沉淀法和超聲輔助-沉淀法提取茶多酚

馬春霓

(楚雄醫(yī)藥高等專科學校 云南 楚雄 675005)

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沉淀法和超聲輔助-沉淀法提取茶多酚

馬春霓

(楚雄醫(yī)藥高等專科學校 云南 楚雄 675005)

本實驗使用沉淀法及超聲輔助—沉淀法提取茶樹老葉中的茶多酚，以兒茶素含量為評價指標。結果發(fā)現(xiàn)超聲輔助提取的提取率為0.93%，沉淀法為0.91%，兩種提取方法的提取率相差不大，但超聲輔助提取的提取率要稍高。

茶多酚；沉淀法；超聲提取

一、實驗原料

1.供試品 為峨眉山當?shù)夭柁r(nóng)提供的茶樹老葉。

2.主要儀器 超聲清洗儀、旋轉蒸發(fā)儀、低速大容量離心機、電熱鼓風干燥箱、雙光束紫外可見分光光度計等。

3.試劑及對照品 50%乙醇、三氯化鋁(結晶)、碳酸氫鈉、硫酸、乙酸乙酯、香草醛，兒茶素對照品來自于中國藥品生物制品檢定所。

二、實驗方法

(一)回流-沉淀法

稱取過40目篩的茶樹老葉粉末10.0g,加入50%乙醇100ml，用恒溫水槽在60℃回流提取45min，共提取三次。然后抽濾，合并三次濾液，向濾液中加入100ml0.1mol/LAlCl3溶液(稱取AlCl3·6H2O結晶24.1g，加蒸餾水定容至1000ml)，并用1mol/LNaHCO3溶液(稱取42.0g NaHCO3于500ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，即得)調節(jié)溶液PH值至5，靜置至沉淀完全。用離心機離心，保留沉淀，用稀硫酸(取硫酸57ml，加水稀釋至1000ml，即得，本液含H2SO4為9.5%～10.5%[37])，以料：酸=1：2(V/V)在60℃水浴下轉溶15min。混合物用等體積乙酸乙酯萃取三次，酯層在40℃下減壓濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮物在60℃下烘干，便得茶多酚。其流程圖見圖2-1。

(二)超聲輔助提取-沉淀法

稱取過40目篩的茶樹老葉粉末10.0g于500ml燒杯中,加入50%乙醇100ml，在超聲清洗儀中，用59KHz的超聲頻率提取40min，共提取兩次。然后抽濾，合并兩次濾液，向濾液中加入100ml0.1mol/LAlCl3溶液，并用1mol/LNaHCO3溶液調節(jié)溶液PH值至5，靜置至沉淀完全。用離心機離心，保留沉淀，用稀硫酸，以料：酸=1：2(V/V)在60℃水浴下轉溶15min。混合物用等體積乙酸乙酯萃取三次，酯層在40℃下減壓濃縮，回收乙酸乙酯，濃縮物在60℃下烘干，便得茶多酚。其流程圖見圖2-2。

圖2-1 回流-沉淀法流程圖

圖2-2 超聲輔助提取-沉淀法流程圖

(三)含量測定

兒茶素在酸性介質中可以與香草醛反應，生成在505nm處有最大吸收的有色物質，并且在一定濃度范圍內，濃度和光密度之間的關系遵守比耳定律[1]。采用香草醛顯色法，以茶多酚提取物中兒茶素的含量作為評價指標來比較兩種方法對茶樹老葉中茶多酚的提取率。

1.樣品液和對照品液以及顯色劑的制備

(1)樣品液 稱取樣品0.0500g，溶解后移入50ml容量瓶中，加水至刻度，搖勻。

(2)對照品液 稱取兒茶素對照品0.0129g，置25ml容量瓶中，乙醇加至刻度，溶解搖勻。

(3)顯色劑 取香草醛1g，加鹽酸100ml使溶解。

2.最大吸收波長確定

吸取樣品溶液30μl、對照品溶液50.0μl，分別置于5ml容量瓶中，加水1.0ml，用1%香草醛濃鹽酸液加至刻度，搖勻，40min后，以水代替樣品液為空白，于400～700nm掃描。結果最大吸收波長均為503 nm，故確定測定波長為503nm。圖2-3兒茶素對照品光譜掃描曲線

3.標準曲線制備及樣品測定

分別精密吸取兒茶素對照液5，10，20，30，40，50，70，80，100μl于5ml容量瓶中，加水1.0ml，用1%香草醛濃鹽酸液加至刻度，搖勻，40min后于503nm波長處測定其吸光度。測定后以濃度為橫坐標，Abs為縱坐標，繪出標準曲線。取各樣品液30μl，按標準曲線法顯色測定。

三、結果與討論

(一)結果

試驗分別使用了沉淀法及超聲輔助提取-沉淀法對茶樹老葉浸提了提取，并得到了茶多酚樣品。同樣以提取率作為評價指標，對兩種方法進行了篩選(見表2-1)。

由表中的數(shù)據(jù)可以看出沉淀法和超聲輔助提取-沉淀法提取茶多酚的提取率基本相同，但超聲輔助提取-沉淀法要稍高。表2-1 兩種提取方法提取茶多酚的提取率

方法原茶葉量(g)提取物質量(g)取樣量(g)純度(%)平均純度(%)RSD(%)提取率(%)沉淀法10.00.31060.050129.440.050029.500.050129.4429.460.10.91超聲輔助-沉淀法10.00.43150.054321.640.050421.670.050221.5721.630.20.93

(二)討論

對兩種提取方法進行篩選的過程中，我們發(fā)現(xiàn)兩種方法的提取率相差不大。初步分析的原因是：①兩種方法的后續(xù)純化過程均使用了Al3+沉淀茶多酚的辦法，而該法在沉淀離心及轉溶過程中的有效成分損耗較高，使得兩種提取方法的提取率都不高；②超聲波不止增大了有效物質分子運動頻率和速度，雜質分子的運動頻率和速度也相應增加，因此在提取體系里雜質分子的溶出率也會增高。

[1]魏毅,王娟,羅杰英.香莢蘭素比色法測定茶多酚口含片中兒茶素含量.中國中藥雜志，1999,24(6):347～348