丹參藥材水溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜研究

耿 乾

（海南醫學院，海南 海口 570102）

丹參藥材水溶性成分的高效液相色譜指紋圖譜研究

耿 乾

（海南醫學院，海南 海口 570102）

目的 利用高效液相色譜建立5個地區的丹參樣品的指紋圖譜。方法 儀器為HP1100高效液相色譜儀和C18色譜柱，進樣量為20 uL，利用甲醇和7%磷酸水溶液進行梯度洗脫，色譜柱溫度為30攝氏度，流速設置為1.0 ml/min，檢驗波長設置為280 mm。結果 通過中藥色譜圖相似系統評價軟件，將數據導入和修剪建立對照指紋圖譜。5種來源的丹參指紋圖譜與對照指紋圖譜進行相似度比較，結果顯示相似度均大于0.997；5種來源的丹參指紋圖譜在保留時間上標準偏差最大為0.415%，而相對峰面積標準偏差最大為9.477%。結論 本研究建立5個地區的丹參樣品水溶性成分的指紋圖譜，峰分離度好，操作簡單，大大減少檢驗時間。具備良好的靈敏度和穩定性，可用于丹參質量控制。

丹參，高效液相色譜，指紋圖譜

隨著中藥學發展中藥質量控制一直都是研究的熱點，中藥指紋圖譜是目前用于鑒定中藥質量的方法之一[1]。指紋圖譜具備兩個特點第一為根據藥物的特征吸收峰來辨別藥物的真偽，第二通過吸收峰面積來辨別藥物的質量[2]。而丹參屬于唇形科植物，在臨床上常見于活血化瘀方和安神醒腦方中，按照其成分進行分化可為脂溶性成分和水溶性成分[3]。水溶性成分在心臟方面具有增加冠脈灌注，保護心肌的作用，對于腎臟具有抗氧化，減少炎癥因子表達的作用。臨床上對其研究不斷深入，在臨床上應用增加[4]。丹參可能受到產地、藥物管理和雜志等的影響真偽和質量好壞，從而影響患者病情控制[5]。所以本研究應用高效液相色譜建立本院丹參的指紋圖譜對水溶性成分的峰敏感性和分離作用。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

儀器為HP1100高效液相色譜儀和C18色譜柱。研究中使用的乙氰、甲醇和磷酸均為色譜醇。

1.2 研究藥材編號及采購

研究對照品原茶兒醛、丹參素鈉和丹參酚酸均從某生物制品鑒定所購入。研究藥材編號及采購原。見表1。

表1 藥材編號及采購原

1.3 溶液配制

稱取不同樣本0.5 g，將丹參過40目篩。應用鎖式提取加入25 mL純凈水，回流1 h。結束后以采用微孔濾膜濾過備用。對照品配制將干燥后的原茶兒醛、丹參素鈉和丹參酚酸精密稱取1 mg，加入純進水50 mL進行配置。取配制后溶液各1 mL，加入10 mL容量瓶中，加入純進水配制到刻度待用。

1.4 高效液相色譜參數

進樣量為20 uL，利用甲醇和7%磷酸水溶液進行梯度洗脫，色譜柱溫度為30攝氏度，流速設置為1.0 ml/min，檢驗波長設置為280 mm。

2 結 果

2.1 指紋圖譜分析

通過中藥色譜圖相似系統評價軟件，將5種來源的丹參高效液相色譜數據進行導入和修剪建立對照指紋圖譜。通過與對照品指紋圖譜進行對比六種化學成分得到確認。將5種來源的丹參指紋圖譜與對照指紋圖譜進行相似度比較，結果顯示相似度均大于0.997，見表2。

表2 樣品相似度

2.1 兩組療效指標對比

根據五種來源的丹參高效液相色譜峰匹配結果顯示共有22個共有峰，考慮到共有峰的穩定性，選取其中12個作為特有峰，包括原茶兒醛、丹參素鈉和丹參酚酸的參照峰。計算五種來源丹參指紋圖譜的峰保留時間和相對面積。見表3表4。

將研究樣本與對照品指紋圖譜對比結果可見12個特有峰的保留時間和相對面積浮動較小，結果顯示在保留時間上標準偏差最大為0.415%，而相對峰面積標準偏差最大為9.477%。說明研究中的五種來源丹參指紋圖譜相對穩定，有利于質量的控制。

表3 指紋圖譜的峰保留時間對比

表4 指紋圖譜的峰面積對比

3 討 論

本研究對丹參水溶性成分建立指紋圖譜，考察高效液相色譜對丹參水溶性成分峰的分離靈敏性。結果顯示5種來源的丹參指紋圖譜與對照指紋圖譜進行相似度高，且保留時間上標準偏差最大為0.415%，而相對峰面積標準偏差最大為9.477%。提示高效液相色譜是一種可作為丹參水溶性成分質量控制的方法。在操作中需注意以下幾點：

①色譜柱的選擇決定了丹參峰的敏感性和分離情況，本研究使用的是C18色譜柱。有研究顯示C18色譜柱能有效的分離丹參水溶性成分[6]。這也是本研究實現峰良好分離的關鍵之一。

②不同檢驗波長對生成丹參指紋圖譜的信息量有差距，本研究選用280 mm的原因在于，在研究之前采用不同波長檢驗，發現在280 mm下可獲得信息量最大的指紋圖譜。

③目前梯度洗脫的方案有甲醇和磷酸水溶液，另一種為乙氰和磷酸水溶液，從試劑價格上考慮乙氰要貴于甲醇，同時甲醇較乙氰而言其毒性較低[7]。所以本研究采用的是甲醇和磷酸水溶液。

總上所述，利用高效液相色譜建立丹參水溶性成分的指紋圖譜，對于成分的敏感性和分離作用較好，指紋圖譜特征峰明顯，可用于丹參水溶性成分質量控制。

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本文編輯：趙小龍

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ISSN.2095-8242.2017.24.4709.02