HPV DNA、HPV E6蛋白聯合檢測篩查宮頸癌的應用價值

劉俊寶，徐 珍，郭亞花，朱 丹，曹 璐*

(1.吉林大學中日聯誼醫院 婦產科，吉林 長春130033；2.長沙市婦幼保健院)

*通訊作者

HPV DNA、HPV E6蛋白聯合檢測篩查宮頸癌的應用價值

劉俊寶1，徐 珍2△，郭亞花1，朱 丹1，曹 璐1*

(1.吉林大學中日聯誼醫院 婦產科，吉林 長春130033；2.長沙市婦幼保健院)

高危型人乳頭瘤病毒(HPV)是導致宮頸癌發生最重要的致病因素，所有宮頸癌病例中約有70%的病例被發現感染高危人類乳頭瘤病毒16和18，但單純HPV DNA檢測不能代表HPV致病能力的高低[1-3]。本文通過聯合檢測HPV DNA與HPV E6蛋白在正常宮頸組織、各級別宮頸上皮內瘤變及宮頸癌中的檢出率,為宮頸上皮內瘤變(CIN)和宮頸癌早期診斷、治療以及病情評估和預后評價提供一定的參考依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

2013年10月-2015年10月于吉林大學中日聯誼醫院婦科門診就診的宮頸液基細胞學檢查(TCT)為陽性者共681例(以ASC-U及以上病變為TCT陽性)的患者，同時均進行HPV DNA檢測、HPV E6蛋白及宮頸活組織檢查。年齡20歲-84歲，平均年齡42歲。所有研究對象一年內未行宮頸活檢，既往無宮頸癌病史并自愿行宮頸癌篩查，3天內無性生活，無陰道感染，無陰道及宮頸操作或治療，檢查期間月經未來潮，同時排除妊娠期患者。診斷結果以病理結果為金標準，病理診斷結果由兩名以上病理科醫師共同確定，其中子宮頸正常或宮頸炎癥者共475例(正常組)；CINI 98例、CINII 57例、CINⅢ 35例，共190例(CIN組)；16例診斷為宮頸癌(宮頸癌組)。所有研究對象均知情同意。

1.2 試劑及儀器

HPV E6蛋白檢測試劑盒、宮頸采樣器(凱杰企業管理有限公司)、宮頸刷、Thinprep保存液(天津伊諾新康醫療器械科技有限公司)、Thinprep液基細胞學檢測儀(美國新柏氏公司)、RM2235型輪轉式切片機、DML2000微孔板判讀器、65℃恒溫水浴箱、自動恒溫加熱器、冰箱、渦旋混合器、旋轉混合器、全自動化學發光免疫分析儀(重慶科斯邁生物科技有限公司)。

1.3 方法

液基薄層制片、巴氏染色、采用新TBS(The Bethesda System)分級系統進行細胞學的診斷分類；第二代雜交捕獲試驗檢測HPV DNA；利用PDZ，DLG-A，ZO-1結構域只能與高危型HPV E6蛋白結合的這一特點檢測HPV E6蛋白[4]。

1.4 統計學方法

采用SPSS軟件進行統計分析，應用χ2檢驗比較組間的差異，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同病變類型患者HPV DNA和E6蛋白的檢測情況

681例患者中CIN I有98例，CIN II有57例，CIN Ⅲ有35例，宮頸癌16例，其中475例為子宮頸正常的患者。將不同病變類型患者HPV DNA陽性率和HPV E6蛋白陽性率進行趨勢χ2檢驗，差異均有統計學意義(χ2=10.1、P<0.05，χ2=234.4、P<0.001)，(見表1)。

2.2 比較單獨使用HPV E6蛋白檢測、HPV DNA檢測與聯合檢測結果方法的臨床應用價值評價指標

以病理檢測作為金標準，HPV DNA檢測的靈敏度為89.8%(185/206)，特異度為20.6%(98/475)，陽性預測值32.9%(185/562)，陰性預測值 82.4%(98/119)；HPV E6蛋白靈敏度為 60.7%(125/206)，特異度為90.5%(430/475)， 陽性預計值73.5%(125/170)，陰性預計值84.1%(430/511)。HPV E6蛋白和HPV DNA聯合檢測CIN和宮頸癌的靈敏度為93.7%。二者聯合檢測CIN I、CIN II、CIN Ⅲ及宮頸癌的陽性例數及陽性率分別為89(90.8%)、53(93.0%)、35(100%)、16(100%)。病理陽性者中，HPV E6蛋白、HPV DNA及二者在各CIN組和宮頸癌組的檢出率三組比較差異有統計學意義(χ2=12.9，P<0.05)。綜上，HPV E6蛋白檢測特異度雖高達90.5%，但靈敏度相對較低，僅60.7%；HPV E6蛋白檢測方法的特異度高于HPV DNA檢測方法，差異具有統計學意義(P<0.001)。HPV E6蛋白檢測方法的陽性預測值高于HPV DNA檢測方法，差異具有統計學意義(P<0.001)，其中聯合檢測檢出率高于單獨使用HPV E6蛋白檢測及HPV DNA檢測(見表2)。

表1 不同病變類型患者 HPV DNA和HPV E6蛋白的檢測結果

表2 兩種檢測方法單獨及聯合檢測臨床應用價值評價指標的對比

3 討論

宮頸癌是全球女性中第二高發的惡性腫瘤，尤其在發展中國家更為嚴重。由于從宮頸上皮內瘤樣病變發展到宮頸癌是一個較長期的過程，因此對宮頸癌前病變早期診斷和治療可有效地預防宮頸浸潤癌的發生[5]。大量研究表明引發宮頸癌及其癌前病變的重要因素是HPV感染，美國FDA唯一認可的HPV檢測方法是第二代雜交捕獲技術(Hybrid capture，HC-II)，是世界上普遍應用一種宮頸癌篩查方法[6,7]。由于有報道表示HPV DNA在凋亡細胞及細胞碎屑中也可表達，所以HC-II檢測技術的陽性預測值及特異度是有限的，無法區分良性感染與有臨床意義的癌前病變，那么在篩查過程中有可能造成過度診療，對婦女身心造成不必要的傷害[8]。

同時應用于宮頸癌篩查的還有液基薄層細胞術(TCT)，有報道稱此方法對于宮頸癌細胞的檢出率可高達95%以上，在檢測過程中同時還有可能發現是否有其他的微生物感染。然而在臨床工作中我們發現TCT檢測對于非典型鱗狀細胞的重復性比較差，特別是當遇到不典型鱗狀上皮細胞，意義不明的情況下，檢驗科醫師一般難以做出非常準確的判斷，不過由于檢驗科技師在取材以及制片的過程中也有可能存在某些客觀因素導致的缺陷，有時結果有可能會被誤判。

能否選出更加有效的篩查方法以減少宮頸癌的發生越來越受到各研究者的關注，大量研究表明E6基因是HPV致宮頸癌及其癌前病變的主要基因，E6蛋白的過度表達與疾病的嚴重程度有關，此次試驗是采用一種快速檢測HPV E6癌基因蛋白的方法，是一種以“試紙條檢測”形式的捕獲試驗，可以提供即時的檢測結果。此次研究對HPV DNA檢測及HPV E6蛋白檢測兩種方法單獨及聯合在宮頸癌篩查中的價值，并根據統計學數據對各自利弊做出評價。

高危HPV DNA 檢測具有較高的靈敏度及陰性預測值，目前已廣泛應用于臨床，HPV E6蛋白檢測有較高的特異度，對高度子宮頸上皮內瘤變及宮頸癌有一定的臨床預測價值，隨著宮頸病變嚴重程度的升高，HPV DNA與HPV E6蛋白在各級宮頸病變中的檢出率增加，將二者聯合檢測可提宮頸病變檢出的靈敏度，為宮頸上皮內瘤變和宮頸癌早期診斷、治療以及病情評估和預后評價提供一定的參考依據。

[1]Stein U,Walther W,Arlt F,et al.MACCl,a newly identified key regulator of HGF-MET signaling,predicts colon cancer metastasis[J].Nat Med,2009,15(1):59.

[2]Qiu J,Huang P,Liu Q,et al.Identification of MACCl as a novel prognostic marker in hepatocellular carcinoma[J].J Transl Med,2011,9:166.

[3]王 剛.MACCl在胰腺癌中的表達及其對增殖、遷移及耐藥等功能影響的實驗研究[D].浙江大學,2012.

[4]尚 超,張 輝,宋永勝.腎癌細胞增殖過程MACCl和c-MET調控機制的探討[J].中華腫瘤防治雜志,2011,(14):1065.

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[6]Matin MM,Walsh JR,Gokhale PJ,et al.Specific knockdown of Oct4 and beta2-microglobulin expression by RNA interference in human embryonic stem cells and embryonic carcinoma cells[J].Stem Cells,2004,22(5):659.

[7]Tai MH,Chang CC,Kiupel M,et al.Oct4 expression in adult human stem cells:evidence in support of the stem cell theory of carcinogenesis[J].Carcinogenesis,2005,26(2):495.

[8]Kumar SM,Li L,Nguyen TK,et al.Isolation of a novel population of multipotent adult stem cells from human hair follicles[J].Am J Pathol,2006,168(6):1879.

1007-4287(2017)07-1213-03

2016-05-26)

△與第一作者同等貢獻