頂空毛細管氣相色譜法測定克林霉素磷酸酯中甲酸殘留量

李超

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121）

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頂空毛細管氣相色譜法測定克林霉素磷酸酯中甲酸殘留量

李超

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121）

目的 建立測定克林霉素磷酸酯中甲酸殘留的頂空毛細管氣相色譜法。方法 使用Agilent DB－FFAP毛細管柱（30 m×0．32 mm，0．5 μm）及氫火焰離子檢測器（FID），進樣口溫度200℃，檢測器溫度250℃；程序升溫，初始溫度為40℃，保持6 min，然后以30℃ ／min的速率升溫至180℃，保持3 min；頂空進樣，平衡溫度為65℃，平衡時間為30 min。結果 甲酸質量濃度在0．003 743～0．998 0 g／L范圍內與峰面積線性關系良好，r＝0．999 2（n＝8），平均回收率為99．30%，RSD為0．64%（n＝12）。結論 該方法簡便，靈敏度高，重復性好，結果準確，適用于克林霉素磷酸酯中甲酸殘留量的測定。

克林霉素磷酸酯；甲酸；頂空進樣法；毛細管氣相色譜法；含量測定

克林霉素磷酸酯（clindamycin phosphate）是廣泛應用于革蘭陽性球菌及厭氧菌所致嚴重感染的半合成抗菌藥物。在其原料藥的合成工藝中，多使用原甲酸三乙酯[1－3]。后者在合成過程中會水解生成甲酸和乙醇。甲酸有急性毒性、刺激性和致突變性，而2015年版《中國藥典（二部）》[4]并未對甲酸進行檢測，亦未發現有關測定克林霉素磷酸酯原料藥中甲酸殘留的文獻。由于甲酸在氣相色譜的氫火焰離子檢測器（FID）的響應信號很弱，無法用氣相色譜儀直接測定，筆者參考文獻[5－10]，并根據在硫酸條件下甲酸與乙醇反應生成甲酸乙酯的原理，將甲酸衍生成甲酸乙酯，然后采用頂空氣相色譜法進行測定，并按照2015年版《中國藥典（四部）》通則9101“藥品質量標準分析方法驗證指導原則”[7]對方法進行了驗證，效果滿意。現報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

Clarus680氣相色譜儀，FID，TurboMatrix40型頂空進樣器（珀金埃爾默公司）；MSU－224S型電子分析天平（賽多利斯公司）。

1．2 試藥

3批克林霉素磷酸酯原料藥均由A公司提供，根據其批號的不同分別記作S1，S2，S3；無水甲酸，乙醇，硫酸，甲酸乙酯均為分析純；水為純化水。

2 方法與結果

實驗組經新輔助放化療后，CR 9例，PR 29例，PD 3例，SD 12例；新輔助放化療前后患者臨床分期變化情況。化療前：Ⅱ期 34例，Ⅲ 19例；化療后：Ⅰ期 24例，Ⅱ期 25例，Ⅲ 4例。見表1。

初中數學學科涉及的知識范圍廣，難度大，平時還有許多考試，需要時間進行復習，因此，對教師的教學進度有一定要求。這使得教師的教學過程往往以提高課堂教學效率為目標，在培養學生獨立思考能力方面就會流于表面，只注重形式化的過場，而沒有把培養學生獨立思考能力的教學活動真正落到實處，學生無法理解獨立思考的本質，也就無法提高自身的獨立思考能力。

在智慧城市建設公眾參與水平評價體系中，各指標最優化的量值處理后為1，用其他量值減去1后取平方，則構成了模糊的差平方復合模糊物元

耐用性試驗：分別考察了不同編號的2根Agilent DB－FFAP毛細管柱（30 m×0．32 mm，0．5 μm），初始柱溫±2℃，流速±0．2 mL／min，進樣口溫度±5℃，檢測器溫度±5℃。經試驗，上述測定條件小的變動能滿足系統適用性試驗要求。

5%（V／V）硫酸水溶液：將50 mL硫酸慢慢加入到950 mL水中，混勻，放冷備用。

15%（V／V）硫酸乙醇溶液：將15mL硫酸慢慢加入到85 mL乙醇中，混勻，放冷備用。

對照品溶液：稱取無水甲酸4．990 2 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用5%硫酸水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液（1）；精密量取對照品貯備液（1）1 mL，置50 mL容量瓶中，用5%硫酸水溶液稀釋至刻度，作為對照品貯備液（2）；精密量取對照品貯備液（2）1 mL，置20 mL頂空瓶中，精密加入15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，搖勻，作為對照品溶液。

2．1 色譜條件

供試品溶液：稱取樣品0．20 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，精密加入5%硫酸水溶液1 mL和15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，搖勻，作為供試品溶液。

空白溶液：精密量取5%硫酸水溶液和15%硫酸乙醇溶液各1 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，搖勻，即得。

“二表哥說，因為老太太最疼小女兒，如果讓老太太知道小女兒死了，她一定會難過死。又說，他會向大表哥說明一切，大表哥是個孝子，知道出了這種事后該怎么做，最主要的是不驚動老人。

12月7日4版《加快上海咨詢業轉型升級》，其“樹立和增強加快現代咨詢服務業發展的迫切感和使命感”，用“增強加快現代……迫切感和使命感”為準；樹立迫切感和使命感，此話不通。

2．3 方法學考察

系統適用性試驗：取2．2項下對照品溶液、供試品溶液、空白溶液和甲酸乙酯溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（見圖1）。結果，衍生物峰與甲酸乙酯峰一致，與相鄰峰分離度均不小于1．5，空白溶劑對測定無干擾。

色譜柱：AgilentDB－FFAP毛細管柱（30m×0．32mm，0．5 μm）；檢測器：FID檢測器；程序升溫：初始溫度40℃，維持6 min，然后以30℃ ／min的速率升至180℃，保持 3 min；進樣口溫度：200℃；檢測器溫度：250℃；頂空進樣：平衡溫度65℃，平衡時間30 min，進樣時間0．08 min。

線性關系考察：精密量取 2．2項下對照品貯備液（1）適量，用5%硫酸水溶液稀釋成甲酸質量濃度分別為 0．003 743，0．049 900，0．099 800，0．249 500，0．399 200，0．499 000，0．748 500，0．998 000 g／L的溶液，取上述溶液各1 mL，置20 mL頂空瓶中，精密加入15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，搖勻，按擬訂色譜條件進樣。以甲酸質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y＝3．733 6×106X＋1．538 6×104，r＝0．999 2（n＝8）。結果表明，甲酸質量濃度在0．003 743～0．998 0 g／L范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密量取對照品溶液，按擬訂色譜條件連續進樣6次，記錄色譜圖，測量甲酸乙酯峰面積。結果的 RSD為1．09%（n＝6），表明儀器精密度良好。

甲酸乙酯溶液：稱取甲酸乙酯164．6 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用5%硫酸水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置20 mL頂空瓶中，精密加入15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，搖勻，即得。

加樣回收試驗：分別配制相當于2．2項下對照品貯備液（2）質量濃度的 0．75%（定量限濃度），50%，100%，120%作為回收對照品溶液。稱取已測得甲酸殘留量的編號為S1的樣品9份，各0．20 g，精密稱定，分別置20 mL頂空瓶中，分別精密加入回收對照品溶液1 mL和15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，搖勻，每個濃度平行制備3份。按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，計算回收率。結果見表1。

穩定性試驗：取同一供試品(編號為S1)溶液，分別于室溫下放置0，2，4，6，8 h，按擬訂色譜條件進樣，測定峰面積。結果的 RSD為1．38%（n＝5），表明樣品在室溫下8 h內穩定。

圖1 氣相色譜圖

定量限和檢測限試驗：取對照品溶液適量，用5%硫酸水溶液逐步稀釋，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以信噪比為10∶1時對照品的質量濃度為定量限，甲酸的質量濃度為3．13 μg／mL；以信噪比為3∶1時的對照品質量濃度為檢測限，甲酸的質量濃度為0．94 μg／mL。

重復性試驗：取編號為S1的樣品6份，各0．20g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，精密加入5%硫酸水溶液1 mL和15%硫酸乙醇溶液1 mL，密封，按擬訂色譜條件進樣測定。結果樣品中甲酸的含量為0．001 6%，RSD為1．68%（n＝6），表明方法重復性良好。

表1 甲酸加樣回收試驗結果（n＝12）

2．2 溶液制備

教育素養是指父母為了合格地擔當家庭教育實施者的角色，在教育子女的過程中應當具備的特殊品質，包括教育知識、教育觀念與教育能力。[2]年輕父母對家庭教育問題失察，受到家庭教育本身特點的影響，也和年輕父母自身的素養及行為方式有密切關系。

2．4 樣品含量測定

宇航員在宇宙空間中穿的衣服和在地面上差不多，比如T恤和短褲。他們不像在地面時那樣經常換衣服——畢竟，在空間站里沒有洗衣機。

按2．2項下方法分別制備對照品溶液和供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，按外標法計算供試品中甲酸的含量。結果樣品編號為S1，S2，S3的溶液中甲酸的相對百分含量分別為0．001 6，0．001 7，0．001 8（限度為0．500 0%）。

路面基層檢測合格及模板安裝完成后，進行鋼筋網安裝。先將橫筋按設計尺寸布置于底層，再將縱筋布置橫筋上方，在此過程中要注意鋼筋在板厚方向的高度，預留足夠的保護層厚度。鋼筋布置完成后進行鋼筋連接，縱向鋼筋接頭采用電弧單面焊接，搭接長度為16cm，焊接接頭處應錯開布置，接頭連線與路面行車方向成45°夾角，縱向鋼筋與橫向鋼筋交叉處采用鋼絲繩綁扎。采用φ16鋼筋彎拉制做成“Ω”形置于橫向鋼筋下作為鋼筋支架，并采用電焊連接，橫向布置間隔約為150cm，縱向布置間隔約為120cm。

3 討論

甲酸又稱蟻酸，為無色液體，有明顯刺激性臭味，也是強還原劑，在飽和脂肪酸中酸性最強。甲酸作為有機化工原料，廣泛應用于化工行業的有機合成，輕工行業中的皮革、造紙等，也是生產農藥、醫藥的重要原料[8]。甲酸可經皮膚吸收，對皮膚及黏膜的刺激性強，其腐蝕性與強無機酸相似。高體積分數（75%～80%）甲酸溶液可造成灼傷和組織壞死，其表現與鹽酸、硫酸等無機酸中毒相似，但誤服后較少造成食道狹窄，稀甲酸溶液（9%）對口腔黏膜的損害也較輕[9]。甲酸在體內經廣泛氧化代謝，最后生成為二氧化碳和水[10]。

甲酸是藥品殘留溶劑測定的第3類溶劑，是很多藥品生產中必須使用的原料。由于甲酸性質活潑，具有較強的酸性、腐蝕性和還原性，且分子量較小，出峰響應低，直接測定較困難[11]。甲酸的測定方法有氣相色譜法、液相色譜法、離子色譜法。離子色譜法儀器特殊，而在液相色譜法中，甲酸保留時間很短，干擾較多，故本研究中采用氣相色譜法對甲酸進行測定。由于甲酸在FID檢測器上響應極低，不便于檢測。如采用氣相色譜－質譜聯用（GC－MS）法可對甲酸進行測定，但成本過高。本研究中采用酯化反應法，在硫酸條件下將甲酸與乙醇定量生成甲酸乙酯進行測定，顯著改善了在FID檢測器的響應值，提高了方法靈敏度。本研究中考察了65，80，85，90℃ 4個頂空溫度對測定的影響。結果顯示，隨著平衡溫度的升高，甲酸乙酯的峰面積雖然逐漸增大，但是出現的干擾峰也隨之增多，影響測定結果，為保證準確性，最終選擇65℃作為平衡溫度。頂空平衡時間考察了20，25，30，40 min，結果甲酸乙酯的峰面積隨時間的增加逐漸增大，且30 min和40 min的峰面積較接近，最終選擇30 min作為頂空平衡時間。本研究中過量加入了硫酸和乙醇，通過甲酸乙酯溶液計算對照品溶液中反應生成的甲酸乙酯的量，實際測得對照品溶液中生成的甲酸乙酯量與甲酸完全反應生成甲酸乙酯的理論量的比值為1．005。說明本研究中甲酸能完全反應生成甲酸乙酯。且由于3批樣品均檢出了甲酸乙酯，故有必要對其進行控制，以確保藥品質量的穩定可控。

綜上所述，本研究中建立的方法安全、準確，靈敏度高，可用于克林霉素磷酸酯中甲酸殘留的測定。

[1]蔣忠良，許凌月，馬東旭，等．克林霉素磷酸酯的合成研究[J]．同濟大學學報(自然科學版)，2004，32（12）：1693－1695．

[2]李有桂，崔 盛，張道俊，等．克林霉素磷酸酯的合成克林霉素磷酸酯的合成[J]．廣州化工，2012，40（11）：87－88．

[3]李 利，吳 磊．克林霉素磷酸酯的合成[J]．安徽化工，2000，20（6）：15－16．

[4]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（二部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2015：441－443．

[5]吳小英．毛細管氣相色譜法測定卡泊三醇中甲酸殘留量[J]．安徽醫藥，2012，16（3）：308－309．

[6]信清華，尹洪銀，程 虎．頂空氣相色譜法測定藥品的甲酸殘留的研究[J]．中國衛生檢驗雜志，2010，20（8）：1921．

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[9]任新安，李艷妮，劉俊愛，等．液相色譜法測定茶堿中甲酸殘留量[J]．河北化工，2007，30（8）：79－80．

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[11]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（四部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2015：374－377．

Content Determination of Formic Acid in Clindamycin Phosphate by Headspace Capillary GC

Li Chao
（Chongqing Institute For Drug and Food Control，Chongqing，China 401121）

Objective To establish an headspace capillary GC method for the content determination of formic acid in clindamycin phosphate．M ethods Agilent DB－FFAP capillary column（30 m×0．32 mm，0．5 μm）and FID were adopted．The inlet temperature was 200℃and the FID detector temperature was 250℃．The oven temperature was initially held at 40℃ for 7 min and was then programmed to 150℃ at 30℃ ／min and held for 3 min．The head－space sampling was used at heated temperature 65℃ for 30 min．Results The concentration of formic acid was linear in the range of 0．003 743－0．998 0 g／L，r＝0．999 2（n＝8）．The average recovery rate was 99．30%，RSD＝0．64%（n＝12）．Conclusion The method is simple，sensitive，reproducible and accurate．It is suitable for the content determination of formic acid residue in clindamycin phosphate．

clindamycin phosphate；formic acid；head－space injecting method；capillary gas chromatography；content determination

R917；R927．11

A

1006－4931(2017)14－0014－03

2017－03－15；

2017－04－10)

10．3969／j．issn．1006－4931．2017．14．005

李超，女，漢族，重慶人，碩士研究生，主管藥師，主要從事藥物質量控制工作，（電子信箱）179320851＠qq．com。