VEGF及微血管密度在非小細胞肺癌中的表達及VEGF與臨床病理特征的關系

張朝清，劉麗，吳定濱，付春利，許錦文，潘永康，李麗暉

(開平市中心醫院病理科1、康復科2、胸外科3、檢驗科4，廣東開平529300)

VEGF及微血管密度在非小細胞肺癌中的表達及VEGF與臨床病理特征的關系

張朝清1，劉麗2，吳定濱1，付春利3，許錦文1，潘永康4，李麗暉1

(開平市中心醫院病理科1、康復科2、胸外科3、檢驗科4，廣東開平529300)

目的探討血管內皮生長因子(VEGF)及微血管密度(MVD)在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達及VEGF與臨床病理特征的關系。方法選擇2015年1月至2016年12月期間開平市中心醫院胸外科收治的60例NSCLC患者的癌組織及癌旁組織進行研究，同時選擇50例肺良性病變組織標本(術后病理證實)納入對照組。比較不同組織的VEGF的陽性表達率及MVD表達情況，并且對VEGF陽性表達與臨床病理特征的關系進行分析。結果肺癌組織VEGF陽性表達率為73.33%，明顯高于癌旁組織的45.00%，且高于對照組的14.00%，差異均有統計學意義(P＜0.05)；肺癌組織MVD明顯高于癌旁組織，且高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；VEGF陽性表達率在有淋巴結轉移者、TNM分期為Ⅲ期者、中低分化者明顯高于無淋巴結轉移、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期者、分化程度高者，差異均有統計學意義(P＜0.05)；VEGF表達與性別、年齡、是否吸煙、病理分型、腫瘤大小無關(P＞0.05)。結論VEGF及MVD在NSCLC組織中均高表達，其在NSCLC的發生發展及轉移過程中起著重要作用。

血管內皮生長因子；微血管密度；非小細胞肺癌；臨床病理特征；轉移

近年來，肺癌成為嚴重危害人類健康和生命的最常見惡性腫瘤，其發病率和死亡率在我國也呈現出上升趨勢[1]。雖然很多學者針對肺癌發病機制已經進行了深入研究，并且采用了以手術及放化療的綜合治療方案，但患者的預后仍然不盡人意，其5年生存率僅為11%[2]。目前認為患者預后較差的主要原因是肺癌侵襲和轉移，其中生成的新生血管不僅為腫瘤的生長提供營養，同時也向宿主輸出大量的腫瘤細胞，因而是腫瘤侵襲和轉移的形態學基礎[3]。血管內皮生長因子(VEGF)具有特異性誘導腫瘤新生血管生成的作用，微血管密度(MVD)則反映了組織中單位密度的微血管數量。本研究旨在探討VEGF及MVD在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達及VEGF與臨床病理特征的關系，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2015年1月至2016年12月期間開平市中心醫院胸外科收治的60例NSCLC患者，其中男性35例，女性25例；年齡38～73歲，平均(57.8±11.4)歲。納入標準：①符合NSCLC診斷標準；②未接受過手術和化療治療；排除合并急慢性感染、血液系統疾病、自身免疫性疾病、肝腎功能不全以及合并遠處轉移的患者。選擇同期手術的肺良性病變組織標本(術后病理證實)50例納入對照組，其中男性28例，女性22例；年齡31～75歲，平均(54.7±12.9)歲。兩組患者的年齡、性別比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法對手術切除的標本進行常規方法處理，甲醛溶固定后采用石蠟包埋、并切片(厚度5μm)，然后脫蠟、水化，使用過氧化氫(濃度為3%)以阻斷組織內的內源性過氧化物酶；并且應用枸櫞酸緩沖液(0.01 mol/L)進行抗原熱修復，然后分別將非免疫性動物血清(1：10)、VEGF(1：200)、生物素化羊抗鼠抗體(1：200)、SP復合物(1：200)加入，各步驟均經恒溫箱孵育(37℃)、磷酸鹽緩沖液(PBS)洗脫、DAB顯色，以及蘇木素復染、脫水固定等處理，使用中性樹脂封片。空白對照組均運用PBS代替一抗。其中主要試劑包括鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠兔免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒分別購于美國Snatacruz公司、廣州深達生物制品技術有限公司、中杉金橋公司。

1.3 結果判讀VEGF主要在細胞膜、細胞漿上定位表達，顯示棕黃色顆粒者則為陽性。將切片在100倍鏡下進行觀察，選擇10個視野，每個視野各100個腫瘤細胞，共1 000個腫瘤細胞，每張切片上VEGF陽性率≥10%則判斷為VEGF蛋白陽性表達。MVD判定標準：與相鄰的腫瘤細胞、微血管和其他結締組織不相連，分界清楚的棕黃色免疫組化染色細胞群即為一條獨立的微血管，每個標本在100倍鏡下選出3個微血管密度最強區，然后在200倍鏡下計數5個最強區MVD的平均值。

1.4 統計學方法應用SPSS19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(x-±s)表示，計量資料兩兩比較采用t檢驗，多組均數的比較采用方差分析；采用百分數表示計數資料，兩樣本率的比較采用χ2檢驗，均以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組受檢者的VEGF陽性表達和MVD比較60例NSCLC患者中，肺癌組織VEGF陽性表達率及MVD明顯高于癌旁組織及對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。肺癌組織中VEGF陽性表達及對照組VEGF的陰性表達分別見圖1和圖2。

表1 各組受檢者的VEGF陽性表達和MVD比較

表1 各組受檢者的VEGF陽性表達和MVD比較

注：與肺癌組織比較，aP＜0.05；與癌旁組織比較，bP＜0.05。

組別例數VEGF陽性[例(%)]MVD(x-±s，根/mm3)肺癌組織癌旁組織對照組F值/χ2值P值60 60 50 44(73.33) 27(45.00)a7(14.00)ab9.968＜0.05 30.34±12.42 15.78±4.39a4.25±1.54ab93.540＜0.05

圖1 肺癌組織中VEGF陽性表達(×200)

圖2 對照組VEGF陰性表達(×200)

2.2 NSCLC組織中VEGF的表達與臨床病理特征的關系單因素分析顯示，VEGF陽性表達率在有淋巴結轉移者、TNM分期為Ⅲ期者、中低分化者明顯高于無淋巴結轉移、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期者、分化程度高者，差異均有統計學意義(P＜0.05)；VEGF表達與性別、年齡、是否吸煙、病理分型、腫瘤大小無關，差異無統計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2NSCLC組織中VEGF的表達與臨床病理特征的關系[例(%)]

3 討論

肺癌是目前人類發病率最高的惡性腫瘤之一，其中NSCLC約占80%[4]，嚴重影響患者的身體健康及生活質量。對于早期無遠處轉移的NSCLC患者而言，外科手術是公認的首選治療手段，但是患者的五年生存率仍然較低，肺癌侵襲和轉移是導致治療失敗的主要原因[5]。新生血管是指機體內皮細胞在某些因素的刺激下分化成為一些新血管，目前研究證明所有的實體腫瘤生長和轉移均依賴于不斷生產的新生血管，以滿足其營養代謝和擴增的需要；腫瘤細胞的增殖率大于其凋亡率時，可出現腫瘤的快速發展階段以及腫瘤細胞的浸潤和轉移[6]。MVD可以直接檢測腫瘤組織內單位面積的血管數量，是評估腫瘤血管生成的重要指標。血管內皮生長因子是一種廣泛分布于腎臟、腦垂體、腎上腺等體內各組織的、分子量在34～45 kD之間的糖蛋白。VEGF通過與其受體結合，引起一系列信號轉導及釋放多種細胞因子，起到特異性調控血管內皮細胞的增殖、水解基膜、遷移和血管構建等過程，是已知的作用最強的促進血管生成作用的調節因子[7]。研究表明，VEGF往往在病理情況下，尤其是惡性腫瘤組織中呈現出過量表達[8]。本研究中，NSCLC組織中VEGF陽性表達率及MVD明顯高于癌旁組織，且明顯高于良性病變組織，說明NSCLC的發生與VEGF和MVD關系密切。

VEGF在促進新生血管的增加作用之外，還可以為內皮細胞的遷移和腫瘤細胞的轉移提供基礎。周紅鳳等[9]研究發現乳腺癌VEGF的表達水平與組織中微血管密度呈正相關性，指出VEGF在乳腺癌的發生發展及腫瘤轉移中具有重要作用。胡金華等[10]研究則指出，VEGF水平與食管癌患者的預后具有相關性。本研究顯示VEGF表達與性別、年齡、是否吸煙、病理分型、腫瘤大小無關(P＞0.05)；但是VEGF陽性表達率在有淋巴結轉移者、TNM分期為Ⅲ期者、中低分化者明顯高于無淋巴結轉移、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期者、分化程度高者，差異有統計學意義(P＜0.05)。提示VEGF的陽性表達隨著NSCLC的惡性程度及病程進展和淋巴結轉移而增強。

綜上所述，VEGF及MVD在NSCLC的發生發展及轉移過程中起著重要的作用，這對于NSCLC的惡性程度判斷和預后評估具有重要意義，同時也為NSCLC臨床治療提供新的思路。

[1]姚曉軍,張洪偉,蒲強,等.2000年與2010年四川大學華西醫院收治肺癌患者的臨床流行病學特征及病理類型分布特點[J].四川大學學報(醫學版),2014,45(2)：309-315.

[2]侯量,朱佳龍,顧國軍.非小細胞肺癌患者行胸腔鏡下手術治療的圍術期狀況及遠期生存狀況研究[J].中國內鏡雜志,2016,22(8)：70-73.

[3]石燕,陳麗,王治寬,等.Ⅰ～Ⅲ期胃癌中VEGF、HIF-1α和TGF-β1表達的臨床意義及其預后價值[J].臨床腫瘤學雜志,2013,18(4)：310-316.

[4]張仁鋒,張巖,溫豐標,等.6 058例肺癌患者病理類型和臨床流行病學特征的分析[J].中國肺癌雜志,2016,19(3)：129-135.

[5]樊志明,舒祖功,譚江平.非小細胞肺癌生存分析及預后相關因素研究[J].細胞與分子免疫學雜志,2011,27(6)：674-675.

[6]楊勐航,臧遠勝,李兵.肺癌新生血管生成機制研究進展[J].第二軍醫大學學報,2013,34(4)：434-439.

[7]龔曉燕,保永亮,黃金玲.血管內皮生長因子與腫瘤侵襲轉移[J].安徽醫藥,2013,17(1)：3-5.

[8]玄基澤,陳丹,時暢,等.血管內皮生長因子和E-cadherin在胃癌組織中的表達及臨床意義[J].中國醫科大學學報,2014,43(4)：324-327,332.

[9]周紅鳳,吳瑾,陳桂云,等.乳腺癌組織和血清中VEGF、bFGF的表達和微血管密度的關系[J].哈爾濱醫科大學學報,2012,46(3)：248-252,256.

[10]胡金華,張耀晴,朱斌.食管癌患者血清VEGF、TNF-α和IL-6表達與預后的相關性[J].現代腫瘤醫學,2017,25(1)：63-66.

Expression of VEGF and microvessel density in non-small cell lung cancer and relationship of VEGF with clinicopathological features.

ZHANG Chao-qing1,LIU Li2,WU Ding-bin1,FU Chun-li3,XU Jin-wen1,PAN Yong-kang4,LI Li-hui1.Department of Pathology1,Department of Rehabilitation2,Department of Thoracic Surgery3, Department of Clinical Laboratory4,Kaiping Central Hospital of Guangdong,Kaiping 529300,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)and microvessel density(MVD)in non-small cell lung cancer(NSCLC)and relationship of VEGF with clinicopathological features.MethodsCancer tissue and adjacent tissue samples were collected from sixty patients with NSCLC from January 2015 to December 2016 in the Department of Thoracic Surgery in our hospital,and specimens from 50 cases of benign lung lesions(confirmed pathologically after operation)were selected as the control group.The positive expression rate of VEGF and MVD levels were compared among different tissues,and the relationships of VEGF expression with clinicopathological features were analyzed.ResultsThe positive expression rate of VEGF in lung cancer tissue was 73.33%,significantly higher than 45.00%in the adjacent tissues and 14.00%in the control group(P＜0.05).The MVD level of lung cancer tissue was significantly higher than that in the adjacent tissues and that in the control group(P＜0.05).The positive expression rates of VEGF in patients with lymph node metastasis,TNM stageⅢ,middle and low differentiation were significantly higher than those in patients with no lymph node metastasis,TNM stageⅠ-Ⅱ,high differentiation(P＜0.05).The expression of VEGF was not related with gender,age,smoking,pathological type,tumor size (P＞0.05).ConclusionVEGF and MVD are highly expressed in NSCLC tissues,which play important roles in the development and metastasis of NSCLC.

Vascular endothelial growth factor(VEGF);Microvessel density(MVD);Non-small cell lung cancer(NSCLC);Clinicopathological features;Metastasis

R734.2

A

1003—6350（2017）14—2254—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.14.006

2017-04-26)

廣東省開平市科研項目(編號：16A089)

張朝清。E-mail：zcqaotn@126.com