鎮痛寧膠囊鎮痛作用部位的實驗研究

何小英，馬迎春

（甘肅省藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州 730070）

鎮痛寧膠囊鎮痛作用部位的實驗研究

何小英，馬迎春

（甘肅省藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州 730070）

目的：探討鎮痛寧膠囊實現鎮痛效果的作用部位，為臨床用藥提供依據。方法：采用中樞神經鎮痛和末梢神經鎮痛動物模型進行該藥的鎮痛實驗。結果：大鼠腦室給藥電刺激實驗與空白對照組比較，低劑量組（0.38 μg/kg）有明顯差異（P＜0.05）；中劑量組（0.76 μg/kg）、高劑量組（1.14 μg/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01），在給藥3 h后，與空白對照組比較中劑量（0.76 μg/kg）有明顯差異（P＜0.05）。大鼠腦室給藥甩尾實驗與空白對照組比較，給藥1 h時中劑量（0.76 μg/kg）有顯著性差異（P＜0.01）、高劑量組有顯著性差異（P＜0.05）；給藥2 h時中劑量組（0.76 μg/kg）有顯著性差異（P＜0.05）；在給藥3 h時中劑量（0.76 μg/kg）有顯著性差異（P＜0.01）。扭體實驗與空白對照組比較，低劑量組（0.19 g/kg）有顯著性差異（P＜0.05），中劑量組（0.38 g/kg）、高劑量組（0.56 g/kg）有顯著性差異（P＜0.01）。大鼠足跖定壓實驗與空白對照組比較，左、右腳趾中劑量組（0.76 μg/kg）、高劑量組（1.14 μg/kg）均有顯著性差異（P＜0.01）。結論：大鼠腦室給藥鎮痛實驗表明該藥為中樞性鎮痛藥，并且鎮痛作用延長至3 h，明顯長于嗎啡組；小鼠醋酸扭體試驗和大鼠致炎足趾定壓實驗結果表明，該藥對末梢神經疼痛也有明顯的抑制作用。

鎮痛寧膠囊；鎮痛作用；實驗研究

鎮痛寧膠囊為純中藥復方制劑，具有祛風通絡、祛痰除濕、補血活血、通絡止痛的功效，有標本兼治的作用，主要用于治療頭痛，偏頭痛。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

昆明種小鼠，SPF級，體質量18～22 g，雌雄各半，每組10只。Wistar大鼠，SPF級，體質量150～200 g，雌雄各半，每組10只。以上動物均購于甘肅省中醫藥大學動物實驗中心，實驗動物合格證號：SCXK-（甘）2014-002。

1.2 受試藥物

鎮痛寧膠囊（蘭州鑫科醫藥科技有限公司，批號：20140810）。配制方法：實驗時稱取膠囊內容物，以1%羧甲基纖維素鈉或蒸餾水稀釋至混懸液灌胃給藥。劑量設計：根據新藥審批辦法要求，設計高、中、低3個劑量，0.56，0.38，0.19 g/kg（小鼠劑量），1.14，0.76，0.38 g/kg（大鼠劑量）。腦室給藥用蒸餾水浸泡藥物滅菌后備用。

1.3 陽性對照物

桂參止痛合劑（昆明益康制藥廠，批號：20140611），給藥劑量為0.81 g/kg（是臨床用藥劑量的10倍）。鹽酸嗎啡（沈陽第一制藥廠，批號：2013990702），皮下注射給藥劑量為3.33 mg/kg（是臨床劑量的5倍）。

1.4 空白對照

等劑量的生理鹽水給藥。

1.5 儀器與試劑

儀器：GT-8402型熱板儀；GJ-7906型光電記數儀；YSD-4藥理生理多用儀；光輻射刺激儀（由10倍放大鏡，24 V，250 W碘鎢燈組成）。

試劑：醋酸，角叉菜等均為市售化學試劑。

1.6 動物管理

1.6.1 飼養環境 動物分區飼養于甘肅省藥品檢驗研究院安評中心動物室，該動物室為潔凈設施環境，環境溫度：18～24℃，相對濕度40%～60%，動物使用許可證號：SYXK（甘）2011-002。

1.6.2 飼料 日常喂以蘭州生物制品研究所有限責任公司動物室提供的鼠飼料。主要成分及含量：水分6.5%，粗脂肪7.8%，粗蛋白23.7%，粗纖維5.2%，粗灰分8.5%，鈣1.5%，總磷0.9%，符合國家GB 14924.3-2001標準。

2 實驗方法

2.1 大鼠腦室給藥電刺激實驗

Wistar大鼠60只，SPF級，雌雄各半，體質量150～200 g，隨機分為6組，每組10只，按給藥前痛閾值分層隨機分成灌胃給藥鎮痛寧膠囊低、中、高3個劑量組，分別為0.38，0.76，1.14 g/kg；桂參止痛合劑組給藥劑量為0.81 g/kg。嗎啡組腦室給藥劑量為3.33 mg/kg﹑空白對照組給等體積溶劑的生理鹽水（NS），以上6組給藥方式均為腦室給藥。實驗前預測，用YSD-4藥理生理多用儀兩電極刺激小鼠尾部（條件為5 V，0.04 ms，1 Hz，1/0.125 s），連續3次，每次間隔5 min，3次內有2次嘶叫為合格。選合格大鼠進行實驗。腦室給藥方法為：切開大鼠顱頂皮膚，暴露顱骨，然后用注射器針頭插入右側腦室給藥，于給藥10 min，1 h，2 h，3 h后進行實驗，記錄出現第一次嘶叫的時間[1]。

2.2 大鼠腦室給藥甩尾實驗

Wistar大鼠60只，SPF級，雌雄各半，體質量150～200 g，隨機分為6組，每組10只，給藥方法及動物分組同大鼠腦室給藥電刺激試驗。輻射儀由10倍放大鏡和24 V，250 W碘鎢燈組成，燈產生一定強度的光束，經透鏡聚焦照射大鼠尾部致痛，大鼠甩尾作為疼痛反應指標。將大鼠分別置于特制的固定圓筒內，使其不能自由活動而鼠尾由筒后蓋的中心孔處穿出，任其自然下垂，大鼠稍經訓練即能保持安靜以備實驗。測痛時漏斗外口緊貼鼠尾，借電子秒表記錄從照射開始至出現甩尾的時間作為痛閾值，連測2次，取其平均值作為基礎痛閾值[2-3]。選用5 s左右引起甩尾的大鼠供實驗用，＜3 s或＞10 s表示動物反應過敏或遲鈍，舍棄不用。給藥后每隔1 h測定1次，記錄引起甩尾的照射時間，連續3次，若照射12.5 s仍不甩尾時，中斷照射，以免局部燙傷，并以12.5 s計算。

2.3 小鼠扭體實驗

昆明種小鼠60只，SPF級，雌雄各半，體質量18～22 g隨機分為6組，每組10只，按給藥前痛閾值分層隨機分成灌胃給藥鎮痛寧膠囊高、中﹑低劑量組、桂參合劑組﹑等體積溶劑空白對照組，嗎啡皮下注射給藥組，給藥劑量見表3，各組動物給藥后1 h，每鼠腹腔注射 0.6%醋酸溶液0.2 mL/20 g，記錄20 min內小鼠扭體次數。

2.4 大鼠足趾定壓實驗

Wistar大鼠60只，SPF級，雌雄各半，體質量150～200 g，隨機分為6組，每組10只，給藥劑量及動物分組同小鼠扭體實驗。給藥30 min后，大鼠右腳注射1%角叉菜、0.1 mL/只，于給藥1 h后，用游標卡尺測定大鼠足跖壓痛值。（先用游標卡尺測定腳的厚度，再推動卡尺加壓，直到大鼠嘶叫為止，計算兩次游標卡尺的差值）同時對大鼠未致炎的左腳進行測定，并對各組動物分別于1 h后進行測定[4-7]。

2.5 統計學方法

所有實驗結果采用SPSS 10.0統計軟件統計數據。計量資料以“±s”表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 大鼠腦室給藥電刺激實驗

表1 鎮痛寧膠囊對大鼠腦室給藥電刺激法的鎮痛實驗結果

表1結果表明，鎮痛寧膠囊3個劑量在給藥10 min，1 h，2 h后均有明顯鎮痛作用，與空白對照組比較，低劑量組（0.38 μg/kg）有明顯差異（P＜0.05）;中劑量組（0.76 μg/kg）、高劑量組（1.14 μg/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01），在給藥3 h后，與空白對照組比較中劑量（0.76 μg/kg）有明顯差異（P＜0.05），提示鎮痛時間長于嗎啡組。

3.2 大鼠腦室給藥甩尾試驗

表2 鎮痛寧膠囊對大鼠腦室給藥甩尾法的鎮痛實驗結果

表2結果表明，鎮痛寧膠囊中劑量組對輻射熱所致大鼠尾部疼痛有明顯的抑制作用，其給藥1 h和2 h后的鎮痛作用與嗎啡組相當。與空白對照組比較，給藥1h時中劑量（0.76 μg/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01）、高劑量組有顯著性差異（P＜0.05）；給藥2 h時中劑量組（0.76 μg/kg）有顯著性差異（P＜0.05）；在給藥3 h時中劑量組（0.76 μg/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01），結果提示該藥中劑量組能延長鎮痛時間，其鎮痛時間長于嗎啡組。

3.3 扭體實驗

表3 藥物對小鼠冰醋酸致痛作用的影響

表3結果表明，鎮痛寧膠囊高、中、低劑量組及桂參組，嗎啡組均對醋酸所致的小鼠扭體反應有明顯的抑制作用，與空白對照組比較，低劑量組（0.19 g/kg）有顯著性差異（P＜0.05），中劑量組（0.38 g/kg）、高劑量組（0.56 g/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01），結果提示鎮痛寧膠囊中劑量組鎮痛作用相當于嗎啡組。

3.4 大鼠足跖定壓實驗

表4 鎮痛寧膠囊對大鼠足跖定壓鎮痛實驗結果

表4結果表明：鎮痛寧膠囊高、中劑量給藥組在給藥1 h后，對左腳未致炎癥足跖壓痛有明顯抑制作用，與空白對照組比較，左、右腳趾中劑量組（0.76 μg/kg）、高劑量組（1.14 μg/kg）均有非常顯著性差異（P＜0.01），結果提示該藥對末梢神經疼痛有抑制作用，抑制疼痛作用同于嗎啡。

4 討論

4.1 鎮痛寧膠囊經大鼠腦室給藥可明顯抑制電刺激和輻射熱產生的尾部疼痛，說明該藥為中樞性鎮痛藥。

4.2 鎮痛寧膠囊小鼠扭體實驗和大鼠足跖定壓實驗說明該藥能抑制醋酸扭體反應和致炎癥的大鼠足趾壓痛，說明該藥對末梢神經疼痛也有抑制作用。

兩種鎮痛動物模型實驗結果表明：鎮痛寧膠囊對中樞神經疼痛和末梢神經疼痛均有明顯的抑制作用；其中、高劑量鎮痛作用相當于5倍臨床劑量的嗎啡組，并且持續時間長于嗎啡組。

[1] 李儀奎.中藥藥理實驗方法學[M].上海科學技術出版社,1991:351-356.

[2] 徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].3版.北京:人民衛生出版社,2002:883-886.

[3] 陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,2000:484.

[4] 劉小河,周平,孫大定,等.溫膽片對高架十字迷宮實驗小鼠的抗焦慮作用[J].中藥新藥與臨床藥理雜志,2012,23(5):519.

[5] 張仲林,臧志和,鐘玲,等.六君子湯對脾虛證大鼠胃腸激素影響的實驗研究[J].中成藥,2010,32(4):659-661.

[6] 陳奇.中藥藥理實驗[M].貴陽:貴州人民出版社,1988:81-84.

[7] 藥理學實驗編寫組.藥理學實驗[M].成都:成都中醫藥大學出版社,1983:102.

本文編輯：魯守琴

Experimental Study on Analgesic Site of Zhentongning Capsules

He Xiao-ying, Ma Ying-chun
(Gansu Institute for Drug Control, Gansu Lanzhou 730000, China)

Objective：To investigate the analgesic site of zhentongning capsules, a traditional Chinese medicine compound preparation, and to provide a basis for clinical medication.Methods：Analgesic test was performed in animal models of central nerve analgesia and peripheral nerve analgesia.Results：In electrical stimulation test on rats after intraventricular administration, the result in low dose group (0.38 μg/kg) showed significant difference (P＜0.05), while those in moderate (0.76 μg/kg) and high (1.14 μg/kg) dose groups showed remarkable difference (P＜0.01), with those in blank control group. The result in moderate dose group 3 h after administration showed significant difference with that in blank control group (P＜0.05). In tail-flick test on rats after intraventricular administration, the result in moderate dose group (0.76 μg/kg) 1 h after administration showed remarkable difference (P＜0.01), while that in high dose group showed significant difference (P＜0.05), with that in blank control group. The result in moderate dose group (0.76 μg/kg) showed significant difference with that in blank control group 2 h (P＜0.05), while showed remarkable difference 3 h (P＜0.01), after administration. In writhing test, the result in low dose group (0.19 g/kg) showed significant difference (P＜0.05), while those in moderate (0.38 g/kg) and high (0.56 g/kg) dose groups showed remarkable difference (P＜0.01), with that in blank control group. However, in plantar pressure test on rats, all the results of left and right foot pads in moderate (0.76 μg/kg) and high (1.14 μg/kg) dose groups showed remarkable differences with those in blank control group (P＜0.01).Conclusion：The analgesic tests in rats by intraventricular administration proved the preparation as a central analgesic drug, of which the analgesic effect was prolonged to 3 h, significantly longer than that of morphine. The writhing test in mice and plantar pressure test in rats showed significantly inhibitory effect of the drug on peripheral nerve pain.

Zhentongning Capsules; Analgesic Effect; Experimental Study

R285.5

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.05.012

2017 - 04 - 10

何小英，女，職稱：主管藥師。研究方向：藥品檢驗與藥物分析。通訊作者E-mail：1165715940@qq.com