熒光定性PCR法檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學指標的相關性

李春芳

（河北省廊坊市中心血站，河北 廊坊 065000）

熒光定性PCR法檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學指標的相關性

李春芳

（河北省廊坊市中心血站，河北 廊坊 065000）

目的 針對ELISA法乙肝免疫學指標與熒光定性PCR法檢測HBV-DNA間相關性進行分析。方法 以我站在2016年1月-2017年3月期間所檢測的168份HBsAg反應性的獻血為觀察對象，均給予HBV-DNA以及ELISA法乙肝免疫學指標檢測，針對檢測結果進行分析。結果 本組獻血者中50例在ELISE檢測中為大三陽，其HBV-DNA陽性率連同Ct值與小三陽組存在有顯著差異，且HbeAg（+）患者檢測陽性率以Ct值平同樣較HbeAg（-）高（P＜0.05），差異具備統計學意義。結論 乙肝免疫學檢測結果與HBV-DNA檢測情況存在有一定關聯，臨床可借此對乙肝患者進行診斷。

ELISA法；乙肝免疫學指標；HBV-DNA

0 引言

乙肝屬于危害性較大一種傳染病，在我國存在有極高的病發率，在一定程度上影響著居民健康。為實現對該癥病發率的有效控制，乙肝檢測工作就顯得格外重要。當前，臨床主要依據乙肝免疫學指標進行篩查與診斷。就檢測方法而言，以ELISA法與熒光定性PCR法存在有極高的使用率[1]。本次我站就針對上述兩種檢測方式與乙肝免疫學指標間的聯系情況進行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我站在2016年1月-2017年3月期間所檢測的168份HBsAg反應性的獻血樣本為觀察對象，均給予HBV-DNA以及ELISA法乙肝免疫學指標檢測。本組患者中存在有男性100例，女性68例，年齡于15-55歲間，均值為（46.45±1.45）。所有患者HbsAg均表現為陽性。結合檢測結果，將本組患者劃分為大三陽組50例，小三陽組30例，A組 [AbsAg（+）、HbcAg（+）]40例，B組 [AbsAg（+）、HbcAg（-）]20例，以及C組[AbsAg（+）、HbcAb（+）]28例。均接受ELISA法與熒光定性PCR法檢測。年齡、性別組成等方面對比，5組患者無顯著差異（P＞0.05）無統計學意義。

1.2 方法

ELISA法檢測中所使用設備為全自動酶免分析儀（深圳愛康公司生產，型號為AE280，校驗周期為1年），檢測中所用試劑，一檢由廈門英科新創科技有限公司生產，弱陽性質控品濃度為0.5 IU/ ml，二檢試劑由北京萬泰生物藥業有限公司生產，弱陽性質控品濃度為0.2 IU/ml。以上試劑為ELISA法進行血清學檢測用試劑，采用兩個不同廠家的試劑進行兩次檢測，兩次檢測均合格，此項結果合格，雙試劑反應性直接判定為該項目不合格；單試劑反應性時需進行雙孔復試，任意一孔反應性則判斷為不合格；不合格樣本直接淘汰，不再進行NAT檢測，合格樣本進行NAT檢測；NAT檢測采用定性實時熒光PCR法，采用8混模式，混檢陽性，下一工作日進行拆分檢測（單檢）。

熒光定性PCR法檢測中，所用設備為，科華核酸檢測系統：Hamiltion Star（樣本處理系統）+ABI 7500（擴增儀）校驗周期為半年。所用試劑由上海科華生物工程股份有限公司生產，質控品濃度為HBV DNA200IU/ml、HCV RNA 2000IU/ ml、HIV RNA 2000 IU/ml。各項操作均嚴格按照流程進行。

1.3 統計學方法

本次研究中各類數據均按照SPSS19.0進行處理，采用%對計數數據表示，以χ2檢測，而計量數據則以表示，以t檢測，若（P＜0.05）則表明數據間存在有顯著差異，具備統計學意義。

2 結果

2.1 大三陽與小三陽組HBV-DNA對比

結合檢測可知，大三陽組獻血組檢測陽性率為94.00 %（47/50），而小三陽組為53.33 %（16/30），且大三陽組Ct值為（37.01±0.05），而小三陽組為（32.14±0.25），兩項對比（P＜0.05）具備統計學意義，如表1、2所示。

表1 兩組患者陽性率對比[n(%)]

表2 兩組患者Ct值對比

表2 兩組患者Ct值對比

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2.2 其他組檢測陽性率與HBV-DNA對比

結合檢測可知，A組、B組與C組檢測陽性率與HBV-DNA對比存在有顯著差異（P＜0.05），差異具備統計學意義，詳見下表3。

表3 A、B、C三組患者檢測情況對比

3 討論

乙型肝炎為世界所關注的病癥，存在有較強的傳染性，且病發率較高，將直接使得患者病發肝硬化以及肝癌等病癥的幾率增加。結合臨床實際可知，我國一直屬于乙肝高發國家，乙肝攜帶率高達10 %以上，在很大程度上威脅著居民健康。因此，采用高效、安全的方式對乙肝進行檢測，幫助患者盡早確診，對于延緩病癥發展以及傳播率均有著重要意義[2]。

當前，臨床用于乙肝的檢測方式較多，常見有化學發光法、實時熒光定性PCR法以及酶聯免疫法（ELISA）等。其中ELISA因存在有操作簡單，出結果快以及成本較低、具備極高的靈敏度等優勢迅速在臨床得到推廣。但該檢測方式僅僅能達到定性檢測的效果，能為HBV感染情況提供有效診斷，而無法實現對患者體內病毒復制情況及時、動態反應的效果。而實時熒光定性PCR法，則能有效對HBV-DNA在患者體內的復制情況加以測定，以了解乙肝病毒在患者體內的復制情況，因其操作較為簡單，在臨床存在有極高的使用率。而該檢測方式確無法對非復制狀態感染進行檢測。基于上述兩方面因素，臨床將上述兩種方案聯合的方式運用于乙肝患者的檢測中[3-4]。

結合本次研究可知，大三陽獻血組在PCR檢測中存在有極高的準確率，且Ct值較高，可見該類患者體內乙肝病毒極為活躍，存在有較強的傳染性。同時也能證明ABsAg（+）、HBcAg（+）等可準確對乙肝病毒感染、傳染情況加以反應。且通過將A、B、C組對比可知，HbeAg的在乙肝患者體內存在和HBV-DNA存在有極強的聯系。早在凌利芬等[5]報道中已經指出，臨床可以將HbeAg作為乙肝病毒在患者體內進行復制的主要依據，若該指標轉為陰性，則表明患者HBV-DNA復制水平得到顯著下降，能為臨床治療工作以及病癥監測提供有效指導。同時，上述三組患者對比也可以發現，若HbeAg表現為陽性，則患者體內乙肝病毒復制量減少，其傳染性也相對減弱。

結合上述研究可以發現，采用熒光定性PCR法與ELISA法對乙肝患者進行檢測，能更加準確的對患者體內乙肝病毒復制情況進行定性進行表示，能有效克服上述兩種檢測方式在單獨使用中的局限性，能幫助乙肝患者盡早得到確診。

[1] 羅燕春,李勇,鄭惠蘭,等.熒光定量PCR檢測主要性病病原體的臨床應用[J].海南醫學,2006,17(9):148-149.

[2] 何昕,姜惠民,張艷,等.熒光定量pcr檢測高危型hpv的方法及其試劑盒:中國,CN101886137A[P].2010.

[3] 劉揚,吳孟超,陳漢,等.巢式RT-PCR定性檢測肝癌、癌旁組織及正常肝組織內AFPmRNA表達[J].中國腫瘤臨床,2000,27(9):695-696.

[4] 石伍華,王海清,許艾明,等.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA方法測定乙肝五項指標相關性分析[J].臨床和實驗醫學雜志,2009,8(01):87-88.

[5] 凌利芬,陸學東,吳正林,等.乙肝病毒大蛋白與HBV-DNA相關性研究及在不同性別、年齡群體中的差異分析[J].現代檢驗醫學雜志,2008,23(04):30-32.

Correlation between HBV-DNA and Immunological Indexes of Hepatitis B by ELISA Method by Fluorescence Qualitative PCR

LI Chun-fang

(The Central Blood Station of Langfang, Langfang,Hebei, 065000, China)

Objective To analyze the correlation between ELISA immunology index and fluorescence qualitative PCR method for detecting HBV-DNA. Methods In our station detected during the period of January 2016 to March 2017 of 168 copies of the HBsAg reaction of blood as the object of observation, HBV-DNA and ELISA were given the detection method of hepatitis B immune indicators, according to the analysis of test results. Results This group of blood donors in 50 cases in ELISE detection for HBeAg positive rate of HBV-DNA, which together with small Sanyang group there were significant differences in the values of Ct and HbeAg (+) patients with the positive rate detected by Ct value of flat than HbeAg (-) is high (P＜0.05) , the difference has statistical significance. Conclusion The immunological test results of hepatitis B are related to the detection of HBV-DNA, which can be used to diagnose the hepatitis B patients.

ELISA method; Hepatitis B immunology index; HBV-DNA

10.19335/j.cnki.2096-1219.2017.08.58