春石斛蘭的組培快繁

郭英鐸+張秀珊+曾寶珰+洪生標+鄭運歡+黃茜莉+陳少玲

引言

以自育雜交后代春石斛蘭的側芽為材料，通過試驗，篩選春石斛蘭最適培養基配方，研究其組培快繁技術，建立一套春石斛蘭組培快繁的技術體系，為春石斛蘭種苗生產奠定技術基礎，實現工廠化生產的目標。結果表明：1/3 MS + 6-BA 5.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，蔗糖20.0 g/L 、瓊脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，對于叢生芽的增殖效果較好。

石斛屬（Dendrobium）為蘭科（Orchidaceae）中的第二大屬，依開花時間不同，石斛蘭可分為秋石斛和春石斛，春石斛園藝品種主要由原產于我國西南和華南地區的金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl）與亞熱帶原生種培育而成。春石斛蘭又名美花石斛，因春天開花而得名，多年生附生蘭科植物，與常見的秋石斛相比，具有株形緊湊、花多、色艷、有香味，是近年來比較受歡迎的盆栽花卉之一。春石斛最先由英國從中國引入歐洲栽培，并進行品種改良。第二次世界大戰后，日本大力發展春石斛，與其他品種的石斛雜交，培育出許多園藝品種。汕頭市農業科學研究所在多年引種、栽培和雜交育種探索的基礎上，不斷篩選和培育出適宜本地區推廣的優良品種，并初步建立一套包括種苗擴繁、種苗培育、花期調控及盆花生產的技術方法。在規模化生產中，春石斛主要采用莖段扦插、高位芽切取、組織分生培養3種方法進行繁殖，而組培分生培養與其它兩種方法相比，具有生長整齊，長勢旺盛，易于標準化生產等特點，利于最新育種成果的推廣應用。本試驗主要研究總結春石斛蘭雜交后代的組培快繁技術，為盆花春石斛蘭標準化生產提供技術保障，更好地加快我所選育良種的推廣應用。

1 材料和方法

1.1 供試材料

試驗在汕頭市農業科學研究所的花卉育種與推廣研究室的組培中心進行，供試材料是從雜交的春石斛蘭果莢播種后代篩選株型和花色適合當地市場推廣的優良品系的莖段側芽或新芽莖尖為外植體。每年3～5月份為春石斛蘭新芽抽生旺季，此時切取新生側芽或莖尖，用自來水沖洗干凈，置于超凈工作臺上用75%酒精浸泡30秒，無菌水沖洗3次，再用0.I%Hg Cl2溶液消毒8分鐘，無菌水沖洗3次，繼續用0.I%Hg Cl2溶液消毒5分鐘，無菌水徹底沖洗5次，除去包葉接入1/3 MS + 6-BA 10.0 mg/L，蔗糖20.0 g/L 、瓊脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L的誘導培養基，將形成的不定芽，切割成1.5cm，帶2片葉的外植體作為試驗材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設計

將無菌外植體接入培養基進行為期60d的培養，60d后對不定芽的個數進行統計，篩選出最適培養基配方，培養條件為溫度（26±2）℃，光照強度1300～1500lx，光照時間為10h/d。

1.2.2 不同BA濃度對組培苗的影響

以1/3 MS為基本培養基，加入蔗糖20.0 g/L 、瓊脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，然后分別加入6-BA 0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 3.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 5.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L，6-BA 7.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L和6-BA 9.0 mg/L + NAA 0.1 mg/L形成5個不同激素濃度的培養基進行培養，pH調整為 5.8，以BA濃度為0 mg/L的培養基為對照。每個處理接種10瓶，每瓶接種一個無菌外植體。

1.2.3 壯苗和生根試驗

借鑒蝴蝶蘭組培擴繁技術，選取健壯的組培苗，從基部分開，接入用于蝴蝶蘭過度和生根的培養基花寶+蛋白胨+活性炭+香蕉泥+馬鈴薯泥+IBA 0.3mg/L+NAA 0.3mg/L對試驗材料進行培養，60d后統計生根數和生根率。

2 結果與分析

2.1 不同BA濃度對組培苗的影響結果

由表1可知，細胞分裂素6-BA和生長素類似物NAA的組合對春石斛蘭不定芽的繼代增殖有一定的效果，在NAA 0.1 mg/L濃度不變的情況下，隨著6-BA的濃度增加，增殖倍數先上升而后下降，在6-BA濃度為5.0 mg/L的時候增殖倍數最大，高于其它處理。

2.2 壯苗和生根結果

由表2統計可知春石斛蘭組培苗的生根率為80±5%，生根數2.1±0.5條。

3 結論與討論

汕頭市農業科學研究所花卉育種與推廣研究室是以蝴蝶蘭的組織快繁和栽培為主要研究方向的部門，所以本試驗是建立在蝴蝶蘭培養基的基礎上進行，其中的二次消毒也是在大量蝴蝶蘭花梗消毒效果總結下來的方法，能有效降低污染率和提高成活率。

試驗結果表明1/3 MS、蔗糖20.0 g/L 、瓊脂6.0 g/L和椰汁100.0 ml/L，pH5.8在不同激素濃度配比的情況下是適合春石斛蘭的繼代增殖的。在本試驗中，用5個不同濃度的6-BA與NAA 0.1 mg/L形成激素組合進行培養，結果發現春石斛蘭的不定芽增殖倍數隨著6-BA濃度的升高呈先升后降的趨勢，不定芽的增值率高于其它濃度的處理，這個變化趨勢跟蝴蝶蘭進行組織培養相似，隨著6-BA濃度的升高出現增殖倍數先升后降的結果，不同的是，春石斛蘭增殖的激素濃度相對較低，在6-BA濃度為5.0 mg/L時增殖倍數最高，然后出現下降趨勢，而蝴蝶蘭增殖所需激素濃度相對較高，在本試驗中，6-BA濃度為7.0 mg/L或者更高時，春石斛蘭的增殖倍數已出現下降趨勢，而蝴蝶蘭增殖倍數仍比低濃度的要高，呈上升趨勢。因此，通過本試驗，我們篩選6-BA濃度為5.0 mg/L對應的配方為春石斛蘭最佳配方。

春石斛蘭在經過幾次繼代培養達到一定數量后就要進行壯苗和生根處理，因為增殖后的組培苗生長不均勻，苗況不齊，一些苗況較差的組培苗移栽后很容易死亡，所以要進行壯苗和生根。添加香蕉泥對石斛蘭的壯苗和生根有明顯促進作用，而加入活性炭能有效防止組培苗褐化，根系更粗壯，葉色濃綠，并促進組培苗鮮重的增加。春石斛蘭組培苗使用蝴蝶蘭的過度和生根培養基也能取得較好的效果，所以本試驗沒有進一步研究。根據本所在春石斛蘭栽培方面的研究，得出組培苗出瓶移栽最好是每年10月到清明節之前，這時對經過壯苗和生根的組培苗進行出瓶移栽的存活率是比較高的。

作者簡介：郭英鐸（1984-），男，漢族，汕頭，助理農藝師，大學本科，園藝。

*通訊作者：張秀珊（1972-），女，漢族，梅州，高級農藝師，大學本科，園藝。

作者單位：廣東省汕頭市農業科學研究所endprint