禽Ⅰ群腺病毒血清4型感染的診斷與防治

孫德君 柴華 馮艷男 楊朋欣 秦立鑫/哈藥集團生物疫苗有限公司

禽Ⅰ群腺病毒血清4型感染的診斷與防治

孫德君 柴華 馮艷男 楊朋欣 秦立鑫/哈藥集團生物疫苗有限公司

禽腺病毒分為3群。禽腺病毒Ⅰ群來自雞、火雞、鵝等禽類，具有共同的群特異抗原。Ⅱ群包括火雞出血性腸炎、大理石脾病和雞脾腫大癥的病毒，這些病毒有可與Ⅰ群相區別的群特異抗原。Ⅲ群是與產蛋下降綜合征有關的病毒以及來自鴨的相關病毒，具有與Ⅰ群部分相同的共同抗原。

與禽腺病毒Ⅱ群、Ⅲ群不同，禽腺病毒Ⅰ群作為病原體的作用尚未完全明確，作為自然感染的原發性病原體仍有爭議。一般認為它可引起包涵體肝炎（IBH）。張澤紀等（1986）報道從廣東3個大型雞場進口AA雞父母代雞群采取203份血樣用瓊脂擴散試驗檢查結果，包涵體肝炎陽性率達7．5%～81%。越來越多的事實證明它在傳染性法氏囊病和傳染性貧血中可引起繼發性病原的作用。

雞包涵體肝炎(Inclusion Body Hepatitis， IBH)是由Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus Ⅰ，FAV-Ⅰ)引起的一種急性傳染病，該病以侵害肝臟為特征，可在肝細胞中形成嗜酸性或嗜堿性包涵體。其臨床癥狀表現為個別雞突然死亡，死亡雞多體況良好，發病雞表現為食欲不振，羽毛粗亂，嗜睡，嚴重貧血，雞冠褪色，出現一過性水樣便(卡爾尼克等， 1991)，一般在 48 h 內死亡或康復。 有研究表明，FAV-Ⅰ為機體常在的條件性致病病原，雞馬立克氏?。∕D）、傳染性法氏囊?。↖BD）和雞傳染性貧血（CIA）等免疫抑制病能夠明顯增加 IBH 的發病率，增加該病的危害。尤其是傳染性法氏囊?。↖BD），其引起的免疫抑制，是IBH 發生的一大誘因，因此控制傳染性法氏囊病的發生是預防 IBH的一種重要手段。該病呈急性經過，死亡率高，給禽業生產帶來了巨大的經濟損失。

一、發病情況

該雞場飼養了2 000多只30日齡肉雞，臨床可見呼吸困難，雞群中出現零星雞只死亡。病雞萎頓、蹲伏、羽毛蓬松，精神萎靡、雞冠和面部皮膚蒼白、排白綠色稀便。剖檢病死雞，主要病理變化為：可見大量心包積液、肝色淺質脆、腫大充血。

圖1 病死雞心包積液、肝色淺質脆、腫大充血

二、病理剖檢病變

IBH 特征性病理剖檢變化表現在肝臟和骨髓。肝臟腫大，邊緣鈍圓，表面有不同程度的出血點或條索狀出血斑，質脆，褪色，呈淡黃色，膽囊充盈，內有大量膽汁淤積。偶爾可見肝臟有大小不一的壞死灶，并伴隨血細胞浸潤，使肝臟觸之有凹凸不平的感覺。骨髓呈灰白色或黃色膠凍樣病變、體積變小，法氏囊萎縮，內膜有出血點或出血斑，且切面無光澤。胸腺點狀出血、萎縮、且顏色變深。脾臟體積變化不大，偶見個別病例脾臟腫大、出血。腎臟呈灰白色、腫大，表面有癖斑和疲點。肺充血、水腫，除此之外，可見大腿部肌肉、胸肌以及皮下組織有明顯出血，脂肪黃染。

三、病理組織學變化

病理組織學特征性變化在肝臟，表現為肝細胞脂肪變性，肝臟實質中可見由多個肝細胞形成的形狀不規則的壞死灶，有時可見小葉中心部位彌漫性細胞腫脹和壞死，伴發空泡變性和細胞膜破裂，肝細胞萎縮核固縮等變化。心臟病理變化不明顯，僅見心肌纖維中間有大量的淋巴細胞和血細胞浸潤。腎臟間質血細胞浸潤，相鄰腎小管上皮細胞出現壞死，有的腎小管上皮細胞出現脂肪變性并大量壞死，偶爾可見水泡變性。脾臟大量早幼粒細胞浸潤，白髓中央動脈周圍淋巴細胞散在壞死灶，鞘動脈四周網狀細胞明顯增生。 法氏囊淋巴小結內淋巴細胞數量減少，稀疏，偶爾會出現網狀細胞的輕度增生。肺間質輕度水腫、有少量的紅細胞侵潤。

圖2 病死雞的心、肝、法氏囊、腎、脾、肺病理切片

四、實驗室診斷

1.引物的設計合成。根據 GenBank 中已發表的Ⅰ群禽腺病毒 Hexon 基因核酸序列設計完成兩對引物，預計擴增片段為500 bp。

上游引物為P1： 5'CGAGGTCTATACCAACACGAGCA-3'；下游引物為 P2： 5'-CGGCGCAGG TTAATGAAGTTATC-3'。引物由吉林庫美生物工程技術有限公司合成。

2.病毒分離與鑒定。取疑似雞包涵體肝炎病雞的肝臟剪碎，按 1∶5（W/V）比例加入滅菌PBS進行勻漿處理，將勻漿液反復凍融 3次，4 000 r/min離心30 min，取上清液備用。上清液中加雙抗（青霉素、鏈霉素）各3 000 U/ml，置4℃過夜，以8 000 r/min離心10 min，取制備的上清液以卵黃囊途徑接種5日齡SPF雞胚，0．2 ml/胚，于 37℃孵育，每日觀察2次，收獲24～144 h內死亡的雞胚尿囊液，收集死胚尿囊液，進行HA試驗及PCR鑒定。

3.病毒DNA的提取及PCR擴增。病毒液采用TaKaRa MiniBEST Viral RNA DNA Extraction Kit Ver．5．0 提取試劑盒，按說明書進行病毒DNA的提取。PCR反應采用25 ul體系： 滅菌雙蒸水17 μl、10×PCR Buffer 2．5 μl、DNA 溶 液 2．0 μl、dNTP（2．5 mmol/μl）2 μl、上下游引物 1μl、Taq 酶 0．5 μl。PCR擴增程序為： 反應條件：95℃預變性 5 min，95℃變性50s，55℃退火45 s，72℃延伸50 s，35個循環，72℃延伸 10 min。 PCR反應完畢后，取6 μl PCR產物，1．0%瓊脂糖凝膠進行電泳，于紫外燈下觀察電泳結果。電泳結果顯示，待檢樣本中可擴增出1條約500 bp的目的條帶(圖1)，而陰性對照未出現條帶。而用禽流感病毒、新城疫病毒和雞傳染性法氏囊病病毒的引物，進行PCR檢測，結果均為陰性。再結合發病情況和剖檢變化，診斷為禽腺病毒4型感染。

圖1 禽腺病毒4型Hexon基因的PCR產物電泳結果

四、防治措施

1．由于雞傳染性法氏囊病毒(IBDV)和雞傳染性貧血因子(CAA)可能增強腺病毒的致病性，首先應控制或清除這兩種病毒。腺病毒的抵抗力較強，此種病毒極易經雞胚傳至另一雞群，因此防制工作必須從原種禽場做起。SPF雞群的經驗證明水平傳播也是一個重要問題，要保持商品雞群沒有腺病毒感染是特別困難的。這就增加了其防控難度。因此，包涵體肝炎的預防關鍵還要從飼養管理和生物安全方面考慮。加強平時的飼養管理，盡量減少應激，避免從發病雞場引進雛雞等都能起到一定作用。保證雛雞具有較高的 IBD母源抗體水平，防止發生傳染性法氏囊病，對包涵體肝炎的預防也很重要。

2．Ⅰ群禽腺病毒具有群特異性抗原，而且有證據表明引起雞包涵體肝炎的病毒中以某些特定血清型為主，這些都提示研制疫苗存在很大的可行性。有些養殖場以發病雞的組織經滅活后制成組織滅活苗，對種雞進行免疫，可使后代獲得較高的母源抗體而得到保護。疑似感染 IBH 的雛雞，要盡快飼喂VC 和VK 以及對肝臟無損害的廣譜抗生素，可使損失降低到最低程度。由于IBH 主要侵害肝臟，因此切忌用對肝臟有損傷的藥物，否則將加大死亡率。

（略）