XT-4000i血液分析儀血小板兩種測(cè)定方法與血涂片復(fù)檢的對(duì)比

王曉賢 劉潔 周永紅

XT-4000i血液分析儀血小板兩種測(cè)定方法與血涂片復(fù)檢的對(duì)比

王曉賢 劉潔 周永紅

目的分析血液分析儀XT-4000i血小板兩種測(cè)定方法的準(zhǔn)確性和血涂片復(fù)檢的關(guān)系。方法選取50例電阻抗法(PLT-I)計(jì)數(shù)正常無(wú)提示有血小板直方圖異常的標(biāo)本，50例PLT-I計(jì)數(shù)大于100 ×109/L并提示有血小板直方圖異常(小紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片)的標(biāo)本和50例PLT-I計(jì)數(shù)小于100× 109/L并提示有血小板直方圖異常(大血小板和血小板聚集)的標(biāo)本，用光學(xué)法(PLT-O)計(jì)數(shù)血小板和涂片鏡檢觀察血小板數(shù)量和形態(tài)分布并間接計(jì)數(shù)血小板的數(shù)量，以鏡檢法為參考方法，評(píng)價(jià)電阻抗法和光學(xué)法的準(zhǔn)確性。結(jié)果50例電阻抗法(PLT-I)計(jì)數(shù)正常無(wú)提示有血小板直方圖異常的標(biāo)本用阻抗法和光學(xué)法檢測(cè)血小板與顯微鏡法對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在小紅細(xì)胞組、紅細(xì)胞碎片組和大血小板組中，電阻抗法和鏡檢法的計(jì)數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，光學(xué)法和鏡檢法的計(jì)數(shù)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，光學(xué)法的準(zhǔn)確性優(yōu)于電阻抗法。但在血小板聚集組中，電阻抗法和鏡檢法的計(jì)數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)光學(xué)法和鏡檢法的計(jì)數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論光學(xué)法能較好地消除小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片和大血小板等因素對(duì)血小板計(jì)數(shù)的影響，但無(wú)法消除血小板聚集對(duì)計(jì)數(shù)血小板的影響，應(yīng)與顯微鏡法復(fù)核，使結(jié)果更準(zhǔn)確、可靠。

血小板計(jì)數(shù);電阻抗法;光學(xué)法;顯微鏡間接計(jì)數(shù)法

目前，全自動(dòng)血液分析儀對(duì)血小板的計(jì)數(shù)方法有電阻抗法和光學(xué)法。由于血小板特殊的生理特點(diǎn)，血小板計(jì)數(shù)易受大血小板、血小板聚集和紅細(xì)胞等因素的干擾而影響計(jì)數(shù)結(jié)果。本文使用電阻抗法與光學(xué)法同時(shí)進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)并與人工鏡檢法進(jìn)行對(duì)比，評(píng)價(jià)電阻抗法和光學(xué)法的差異性及臨床應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 儀器 日本Sysmex XT-4000i全自動(dòng)血液分析儀，湖北武漢致遠(yuǎn)的EDTA-K2抗凝管，奧林巴斯雙目光學(xué)顯微鏡。

1.2 試劑 采用Sysemx XT-4000i全自動(dòng)血液分析儀及原裝配套試劑。定期開展質(zhì)控和較準(zhǔn)，嚴(yán)格按照儀器操作作業(yè)指導(dǎo)書的要求執(zhí)行進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)前儀器狀態(tài)良好，血涂片染色液采用瑞氏染色。

1.3 方法 從我院住院和門診患者用Sysemx XT-4000i檢測(cè)血常規(guī)的標(biāo)本中遵循不重復(fù)的原則選取50例電阻抗法(PLTI)計(jì)數(shù)正常無(wú)提示有血小板直方圖異常的標(biāo)本為A組，50例PLT-I計(jì)數(shù)大于100×109/L并提示有血小板直方圖異常(小紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片)的標(biāo)本為B組和50例PLT-I計(jì)數(shù)小于100×109/L并提示有血小板直方圖異常(大血小板和血小板聚集)的標(biāo)本為C組，用光學(xué)(PLT-O)計(jì)數(shù)血小板和涂片鏡檢觀察血小板數(shù)量和形態(tài)分布并間接計(jì)數(shù)血小板的數(shù)量。血涂片的制作參照《臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)》第4版的標(biāo)準(zhǔn)，要求厚薄適宜，頭體尾分明，邊緣整齊。血涂片自然干燥后用瑞氏染液染色后鏡檢，觀察區(qū)域從約50% 的紅細(xì)胞互相重疊區(qū)域開始，并向紅細(xì)胞完全散開的區(qū)域推移，用油鏡觀察血小板的形態(tài)和數(shù)量［1］。正常情況下，在血片厚薄適中區(qū)域(每個(gè)紅細(xì)胞彼此相互接觸但不重疊)，每個(gè)油鏡視野，約有血小板8～15個(gè)［2］;少于8個(gè)/油鏡視野可初步認(rèn)為血小板減少，大于30個(gè)/油鏡視野則可初步認(rèn)為血小板增加。油鏡下的細(xì)胞形態(tài)異常判斷標(biāo)準(zhǔn):①小紅細(xì)胞:直徑小于6 um。②紅細(xì)胞碎片:各種不完整形狀的細(xì)胞碎片。③血小板聚集:血小板5個(gè)以上成堆。④巨、大血小板:直徑6 um以上或直徑4～6 um［3］。顯微鏡間接計(jì)數(shù)血小板:按照Sutor AH等［4］人推薦的方法，在血片體尾交界處區(qū)，采取城垛式計(jì)數(shù)方式無(wú)重復(fù)的計(jì)數(shù)100個(gè)血小板(N目測(cè)血小板數(shù))和所涉及的視野中所有的白細(xì)胞的總數(shù)(N目測(cè)白細(xì)胞數(shù))，對(duì)于血小板嚴(yán)重減少的患者，計(jì)數(shù)不少于50個(gè)血小板;以儀器計(jì)數(shù)的白細(xì)胞數(shù)(N儀器×109/L)為參考，計(jì)算出血小板的總數(shù)，血小板數(shù)量N=(N目測(cè)血小板數(shù)/N目測(cè)白細(xì)胞數(shù))×N儀器×109/L［1］。以鏡檢法為參考方法，評(píng)價(jià)電阻抗法和光學(xué)法的準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果

2.1 3種方法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果及直方圖異常標(biāo)本中存在的干擾因素見表1。

涂片顯示小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、大血小板、血小板聚集是病理標(biāo)本中常見的干擾物質(zhì)。以鏡檢法為參考方法，在A組中分別與電阻抗法比較P＞0.05，與光學(xué)法比較P＞0.05，因此電阻抗法被大部分儀器應(yīng)用。

2.2 干擾因素對(duì)光學(xué)法和阻抗法PLT計(jì)數(shù)結(jié)果的影響分析見表2。

在小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片和大血小板組中，電阻抗法和鏡檢法的計(jì)數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，光學(xué)法和鏡檢法的計(jì)數(shù)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，光學(xué)法的準(zhǔn)確性優(yōu)于電阻抗法。但在血小板聚集組中，電阻抗法和鏡檢法的計(jì)數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)光學(xué)法和鏡檢法的計(jì)數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，光學(xué)法也存在局限性。

3 討論

血小板計(jì)數(shù)是止血凝血檢查最常用的試驗(yàn)之一。傳統(tǒng)的電阻抗檢測(cè)技術(shù)，單純靠細(xì)胞體積一個(gè)檢測(cè)參數(shù)，無(wú)法有效區(qū)分其他干擾物質(zhì)，特別是無(wú)法區(qū)分病理樣本中的大血小板、小紅細(xì)胞以及細(xì)胞碎片。為了提高血小板計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性，近年來(lái)光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)被逐漸應(yīng)用到自動(dòng)血液分析中。本文觀察光學(xué)法能較好地消除小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片和大血小板等因素對(duì)計(jì)數(shù)血小板影響，但無(wú)法消除血小板聚集對(duì)計(jì)數(shù)血小板的影響。與儀器自動(dòng)計(jì)數(shù)血小板相比，血涂片觀察血小板有其顯著的優(yōu)點(diǎn)。在顯微鏡下，通過(guò)肉眼能直觀地區(qū)分血小板、紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片，觀察血小板聚集情況，能直接排出大血小板、小紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片和血小板凝集對(duì)血小板的干擾，并能直接計(jì)數(shù)各種細(xì)胞的比例，這就是顯微鏡鏡檢間接計(jì)數(shù)血小板可行性的理論基礎(chǔ)［1］。臨床實(shí)際工作中可用PLT-I法作為常規(guī)標(biāo)本檢測(cè)，當(dāng)遇到某些特殊標(biāo)本(如混有大型血小板或小球性紅細(xì)胞時(shí)或細(xì)胞碎片等)，提示PLT-I結(jié)果可信度低(血小板異常)，建議使用PLT-O法再次檢測(cè)，使血小板結(jié)果更加可信，這樣可節(jié)約試劑成本、降低復(fù)查次數(shù)，但在一些特殊病例如EDTA依賴性的血小板聚集時(shí)應(yīng)與顯微鏡法復(fù)核，使結(jié)果更準(zhǔn)確、可靠。

［1］劉善鳳，王利民，曾筱倩，胡麗華.涂片鏡檢對(duì)初步糾正血小板假性降低的意義.臨床血液學(xué)雜志，2010，23(4):193-195.

［2］朱忠勇.應(yīng)用血液分析儀后復(fù)查血片的內(nèi)容和方法及程序.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2003，26(12):785-787.

［3］朱忠勇.準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板方法學(xué)研究進(jìn)展.國(guó)外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)分冊(cè)，2002，23:121-125.

［4］ANTON H SUTOR，M D.ASTRIDGROH MANN，etal.Problems with platelet counting in thrombocytopenia.A rapidmanualmethodtomeasur e lowplatelet counts.Seminar s in thrombosis and hemostasis，2001，27(3):237-243.

350009 福建省福州市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以鏡檢法為參考方法，分別與電阻抗法和光學(xué)法進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)和分析。所有數(shù)據(jù)使用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

表1 3種方法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果及標(biāo)本中存在的干擾因素(x±s，×109/L)

干擾因素組別 例數(shù) 電阻抗法 光學(xué)法 鏡檢法 小紅細(xì)胞 紅細(xì)胞碎片 大血小板 血小板聚集A組 50 191±49.2 195±47.3 197±49.8無(wú) 無(wú) 無(wú) 無(wú)B組 50 249±82.9 200±83.2 203±85.4 15 35 無(wú) 無(wú)C組 50 66.8±13.4 92.3±15.6 94.7±16.1 無(wú) 無(wú)30 20

表2 干擾因素對(duì)光學(xué)法和阻抗法PLT計(jì)數(shù)結(jié)果的影響分析(x±s，×109/L)

注:與鏡檢法比較，［1］P＜0.05;［2］P＜0.05

例數(shù) 電阻抗法 光學(xué)法 鏡檢102±8.6 203±97.5 200±99.4紅細(xì)胞碎片 35 257±101［1］237±103 240±106大血小板 30 75.4±8.3［1］94.6±7.9 96.0±8.5血小板聚集 20 53.9±8.1［2］58.4±8.4［2］組別法小紅細(xì)胞 15 229±99.0［1］