超高壓提取羅漢果中羅漢果甜苷V的工藝優(yōu)化

羅漢果為葫蘆科植物羅漢果Siraitia grosvenorii C. Jeffrey ex A. M. Lu et Z. Y. Zhang的干燥果實，性涼、味甘，清熱潤肺，滑腸通便，用于肺火燥咳，咽痛失音，腸燥便秘。羅漢果苷V作為羅漢果中的主要成分，是評價其質(zhì)量的指標(biāo)性成分[2]。本實驗以羅漢果甜苷V的提取率為評價依據(jù)。

超高壓技術(shù)應(yīng)用于中藥有效成分提取時，是利用100MPa以上的流體靜壓力作用于溶劑和中藥的混合液，保壓一段時間（幾分鐘）后卸壓，然后進行分離純化。超高壓提取是在一個密閉的環(huán)境中進行的，沒有溶劑的揮發(fā)，因此該技術(shù)更加符合綠色環(huán)保的要求。

本文采用超高壓技術(shù)，通過單因素實驗結(jié)合正交試驗優(yōu)化了羅漢果甜苷V的提取工藝，以期為開發(fā)羅漢果皂苷類活性成分提供理論依據(jù)。

材料與方法

材料與試劑。羅漢果；羅漢果甜苷標(biāo)準(zhǔn)品；甲醇、乙醇（分析純）；乙腈為（色譜純）；水為蒸餾水。

主要儀器與設(shè)備。SB25-12D型超聲波提取儀；HPP.L3型超高壓生物提取設(shè)備；島津高效液相色譜儀LC-15C。

實驗方法。

（1）樣品的預(yù)處理

將羅漢果干燥后粉碎，過40目篩得到樣品。

（2）提取羅漢果甜苷V的方法

精確稱量用同一批次的樣品0.5g，分別按照1：15的料液比加入純凈水，用不同的方法提取羅漢果甜苷。所有實驗重復(fù)三次，取平均值。提取方法：

①超高壓提取（UPE）：提取條件的確定見第二部分[4]；

②超聲提取（UAE）：30KHz下，分別提取10min和30min；

③加熱回流提取（HRE）：100℃下分別水浴提取10min、30min和60min。

（3）色譜條件

提取液用0.45m微濾膜過濾，再用乙醇定容到50ml。檢測條件為：Hypersil ODS C18色譜柱（4.0 mm×150 mm， 5m）；柱溫30℃；檢測波長203nm；進樣量10μL；流動相A為乙腈，B為水；流速1mL·min-1；梯度洗脫程序為：0-15min，23%乙腈；15-16min，23%-100%乙腈；16-25min，100%-100%乙腈。

（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精確配制0.59mg/mL的羅漢果甜苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進樣10μL、16μL、28μL、35μL、40μL、60μL，測得標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC圖譜。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=496.3+38.92X，R2=0.9999。

結(jié)果與討論

單因素實驗。

（1）提取溶劑對羅漢果甜苷V提取率的影響

羅漢果甜苷的提取溶劑采用純甲醇、純乙醇、80%甲醇、80%乙醇和純凈水，選取料液比1：15（g/ml），200MPa下浸提2min，結(jié)果如圖1所示。

從圖1可知，純凈水提取率最高，且無毒、無不良?xì)馕丁Ｋ赃x擇純凈水作為提取溶劑。

（2）浸泡時間對羅漢果甜苷V提取率的影響

提取溶劑為純凈水，選取料液比1：15（g/ml），分別浸泡0、2h、4h、7h和15h，200MPa下提取2min，結(jié)果如圖2所示。

由圖2可得，純凈水可以在較短的時間內(nèi)溶解目標(biāo)化合物，不需要浸泡。

（3）提取壓力的影響

在其它條件相同的情況下，分別在壓力100、200、300、400、500Mpa下浸提2min，結(jié)果如圖3所示。

壓力多方面影響了羅漢果甜苷V得率。由圖3可以看出，200Mpa之前提取率隨著壓力的升高而提高，超過200MPa后提取率反而有所下降。因此，選取200Mpa作為提取壓力。

（4）保壓時間對羅漢果甜苷V提取率的影響

在其它條件相同的情況下，200Mpa下分別浸提1、2、3、4、5min，提取結(jié)果見圖4。

由圖4可見，保壓時間3min最適宜。

（5）不同料液比對羅漢果甜苷V提取率的影響

在其它條件相同的情況下，選取料液比分別為1：5、1：10、1：20、1：30、1：40（g/mL），浸提3min，結(jié)果如圖5。

由圖5可得，選取料液比1：10左右比較適宜。

正交試驗優(yōu)化。

對以上單因素實驗取得的結(jié)果，用正交試驗進一步優(yōu)化。見表1、表2。

由表2可知，影響羅漢果甜苷V提取率最大的因素是料液比，其次是壓力。由極差分析結(jié)果得到的最佳提取工藝為：料液比1：10，壓力300MPa，保壓時間3min，提取率為52.269mg/g。

對比其他提取工藝。對比了UPE、UAE和HRE的提取技術(shù)，結(jié)果如表3所示。

由表可知，超高壓的提取時間僅為3min，且提取率遠(yuǎn)高于超聲和加熱回流的提取率。所以，超高壓提取羅漢果中的羅漢果甜苷Ⅴ是一種低耗高效的提取工藝。

本文對羅漢果甜苷進行了超高壓提取。與傳統(tǒng)方法相比，超高壓提取能耗低、提取率高，且后續(xù)操作簡便易行。常溫提取能保持羅漢果甜苷的藥理活性。而且超高壓提取技術(shù)環(huán)境友好，是對羅漢果甜苷進行提取可優(yōu)先考慮的方法。

作者簡介：

王迪（1989-），女，山東聊城人，碩士研究生，聊城大學(xué)東昌學(xué)院，助教，研究方向：食品質(zhì)量與安全。