CD4+CD29+T細胞在潰瘍性結腸炎患者血清及結腸黏膜組織中的表達變化

封艷玲(南京醫科大學附屬淮安市第一人民醫院，江蘇淮安223300)

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CD4+CD29+T細胞在潰瘍性結腸炎患者血清及結腸黏膜組織中的表達變化

封艷玲
(南京醫科大學附屬淮安市第一人民醫院，江蘇淮安223300)

目的 觀察CD4+CD29+T細胞血管細胞黏附分子1(VCAM-1)及髓過氧化物酶(MPO)在潰瘍性結腸炎(UC)患者血清及結腸黏膜組織中的表達變化。方法 選取UC患者60例(UC組)，其中活動期及緩解期各30例，設立同期查體健康者30例為健康對照組，收集血清，采用流式細胞術測定定周血中CD4+CD29+T細胞百分率，腸鏡下取UC組及健康對照組結腸黏膜組織，采用免疫熒光法測定結腸中CD4+CD29+T細胞的表達量，用免疫組化法測定結腸中髓過氧化物酶(MPO)及血管細胞黏附分子1(VCAM-1)表達，用皮爾森相關法分析CD4+CD29+T細胞與MPO的相關性。結果 UC組CD4+CD29+T細胞、VCAM-1及MPO在活動期及緩解期UC患者血清及結腸黏膜組織中的表達均較健康對照組升高，且活動期高于緩解期，P均<0.05；CD4+CD29+T細胞在健康對照組血清中有表達而在結腸中未檢測到表達；外周血CD4+CD29+T細胞與MPO呈正相關(r=0.543,P<0.05)。結論 CD4+CD29+T細胞在UC患者血清及結腸黏膜組織中均呈高表達，且與UC的病情程度密切相關。

潰瘍性結腸炎；CD4+CD29+T細胞；血管細胞黏附分子1；髓過氧化物酶

潰瘍性結腸炎(UC)是一組病因未明的復發與緩解交替的腸道慢性非特異性炎癥。UC的發病涉及免疫反應的整個過程，是多個免疫因素共同作用的結果。目前多數研究認為腸道的調節性T細胞不能抑制效應細胞對腸道菌群及食物抗原的過度反應是UC發病的重要免疫學機制[1]。CD4+T細胞是UC發生發展過程中起作用的主要效應細胞，CD4+CD29+T細胞是從CD4分化的記憶性效應細胞。CD29主要表達于先前活化的T細胞上，在對抗原的再次反應中起重要作用，在多發性硬化、風濕性關節炎和系統性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病中均有重要作用[2,3]。UC屬于自身免疫性疾病的一種，CD4+CD29+T細胞在UC發生發展中可能發揮重要作用，而CD4+CD29+T細胞在UC中的表達及其作用機制研究甚少。故本研究主要通過檢測CD4+CD29+T細胞及其配體血管細胞黏附分子1(VCAM-1)在UC患者血清及結腸黏膜組織中的表達，分析其與反映UC疾病嚴重程度的指標髓過氧化物酶(MPO)的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年6月～2014年1月本院消化內科門診、住院部及消化內鏡中心的UC患者60例(UC組)，男26例、女34例，年齡20～60歲。均符合2000年成都會議制定的UC診斷標準，排除合并風濕免疫類疾病、感染及腫瘤，并據該標準將患者分為活動期30例，緩解期30例。健康對照組30例，男16例、女14例，年齡20～50歲，均來自我院查體健康者。

1.2 外周血及結腸黏膜CD4+CD29+T細胞檢測 每例入選者各抽靜脈血4 mL，分離出血清，用流式細胞術檢測UC活動期、緩解期及健康對照組入選者CD4+CD29+T細胞百分比。經腸鏡下于病變處取結腸黏膜1塊，用4%多聚甲醛固定，經脫水-包埋-切片等步驟制作成石蠟切片，用免疫熒光雙標法檢測各組結腸黏膜組織中CD4+CD29+T細胞表達。免疫熒光雙標結果半定量:隨機選取3個視野，用Image pro plus 6.0軟件計算出每個視野的平均光密度(平均光密度=陽性表達的熒光強度/總面積)，取3個視野的平均值作為CD4+CD29+T細胞的表達量。

1.3 結腸黏膜組織中MPO及VCAM-1表達檢測 將結腸黏膜制作成石蠟切片后用免疫組化法檢測結腸黏膜組織中MPO及VCAM-1表達。免疫組化結果半定量判定：隨機選取3個視野，用Image pro plus 6.0軟件計算出每個視野的平均光密度(陽性表達的熒光強度/總面積)，取3個視野的平均值作為該抗原的表達量。

2 結果

兩組血清中CD4+CD29+T細胞百分比表達比較見表1;UC組患者血清CD4+CD29+T細胞百分比較健康對照組升高(P均<0.05),且UC組活動期高于緩解期(P均<0.01)。CD4+CD29+T細胞在UC組活動期及緩解期患者的結腸黏膜組織中表達量分別為0.370±0.04、0.140±0.03,活動期高于緩解期(P<0.05)，在健康對照組的結腸黏膜組織中未見明顯表達。UC組血清CD4+CD29+T細胞百分比與結腸黏膜組織中MPO水平呈正相關(r=0.543,P<0.05)。

表1 三組血清CD4+CD29+T細胞百分比及結腸黏膜組織中MPO、VCAM-1表達比較

注：與健康對照組比較，*P<0.05；與同組緩解期比較，△P<0.05，○P<0.01。

3 討論

UC的持續性炎癥刺激及其易復發性給患者帶來沉重負擔。目前UC的具體發病機制尚不明確，對效應細胞的免疫耐受不足被認為是UC的主要免疫機制，研究者認為CD4+T細胞在UC發生發展中起主要作用[4]。CD4+CD29+T細胞屬于記憶性效應細胞，在UC中研究甚少，在所閱文獻中，僅有江學良等[5]學者對UC患者及UC大鼠的外周血進行檢測，發現UC患者及大鼠外周血CD4+CD29+T細胞明顯高于對照組，認為其可作為UC免疫監測指標，但未做深入研究。

本研究發現UC患者血清及結腸黏膜組織中CD4+CD29+T細胞百分比升高，且活動期明顯高于緩解期。MPO存在于中性粒細胞嗜天青顆粒中，其在腸道組織中的表達與UC炎癥的嚴重程度呈正相關，被作為UC患者病情嚴重程度的監測指標[6]。本研究結果提示血清CD4+CD29+T細胞百分比與MPO呈正相關，結合既往的研究發現CD29可調節UC小鼠中性粒細胞的聚集及炎癥活動性[7],我們認為CD4+CD29+T細胞與UC的嚴重程度密切相關，可能通過調節MPO水平及活動性而在UC中發揮促進作用。

白細胞尤其是效應性及記憶性T細胞向結腸的黏附聚集在UC炎癥的發生及持續過程中起重要作用，且研究認為與其他CD29-類T細胞相比，CD4+CD29+T細胞有更強的血管黏附能力，黏附分子的表達可能導致CD4+CD29+T細胞向炎癥部位聚集[8]。

VCAM-1是VLA-4/CD29的配體，介導淋巴細胞與內皮細胞間的穩定黏附。VCAM-1在正常情況下表達很少，在體內存在炎癥時表達會有所升高。既往文獻研究亦證實VCAM-1在UC白細胞聚集中起重要作用，與UC的炎癥程度呈正相關,對UC小鼠模型進行VCAM-1的抗體治療可改善UC的疾病活動指數及MPO活性等指標[9]。本研究結果表明VCAM-1在健康對照組結腸黏膜組織中無明顯表達，而在UC組表達明顯升高，活動期高于緩解期。同時，對各組結腸黏膜組織中CD4+CD29+T細胞表達檢測發現，CD4+CD29+T細胞與VCAM-1表達呈一致性，均在健康對照組中無明顯表達，而在UC組明顯表達，結合外周血中各組CD4+CD29+T細胞水平，我們推測VCAM-1在CD4+CD29+T細胞向結腸炎癥部位的歸巢中起了黏附聚集作用。我們認為，VCAM-1通過與CD29的黏附作用，將CD4+CD29+T細胞黏附聚集到結腸炎癥部位，發揮對MPO的調節作用。

綜上所述，CD4+CD29+T細胞在UC患者血清及結腸黏膜組織中均呈高表達，且與UC的病情程度密切相關。

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