新疆地區維吾爾族、漢族非小細胞肺癌患者胞苷脫氨酶基因多態性對比分析

王艷娜，費晶，程艷芳，孟玲利，王慧，鞏平

(石河子大學醫學院第一附屬醫院，新疆石河子832000)

·論著·

新疆地區維吾爾族、漢族非小細胞肺癌患者胞苷脫氨酶基因多態性對比分析

王艷娜，費晶，程艷芳，孟玲利，王慧，鞏平

(石河子大學醫學院第一附屬醫院，新疆石河子832000)

目的 分析新疆地區維吾爾族、漢族非小細胞肺癌(NSCLC)患者胞苷脫氨酶(CDA)基因多態性。方法 收集晚期NSCLC初治患者120例，其中維吾爾族53例(維族組)、漢族67例(漢族組)，采用直接測序的方法檢測兩組CDA A79C、G208A基因多態性。結果 兩組CDA A79C、G208A基因型頻率均符合Hardy-Weinberg平衡(P均>0.05)。維族組A79C AA、AC、CC基因型頻率及A、C等位基因頻率分別為75.4%、18.9%、5.7%、84.9%、5.1%，漢族組分別為52.2%、29.9%、17.9%、67.2%、32.8%，兩組比較，P均<0.05；維族組G208A GG、GA基因型頻率和G、A等位基因頻率分別為94.3%、5.7%、97.2%、2.8%，漢族組分別為77.6%、22.4%、88.8%、11.2%，兩組比較，P均<0.05。結論 新疆地區維吾爾族、漢族CDA A79C、G208A這兩個位點的基因多態性存在種族差異性。

胞苷脫氨酶；胞苷脫氨酶基因；非小細胞肺癌；基因多態性

吉西他濱是一種干擾影響細胞復制的二氟核苷類抗代謝物抗癌藥，與順鉑聯合方案已成為局部晚期和轉移性非小細胞肺癌(NSCLC)的標準抗癌一線治療方案[1,2]。臨床觀察發現，同一病理類型、同一分期的NSCLC患者，在使用含吉西他濱方案治療后療效差異很大，造成這種差異的原因可能與患者自身獨特的遺傳背景有關。單核苷酸多態性(SNP)是人類可遺傳變異中最常見的一種，廣泛且穩定的存在于人類基因組中。SNP及其所調控的基因表達是腫瘤對化療藥物產生耐藥并影響藥效的重要因素，而且存在種族差別。胞苷脫氨酶(CDA)是吉西他濱代謝失活的關鍵酶，其通過脫氨基方式使吉西他濱代謝失活[3]。CDA酶活性的基因改變在吉西他濱代謝中有重要作用[4]，它編碼3個單核苷酸[5]，其中A79C與G208A遺傳基因多態性可影響CDA酶活性。本研究對新疆地區維吾爾族、漢族NSCLC患者外周血進行基因型檢測，觀察兩族患者CDA A79C、G208A位點基因型、等位基因是否有民族差異性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年8月～2016年4月石河子大學醫學院第一附屬醫院及喀什地區第一人民醫院收治的晚期NSCLC初治患者120例，男55例，女65例；年齡33～77歲，中位年齡63歲；維吾爾族53例(維族組)，漢族67例(漢族組)。病理類型：鱗癌69例，腺癌51例；臨床分期：ⅢB期60例，Ⅳ期60例；ECOG評分：0～1分84例，2分36例。納入標準：所有病例均經病理確診，且均來自新疆地區維吾爾族、漢族常住人群，相互之間無血緣關系及異族通婚史。排除標準：病理診斷不清，嚴重感染，多器官功能受損，多處以上轉移病灶者。

1.2 CDA基因多態性檢測方法 所有入選對象均采集外周血3 mL，置于EDTA管中，-80 ℃冰箱保存。根據北京天根生物科技有限公司提供的全血基因組DNA試劑盒提取DNA，查閱大量文獻后，根據參考文獻及軟件Primer 5.0設計引物，由上海生工生物工程有限公司合成并純化。A79C、G2081引物及擴增片段長度如下： A79C：5′-GTAGCTTCCCCTT-CCAGTAGCGTG-3′，5′-CTGCGCCTCTTCCTGTACAT-CT-3′，543 bp ； G208A：5′-GACAGTGCCAGGTTCTTGGG-3′，5′-CTGGCACATAGGAAGTCCAC-3′，300 bp。A79C位點PCR擴增條件：95 ℃預變性5 min，94 ℃變性10 s，60 ℃退火10 s，72 ℃延伸30 s，共35個循環，72 ℃延伸5 min，4 ℃永久保存；G2081A位點PCR擴增條件：95 ℃預變性5 min，94 ℃變性10 s，70 ℃ 退火10 s，72 ℃延伸30 s，共35個循環，72 ℃延伸5 min，4 ℃永久保存。PCR產物在2%瓊脂糖凝膠電泳后經紫外凝膠成像系統拍照。將上述瓊脂糖凝膠電泳有陽性結果的剩余PCR產物送北京博邁德基因技術有限公司進行測序。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。用Hardy-Weinberg平衡檢驗方法進行基因型分布遺傳平衡吻合度檢驗，兩民族人群各基因型頻率及等位基因頻率采用χ2檢驗進行分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基因測序結果 送檢120例NSCLC患者中，A79C基因出現野生純合基因型(AA)、雜合基因型(AC)和突變純合基因型(CC)，G208A基因出現野生純合基因型(GG)、雜合基因型(GA)，未出現突變純合基因型(AA)，見圖1～圖5。

圖1 A79C基因野生純合基因型

圖2 A79C基因雜合突變基因型

圖3 A79C基因純合突變基因型

圖4 G208A基因野生純合基因型

圖5 G208A基因雜合突變基因型

2.2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗結果 納入人群符合Hardy-Weinberg平衡定律(P均>0.05)，表明本實驗所選取人群的基因頻率可以代表新疆地區維吾爾族、漢族人群的基因頻率。

2.3 兩組A79C基因型及等位基因分布比較 結果見表1。

2.4 兩組G208A基因型及等位基因分布比較 結果見表2。

表1 兩組A79C基因型及等位基因分布比較

表2 兩組G208A基因型及等位基因分布比較

3 討論

吉西他濱進入體內后，其在血漿中90%的代謝產物可由CDA通過脫氨基方式降解為無活性產物，進而排出體外，因此CDA酶是吉西他濱代謝的關鍵酶，它位于人類第1號染色體p35～p36.2上，全長約31 kb[6]。關于CDA基因與吉西他濱相關性研究主要集中在CDA基因多態性上，CDA基因的多態性通過影響CDA酶的表達和結構影響CDA活性，從而影響吉西他濱化療效果[7]。CDA酶活性下降可影響吉西他濱的化療療效，有研究[8]表明A79C基因突變型細胞可使CDA酶活性下降。意大利的研究組通過一系列研究發現，A79C中的A等位基因并非C等位基因，可造成脫氨酶活性下降[9]；同樣有研究[10,11]表明，攜帶野生型基因(AA)患者的酶活性較攜帶突變型基因(AC、CC)的患者低。這一結論在Tibaldi等[12]的研究中也得到證實。

在不同國家和地區，不同人種的A79C、G208A等位基因的突變率也有差異。一項來自多個國家支持的藥物基因組學研究[13]報道，入組人群均為健康志愿者，在A79C基因位點上，韓國人突變基因型頻率為28.0%、突變等位基因頻率為15.3%，日本人分別為37.4%、20.4%，華裔美國人分別為29.0%、15.5%，美國白種人分別為55.3%、32.7%，非裔美國人分別為16.0%、8.7%；在G208A基因位點上，韓國人突變基因型頻率為1.0%、突變等位基因頻率為0.5%，日本人分別為4.5%、2.2%，華裔美國人、美國白種人、非裔美國人均未出現突變基因，且所有研究人群均未出現純合突變基因型。Carpi等[14]對納入的263例樣本進行研究，發現突變等位基因頻率為39.5%；Parmar等[15]的研究顯示，突變等位基因頻率為35%。國內徐佳林等納入152病例，測得A79C基因位點的突變率為12%，G208A基因位點的突變率為1%。從以上研究可知，不同種族之間基因突變頻率不同，G208A基因突變率較低，且僅存在與亞洲人群中。

本實驗納入54例維吾爾族和66例漢族NSCLC人群，對其CDA A79C、G208A基因多態性進行比較分析，比較前已對這兩個位點進行Hardy-Weinberg檢驗，結果均符合Hardy-Weinberg平衡定律，提示本研究納入的人群可以代表新疆地區維族和漢族群體，并且兩位點基因突變點都能夠穩定遺傳。本研究顯示，維族組A79C AA、AC、CC基因型頻率及A、C等位基因頻率分別為75.4%、18.9%、5.7%、84.9%、5.1%，漢族組分別為52.2%、29.9%、17.9%、67.2%、32.8%，兩組比較，P均<0.05；維族組G208A GG、GA基因型頻率和G、A等位基因頻率分別為94.3%、5.7%、97.2%、2.8%，漢族組分別為77.6%、22.4%、88.8%、11.2%，兩組比較，P均<0.05。因此可得出在新疆維吾爾族、漢族NSCLC患者中，CDA A79C、G208A這兩個位點的基因多態性存在種族差異性。但本研究維吾爾族和漢族A79C、G208A等位基因突變率與以上文獻報道突變率不同，進一步驗證了基因多態性可能與種族有關，但也不排除因樣本量造成偏倚的可能。本研究與徐佳林等研究的中國人基因突變頻率也略有不同，可能與納入人群有關，本研究納入人群均為NSCLC患者，徐佳林納入的樣本為健康人群和多種腫瘤患者，研究結果的不同使我們考慮是否該基因的突變與NSCLC患者之間存在某種關系，才使A79C、G208A突變率較其他研究的突變率升高，還需進一步探討。

因此，對新疆地區維吾爾族、漢族人群與CDA A79C、G208A基因多態性的關系進一步確認仍需要做大量的工作，在今后的研究中可使用更敏感、特異的等位基因分型技術，在更多的人群中納入足夠大的樣本進行更廣泛深入的研究，可以為新疆地區維吾爾族、漢族NSCLC患者指導臨床用藥提供更堅實的遺傳學基礎。

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Comparision of CDA gene polymorphism between Xinjiang Uygur and Han NSCLC patients

WANGYanna,FEIJing,CHENGYanfang,MENGLingli,WANGHui,GONGPing

(TheFirstAffiliatedHospitalofShiheziUniversity,Shihezi832000,China)

Objective To analyze the cytidine deaminase (CDA) gene polymorphism in Uygur and Han patients with non-small-cell lung cancer (NSCLC) in Xinjiang Uygur autonomous region. Methods Totally 120 cases of newly diagnosed advanced NSCLC patients, including 53 cases of Uygur (Uygur group) and 67 cases of Han nationality (Han group), were selected to detect the CDA A79C and G208A gene polymorphisms by direct sequencing. Results The frequencies of CDA A79C and G208A genotypes were in accordance with Hardy-Weinberg equilibrium (allP>0.05). The frequencies of A79C AA, AC, CC genotypes and A and C alleles were 75.4%, 18.9%, 5.7%, 84.9%, and 5.1%, respectively in the Uygur group, versus 52.2%, 29.9%, 17.9%, 67.2%, and 32.8% in the Han group (allP<0.05). The frequencies of G208A GG, GA genotypes and G and A alleles were 94.3%, 5.7%, 97.2%, and 2.8%, respectively in the Uygur group, versus 77.6%, 22.4%, 88.8%, and 11.2%, respectively, in the Han group (allP<0.05).Conclusion There are racial differences in the genetic polymorphisms of CDA A79C and G208A between the Uygur and Han nationalities in Xinjiang.

cytidine deaminase; cytidine deaminase gene; gene polymorphism; non-small-cell lung cancer;

國家自然科學基金資助項目(81560381)；留學人員科技活動擇優資助項目。

王艷娜(1990-)，女，碩士，主要研究方向為腫瘤化療與生物免疫治療。E-mail: 1415232722@qq.com

鞏平(1964-)，女，教授，主任醫師，博士生導師，主要研究方向為腫瘤化療與生物免疫治療。E-mail: 18999536479@163.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.31.001

R734.2

A

1002-266X(2017)31-0001-04

2017-03-07)