附子理中湯超微顆粒與傳統(tǒng)飲片的毒性對(duì)比研究

楊春燕，薛志紅，姚 凱

（安徽新華學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 合肥 230088）

附子理中湯超微顆粒與傳統(tǒng)飲片的毒性對(duì)比研究

楊春燕，薛志紅，姚 凱

（安徽新華學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 合肥 230088）

附子理中湯出自于張仲景的《傷寒論》，由制附子、炒白術(shù)、黨參、干姜、炙甘草等五味中藥共同組成，具有回陽(yáng)補(bǔ)虛、溫中散寒之效.本文以"附子理中湯"為研究對(duì)象，擬采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)比較附子理中湯超微顆粒與附子理中湯傳統(tǒng)煎法中的毒性，并采用高效液相法（HPLC法）檢測(cè)中藥飲片與超微顆粒中有毒成分（烏頭堿、次烏頭堿等）的水平；結(jié)合急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析附子理中湯超微顆粒及附子理中湯傳統(tǒng)煎劑的毒性效應(yīng)與毒性成分的關(guān)系.

超微顆粒；傳統(tǒng)飲片；烏頭堿；次烏頭堿；新烏頭堿

中藥超微顆粒是指采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)技術(shù)與傳統(tǒng)的中藥炮制技術(shù)相結(jié)合，將中藥飲片粉碎成粒徑為微米級(jí)的超微粉，無(wú)需煎煮，直接沖服的一種新型飲片[1].中藥飲片經(jīng)超微粉碎機(jī)粉碎成超微細(xì)粉后，其藥材的細(xì)胞壁基本被全部破壞，有效成分能迅速、徹底地溶出，沖服時(shí)原飲片的成分不僅全部保留，而且所含有效成分更加易于吸收，并可在提高有效成分生物利用度的基礎(chǔ)上，大大降低處方的用藥劑量，節(jié)約資源，便于服用[2].目前，據(jù)國(guó)內(nèi)外很多研究表明，中藥超微顆粒的藥效遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)飲片.唐銘翔[3]通過(guò)離體豚鼠實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)：四逆湯超微顆粒較中藥飲片對(duì)離體豚鼠具有更強(qiáng)的鎮(zhèn)痛、麻痹作用.張祥偉，羅奇志，伍彪等[4]通過(guò)臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小柴胡湯復(fù)方經(jīng)超微粉碎后水溶性成分溶出度增加，藥效的有效化學(xué)成分總黃酮及黃芩苷溶出量是傳統(tǒng)飲片的2倍.蔡光先[5]等進(jìn)行28味常用中藥（人參,黃芪,白術(shù),山藥,白芍等）飲片與散劑中用量的研究中發(fā)現(xiàn)達(dá)到同種藥效時(shí)，超微顆粒的用量最少.

附附子理中湯出自于張仲景的《傷寒論》，由制附子、炒白術(shù)、黨參、干姜、炙甘草等五味中藥共同組成，具有回陽(yáng)補(bǔ)虛、溫中散寒之效，主治五臟中寒，口噤，四肢強(qiáng)直，失音不語(yǔ)；下焦虛寒，火不生土，脘腹冷痛，嘔逆泄瀉等.

附子理中湯中的附子為大辛、大熱、大毒之品，若服用不慎，易引發(fā)嚴(yán)重的神經(jīng)、肝臟毒性反應(yīng)，甚者導(dǎo)致死亡.在傳統(tǒng)煎法中，附子通常先煎煮一段時(shí)間后再與干姜、炙甘草共同煎煮.有實(shí)驗(yàn)證明,附子與干姜、炙甘草共煎時(shí)，附子中有毒成分烏頭堿的含量隨甘草劑量增加而減少，說(shuō)明甘草具有有效解除附子毒性的作用[6].何丹[7]認(rèn)為甘草能使附子減毒增效，其機(jī)制可能在于甘草中某些成分能結(jié)合生物堿形成絡(luò)合物或促進(jìn)生物堿的水解.劉紅霞[8]用傅里葉變換紅外光譜(FT限)技術(shù)對(duì)不同配伍方式的附子理中湯水煎液進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示不同配伍方式樣品的紅外譜圖特征具有一定的變化規(guī)律，說(shuō)明附子理中湯中甘草與附子有關(guān)成分相互發(fā)生了反應(yīng).

據(jù)目前的資料來(lái)看，研究表明在附子理中湯在共煎的過(guò)程中，甘草對(duì)降低附子的毒性，起到了很大的作用.相對(duì)比下，附子理中湯的超微顆粒飲用時(shí)只需用溫開(kāi)水沖泡十到二十分鐘，無(wú)需共同加熱、混合，附子超微顆粒中的有毒成分能否能被甘草超微顆粒所制約還不得而知.有關(guān)附子理中湯超微顆粒的毒性情況如何，目前尚未有相關(guān)的研究結(jié)果見(jiàn)諸于報(bào).

若取得預(yù)期效果，該項(xiàng)目的完成有助于進(jìn)一步判斷臨床上附子理中湯超微顆粒取代附子理中湯傳統(tǒng)煎劑的可行性，也為其它有毒中藥超微顆粒的應(yīng)用提供更有價(jià)值的參考信息.

1 儀器與試劑

1.1 儀器高效液相色譜儀 (1260系列,美國(guó)安捷倫)；紫外可見(jiàn)分光光度（UV1000，天美（中國(guó)）科學(xué)儀器有限公司）；LB801型超級(jí)恒溫器(遼寧市恒溫儀器廠)；分析天平(FA2004,上海良平儀器儀表有限公司)；LDZ4-1.2高速離心機(jī)(徐州博成醫(yī)療器械銷售有限公司)；自動(dòng)進(jìn)樣器（安捷倫，美國(guó)）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE5299,上海申生科技有限公司）.

1.2 試劑制附子、炒白術(shù)、黨參、干姜、炙甘草傳統(tǒng)飲片 (Trad itional cut crude drug,TCCD)購(gòu)自亳州中藥材市場(chǎng)；制附子、炒白術(shù)、黨參、干姜、炙甘草超微顆粒(ultramcro-cut crude drug,UCCD)由安徽新華學(xué)院藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供；對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品檢驗(yàn)所；乙腈、濃氨水、乙醚、鹽酸為分析純.

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 對(duì)照品溶液的配制：分別精密稱取烏頭堿對(duì)照品5.00mg、次烏頭堿對(duì)照品5.00mg、新烏頭堿對(duì)照品各5.00mg，分別置于50mL容量瓶中，用用75%甲醇溶液定容，配成0.1mg／mL的對(duì)照品溶液.

2.2 供試品溶液的配制

2.2.1 附子理中湯傳統(tǒng)煎劑溶液（A）的配制

稱取制附子、干姜、炒白術(shù)、炙甘草、黨參傳統(tǒng)飲片各 9g、15g、12g、6g、6g，按 1:10的比例加500m1的蒸餾水，用回流法提取1.5h，真空泵抽濾.抽濾后的殘?jiān)铀?00m1，再回流提取1.5小時(shí)，真空抽濾.合并兩次抽濾的濾液，至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上55℃下濃縮至100mL.

(2) 在整個(gè)豎井模擬施工過(guò)程中，每一開(kāi)挖循環(huán)結(jié)束時(shí)，井底都出現(xiàn)了應(yīng)力集中現(xiàn)象，并且隨著開(kāi)挖深度的增加而越發(fā)明顯，剪應(yīng)力也隨之增大，所以開(kāi)挖結(jié)束后應(yīng)加強(qiáng)掌子面處井壁的支護(hù)，盡快進(jìn)行初期襯砌。

精確吸取2mL濃縮的上清液，于離心機(jī)中離心(12000r/min)15min.精密吸取0.5mL上清液,置于10mL離心試管中，加入0.5mL濃氨水，再加入3mL乙醚充分?jǐn)嚢?min,再離心(3000r/min)15min.離心后靜置15min后，分取乙醚層置10mL離心管，加入1mL0.1mo1/L鹽酸溶液,充分?jǐn)嚢鑜min，離心(3000r/min)5min.分取乙醚層于50℃自然揮發(fā)至干，揮發(fā)后的殘?jiān)?00μl乙睛充分溶解，即制得傳統(tǒng)飲片的供試品溶液(A).

2.2.2 附子理中湯超微飲片供試品溶液(B)的配制

稱取制附子、干姜、炒白術(shù)、炙甘草、黨參傳統(tǒng)飲片各9g、15g、12g、6g、6g，，分別放置于保溫杯中，按1:10的比例加新制的開(kāi)水 (95℃以上)400mL密封浸泡1.5h.浸泡后的藥材用紗布過(guò)濾，過(guò)濾后的濾渣加新制的開(kāi)水400mL再浸泡1.5h，充分過(guò)濾.合并兩次過(guò)濾的濾液，至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上50℃下濃縮至100mL.

取濃縮后的溶液參照“2.2.1”相關(guān)內(nèi)容，制得附子理中湯超微飲片的供試品溶液(B).

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 高效液相色譜圖

在同等實(shí)驗(yàn)條件下，烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿成分均能與其他成分充分分離，其保留時(shí)間分別為25.30min、20.70min、18.20min.而.陰性對(duì)照品在烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿處無(wú)干擾，見(jiàn)圖1-1.

圖1 -1 附子理中湯傳統(tǒng)飲片和超微飲片的HPLC圖譜

3.2 線性關(guān)系考察

3.3 樣品側(cè)定結(jié)果

分別精密稱取附子理中湯傳統(tǒng)飲片3份、超微飲片3份，按“1.2.3”步驟操作，得到附子理中湯的供試品溶液.進(jìn)樣50μL，分別進(jìn)行烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿三種成分的含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1-3,1-4.從表中看出，附子理中湯超微飲片水提取液與傳統(tǒng)飲片中三種烏頭堿的含量存在著明顯差異.與附子理中湯傳統(tǒng)飲片的水提液相比，其超微飲片水提液中的烏頭堿和新烏頭堿的成分含量均顯著提高.其中，附子理中湯超微飲片中的烏頭堿成分的含量是其傳統(tǒng)飲片的3.77倍，而新烏頭堿成分的含量高達(dá)其傳統(tǒng)飲片的15.72倍，但次烏頭堿的成分含量無(wú)明顯差異.

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，附子理中湯超微顆粒中烏頭類生物堿成分的含量顯著高于其傳統(tǒng)飲片.附子理中湯水提液中烏頭類生物堿成分的含量的高低主要取決于烏頭類生物堿從藥材中溶出率.附子理中湯烏頭堿類生物堿成分的溶出率主要取決于中藥材與水的溫度、時(shí)間及接觸面積.制附子為根莖類藥材，材質(zhì)堅(jiān)硬細(xì)密，細(xì)胞間隙較小，其烏頭堿類成分很難被溶出來(lái).同時(shí)，附子中烏頭堿類生物堿成分的極性相對(duì)較小，一般常選用氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑進(jìn)行有效提取.而附子理中湯超微飲片則是將制附子、炒白術(shù)、黨參、干姜、炙甘草等五種中藥材經(jīng)過(guò)超微粉碎機(jī)充分粉碎，其細(xì)胞壁均已被基本完全破壞.經(jīng)過(guò)充分粉碎后的藥材非常易溶于水，并且與水迅速增大接觸面積，其有效成分非常利于被溶出來(lái).

在相同劑量的條件下，附子理中湯超微飲片中的烏頭類生物堿類毒性成分的浸出率顯著高于其傳統(tǒng)飲片的毒性.相對(duì)而言，附子理中湯超微飲片毒性成分的服用量也就高于其傳統(tǒng)飲片.附子理中湯傳統(tǒng)飲片的水煎提取法能非常有效地促進(jìn)雙酷型烏頭類生物堿的水解及其與甘草之間的作用，從而非常有效地降低附子的毒性.通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)，毒性中藥材是否可制成超微飲片，服用時(shí)如何調(diào)整用法劑量，應(yīng)是臨床應(yīng)用非常值得考慮的重要問(wèn)題.

〔1〕蔡光先,楊永華.中藥飲片改革的新探索—單味中藥超微飲片 [J]．湖南中醫(yī)雜志，2010，16（2）：50．

〔2〕汪濤，孫亮，粱蓉梅，宓鶴鳴.中藥超微粉碎的研究進(jìn)展與應(yīng)用前景[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志,2011,25(3): 129-133.

〔3〕唐銘翔，周知午，曾嶸，周于祿．四逆湯超微顆粒與傳統(tǒng)飲片對(duì)離體豚鼠心臟作用的比較研究[J]．湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，26(1)：3-4．

〔4〕張祥偉，羅奇志，伍彪，等.小柴胡湯超微飲片與常規(guī)飲片化學(xué)成分溶出特性的對(duì)比研究 [J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(11):2750-2752.

〔5〕蔡光先，劉柏炎.28味常用中藥飲片湯劑與散劑中用量的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2004,10 (2):63-64.

〔6〕裴妙榮，王世民，李晶．附子理中湯中甘草對(duì)附子解毒作用的相關(guān)性分析 [J]．中國(guó)中藥雜志，2012，21(1)：50—52.

〔7〕何丹，劉鳳琴，李煥德.甘草解毒作用研究進(jìn)展[J].中南藥學(xué)，2009,7（12）:927-931.

〔8〕劉紅霞,孫素琴,楊峻山.現(xiàn)代紅外光譜技術(shù)用于復(fù)方附子理中湯的配伍研究[J].光譜學(xué)與光譜分析,2012,27(7):1316-1318.

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A

1673-260X（2017）07-0163-03

2017-04-09

安徽新華學(xué)院資助科研項(xiàng)目（2016zr014）；安徽省級(jí)高校自然重點(diǎn)課題：附子理中湯超微顆粒與傳統(tǒng)飲片的毒性對(duì)比研究(KJ2015A307)