精卵胚胎發育過程可分為胚盤隆起期、細胞分裂期、囊胚期、原腸期、神經胚期、胚孔封閉期、肌節出現期、眼囊期、尾芽期、尾泡期等16個階段，包括23個時序。各階段發育時序見表2，各階段發育圖譜見圖1。

2.2.1 胚盤隆起。滇池高背鯽成熟受精卵為圓形沉性卵，胚體呈青綠色，卵子直徑1.5 mm，遇水后具有強黏性。受精10 min吸水膨脹至最大，卵徑平均1.8 mm，見圖1（1）。受精27 min后胚盤形成，見圖1（2）。

2.2.2 細胞分裂期。受精48 min，胚盤上開始形成一卵裂溝，細胞開始分裂，進入二細胞期，見圖1（3）；71 min進入四細胞期，見圖1（4）。隨著細胞團不斷分裂，細胞體積逐漸變小，細胞數目不斷增多，約243 min進入多細胞期，見圖1（5）。

2.2.3 囊胚期。隨著細胞分裂和細胞團的隆起，囊胚層在卵黃上形成1個半球狀隆起，815 min到達囊胚早期，見圖1（6）。之后細胞下移，囊胚層高度逐漸降低，進入囊胚中期，見圖1（7），時間為1 100 min。受精1 358 min，囊胚細胞向邊緣擴展、下包，囊胚層變為扁平狀，進入囊胚晚期，見圖1（8）。

2.2.4 原腸期。受精1 630 min，囊胚層下包至卵黃囊1/2位置，胚環出現，進入原腸早期見圖1（9），受精1 911 min，囊胚層下包卵黃囊2/3，在囊胚邊沿的上沿一環形區域內細胞分裂加速，形成一增厚層，即胚環，而胚環上突出、加厚的部分為胚盾，進入原腸中期，見圖1（10）。受精2 220 min，胚環下包至卵黃囊3/4位置，進入原腸晚期，見圖1（11）。

2.2.5 神經胚期。受精2 428 min，胚盤幾乎包裹整個卵黃囊，未包入部分的卵黃為卵黃栓，進入神經胚期，見圖1（12）。

2.2.6 胚孔封閉期。受精2 452 min，卵黃栓消失，胚盤完全包住卵黃，進入胚孔封閉期，見圖1（13）。

2.2.7 肌節出現期。3 371 min，胚體可見2～3對肌節，進入肌節出現期，見圖1（14）。

2.2.8 眼囊期。3 969 min，眼基呈橢圓形，肌節9對，進入眼囊期，見圖1（15）。

2.2.9 尾芽期。4 595 min，尾芽前端開始從卵黃囊上分離，稱為尾芽期，見圖1（16）。

2.2.10 尾泡期。受精4 695 min，尾部出現一空泡，卵黃囊略成梨型，胚體尾部呈梨型，為尾泡期，見圖1（17）。

2.2.11 眼晶體形成期。4 983 min，卵黃囊開始收縮，呈倒梨型，為眼晶體形成期，見圖1（18）。

2.2.12 肌肉效應期。5 185 min，胚體微弱扭動，進入肌肉效應期，見圖1（19）。

2.2.13 心臟搏動期。受精6 016 min，胚體頭部下方、卵黃囊前端出現一搏動小管，心率29～31次/min，進入心臟搏動期，見圖1（20）。眼部黑色素開始形成。

2.2.14 胸鰭原基期。6 562 min，眼部黑色素進一步沉著，目視下可見1對黑色眼點，此時胸鰭原基出現、心臟增大，進入胸鰭原基期，見圖1（21）。

2.2.15 眼黑期。7 500 min，胚體各部開始出現黑色素，尾部進一步從卵黃囊上分離，且可自由伸達至頭部，裸視情況下眼睛明顯，心臟處可見血液流動，略呈淡紅色，心率40～42次/min，進入眼黑期，見圖1（22）。

2.2.16 出膜期。胚體尾部不斷扭動并與頭部同時用力，尾部先于頭部伸出卵膜，隨后在胚體扭動下出膜，進入出膜期初孵仔魚，見圖1（23），心率42～46次/min，時間為10 493 min。初孵仔魚平均全長6.1 mm，體黑色素明顯，尤以背部和尾部較多，初孵仔魚沉入池底，靜待器官的進一步發育。

3 結論與討論

3.1 滇池高背鯽雌核發育特點

滇池高背鯽屬自然形成的一個特殊三倍體鯽魚種群，為滇池水系特有種。其在自然條件下依靠麥穗魚、鯉魚等魚類的雄魚精子刺激卵子發育，精子的細胞核并未參與卵球的發育，胚胎的發育僅在母體遺傳的控制下進行[5]。本試驗采用云南光唇魚和短須裂腹魚雄魚刺激滇池高背鯽卵子，獲得較高的受精率和出膜率。雌核發育的滇池高背鯽因其只繼承母體特性，遺傳性高、抗逆性強，在養殖條件下也能夠較好地保證其種質純度，且在單一數量情況下可以迅速補充群體數量。通過試驗觀察，云南光唇魚和短須裂腹魚雄魚在3月初即達到性成熟，與滇池高背鯽性腺發育同步，且雄魚精液充足，無需人工催產，是滇池高背鯽人工繁殖良好的選擇品種。

3.2 繁殖生物學特性

在昆明地區，滇池高背鯽性成熟時間為3月上旬。本試驗中，3月2日即觀察到池塘中部分鯽魚排卵，3月15日檢查已全部排卵。受精卵在水溫12.9～15.0 ℃條件下，經10 493 min即可孵出仔魚，仔魚平均全長6.1 mm，與李映伶等[6]報道的滇池高背鯽孵化時間接近。

3.3 胚胎發育特點

滇池高背鯽卵子直徑為1.5 mm，吸水膨脹后卵子直徑可達1.8 mm，卵周隙較小。鯽屬魚類受精卵卵徑大多為1.2～2.0 mm，滇池高背鯽受精卵比彩鯽受精卵（2.0 mm）略小，與普安鯽卵徑（1.88 mm）相近，較以異源四倍體鯽鯉為父本、二倍體金魚為母本雜交形成的三倍體鯽魚卵徑（1.3～1.4 mm）略大[6-10]。

滇池高背鯽受精卵卵膜較軟，黏性強，顯微鏡下觀察，軟膜表面有透明膠狀體，可能是滇池高背鯽受精卵黏性強的原因。由于滇池高背鯽受精卵黏性強和卵膜軟薄的特點，黏附的受精卵在觀察時翻動困難，容易破碎，觀察角度局限，加之四細胞后期細胞分裂大小不均等，細胞分裂期觀察效果不佳。

4 參考文獻

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