瑯玡榆組培快繁技術(shù)

馬贊留，蔡紅海，崔成華，錢(qián)海云

（江蘇世陽(yáng)生物科技有限公司，江蘇南通 226364）

瑯玡榆組培快繁技術(shù)

馬贊留，蔡紅海，崔成華，錢(qián)海云

（江蘇世陽(yáng)生物科技有限公司，江蘇南通 226364）

本文采用瑯玡榆的腋芽為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化、生根和移栽過(guò)程的研究，建立起了瑯玡榆無(wú)性植株再生的快繁體系。

瑯玡榆；組培；快繁

瑯玡榆，榆科榆屬，落葉喬木，陽(yáng)性樹(shù)種，樹(shù)皮淡褐灰色，裂成薄片脫落。小枝幼時(shí)密被柔毛，后變無(wú)毛，灰色或暗灰色，無(wú)木栓翅。冬芽卵圓形，芽鱗被毛[1]。葉互生，寬倒卵形、長(zhǎng)圓狀倒卵形或長(zhǎng)圓狀橢圓形，長(zhǎng)6～18厘米，寬3～10厘米，先端短尾尖或尾狀漸尖，基部偏斜，楔形至心形，邊緣具重鋸齒，上面密被短硬毛，粗糙，下面密被柔毛，側(cè)脈15～21對(duì)。葉柄長(zhǎng)1～1．5厘米，密被長(zhǎng)柔毛。春季先葉開(kāi)花，在生枝葉腋排成簇狀聚傘花序。翅果窄倒卵形、長(zhǎng)圓狀倒卵形或?qū)挼孤研危L(zhǎng)1．5～2．5厘米，寬1～1．7厘米，兩面及邊緣疏被或密被柔毛，果核位于翅果的中上部，上端接近缺口，果梗長(zhǎng)12毫米，被短毛。稍耐蔭、耐旱亦耐濕，耐鹽堿，適合各類土壤生長(zhǎng)[2]。本文對(duì)瑯玡榆的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)進(jìn)行研究，以期縮短瑯玡榆的育種周期，加快對(duì)該樹(shù)種的研究進(jìn)程，從而更多地為生產(chǎn)提供技術(shù)支持[3,4]。

1 材料與方法

1.1 外植體的采集及處理

3月中旬從室外采集瑯玡榆的腋芽，在流水下沖洗30分鐘，然后在超凈工作臺(tái)上用75%酒精消毒30秒，用無(wú)菌水沖洗1次，放入1%次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，無(wú)菌水沖洗5次，待用。

1.2 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度在（25±2）℃的恒溫條件下，光照條件一般是2000 lx，光照每日12～16小時(shí)。

1.3 愈傷組織的誘導(dǎo)

在無(wú)菌條件下，將消毒的外植體分別接種不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上（見(jiàn)表1），誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生。每處理10瓶，每瓶5個(gè)葉片，重復(fù)3次。26天后，調(diào)查出愈率和愈傷組織長(zhǎng)勢(shì)。出愈率=（形成愈傷組織的葉片數(shù)/接種葉片數(shù)）×100%。

1.4 愈傷組織分化培養(yǎng)

將培養(yǎng)26天，生長(zhǎng)良好的愈傷組織切成邊長(zhǎng)約為0．5厘米的正方體小塊，接種于不同的分化培養(yǎng)基（見(jiàn)表2），誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生不定芽。每處理10瓶，每瓶3個(gè)愈傷塊，重復(fù)3次。45天后調(diào)查平均出芽數(shù)和再生頻率。愈傷組織上產(chǎn)生的不定芽生長(zhǎng)到一定高度時(shí)，可直接接種于增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

平均出芽數(shù)=分化出的不定芽總數(shù)/接種愈傷塊數(shù)

再生頻率=（產(chǎn)生不定芽的愈傷塊數(shù)/接種愈傷塊數(shù)）× 100%

1.5 誘導(dǎo)生根培養(yǎng)

生根培養(yǎng)基采用1/2 MS基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的6－BA、IBA及NAA誘導(dǎo)生根，具體處理見(jiàn)表3。每處理10瓶，每瓶5個(gè)嫩梢，重復(fù)3次。30天后調(diào)查統(tǒng)計(jì)生根率、平均生根條數(shù)、平均根長(zhǎng)及平均莖高。

生根率=（不定根發(fā)生的莖段數(shù)/接種莖段數(shù)）×100%

平均生根條數(shù)=生根條數(shù)/接種莖段數(shù)

平均根長(zhǎng)=根長(zhǎng)總合/生根總條數(shù)

平均莖高=芽苗總高度/芽苗總數(shù)

1.6 煉苗與移栽

當(dāng)根系得到基本發(fā)育后，將培養(yǎng)瓶移到室外進(jìn)行閉瓶煉苗7～10天左右，遮蔭度為50%～70%。然后在自然光下進(jìn)行開(kāi)瓶煉苗2～3天。開(kāi)瓶煉苗可以分階段進(jìn)行，即首先松蓋1～2天，然后部分開(kāi)蓋1～2天，最后完全揭蓋。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)瑯玡榆愈傷組織誘導(dǎo)的影響

從不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織結(jié)果（見(jiàn)表4）。9個(gè)處理中瑯玡榆的腋芽都能產(chǎn)生愈傷組織。處理A1～A3中產(chǎn)生的愈傷組織白色柔軟，培養(yǎng)15天后逐漸變?yōu)楹稚瑳](méi)有再

表1 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理

表2 愈傷分化的不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理

表3 生根的不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理

表4 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)瑯玡榆愈傷組織誘導(dǎo)的影響

生能力。當(dāng)6-BA為3 mg/L時(shí)，愈傷組織多為綠色，長(zhǎng)勢(shì)良好，宜產(chǎn)生不定芽，且NAA為0．3mg/L時(shí)出愈率最高為91．3%。當(dāng)6－BA為4mg/L時(shí)，愈傷組織長(zhǎng)勢(shì)下降且出愈率下降。

2.2 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)瑯玡榆愈傷組織分化的影響

在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的TDZ、NAA對(duì)瑯玡榆的愈傷進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)45天后進(jìn)行調(diào)查。由表5可知，在TDZ濃度為2 mg/L，死亡率在69%以上，再生頻率只有7%以下，基本上不產(chǎn)生不定芽。在TDZ濃度為0．5mg/L，瑯玡榆的愈傷分化死亡率有所上升在46%以下，再生頻率在17%以上，但不定芽的量不多。當(dāng)TDZ濃度為1．5mg/L，NAA濃度為0．4mg/L，分化的不定芽最多，死亡率達(dá)3．8%，再生頻率為62．6%。

表5 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)瑯玡榆愈傷組織分化的影響

表6 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)瑯玡榆生根的影響

2.3 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)瑯玡榆生根的影響

接種數(shù)天后逐漸從基部產(chǎn)生數(shù)條不定根，培養(yǎng)30天后調(diào)查其生根狀況。結(jié)果表明（見(jiàn)表6）：當(dāng)IBA濃度在0．05mg/L，生根率最高在80%以上，其中與IAA 0．004mg/L和NAA 4mg/L組合，生根效果最好，生根率在100%，平均根長(zhǎng)達(dá)0．8厘米，平均生根數(shù)為8．5，平均莖高為3．2厘米。隨著IBA濃度的加大，在0．1mg/L濃度時(shí)，生根率下降20%以下，生根效果也明顯下降。

2.4 移栽

移栽之前應(yīng)先閉瓶煉苗，再開(kāi)瓶煉苗，使其逐步適應(yīng)外界環(huán)境。移栽基質(zhì)選用砂和蛭石質(zhì)量比1：2。溫度保持在25℃左右。約25天后瑯玡榆移栽苗的成活率在92%。

3 結(jié)論

瑯玡榆最優(yōu)化的組培成苗的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配方是：愈傷組織其誘導(dǎo)配方是A6:MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0．3mg/L；愈傷組織分化配方是B5:MS+TDZ 1．5mg/L+NAA 0．4mg/L；生根配方是C4: 1/2MS+6-BA 0．05 mg/L+IBA 0．004 mg/L+NAA 4．0mg/L。

[1]鄭萬(wàn)鈞主編．中國(guó)樹(shù)木志:第3卷[M]．北京:中國(guó)林業(yè)出版社, 1997．54-55．

[2]傅立國(guó)．中國(guó)榆屬的研究[J]．東北林學(xué)院學(xué)報(bào),1980(03): 1-40．

[3]朱大保．國(guó)外楊樹(shù)組培微繁技術(shù)的進(jìn)展[J]．北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1990,12(01):84-91．

[4]陳正華．木本植物組織培養(yǎng)及其應(yīng)用[M]．北京:高等教育出版社,1986．

南通市重大科技創(chuàng)新專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目（HL2014003）

S788

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.15.016

馬贊留，本科學(xué)歷，工程師，研究方向：園藝研究。