肺腺癌組織中TTF-1表達變化及其與EGFR基因突變、患者預后的關系

張旭剛，李維青，高穎，李志田，姜福勝，魏博

(首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院，北京 100038)

肺腺癌組織中TTF-1表達變化及其與EGFR基因突變、患者預后的關系

張旭剛，李維青，高穎，李志田，姜福勝，魏博

(首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院，北京 100038)

目的 觀察肺腺癌組織甲狀腺轉錄因子1(TTF-1)表達變化，并分析其與表皮生長因子受體(EGFR)基因突變、患者預后的關系。方法 肺腺癌患者192例，觀察其TTF-1表達變化及EGFR基因突變情況，分析TTF-1陽性表達、EGFR基因突變與肺腺癌臨床病理參數的關系，另采用Kaplan-Meier生存分析、Log Rank檢驗及Cox風險回歸模型分析影響患者預后的因素。結果 192例患者中，TTF-1陽性表達157例(81.8%)、陰性表達35例(18.2%)，EGFR基因突變型80例(41.7%)、野生型112例(58.3%)。TTF-1陽性表達與肺腺癌TNM分期相關，EGFR基因突變與肺腺癌患者性別、吸煙史相關,P均<0.05。157例TTF-1陽性患者中有79例(50.3%)發生EGFR基因突變，而35例TTF-1陰性患者中僅有1例(2.9%)發生EGFR基因突變，TTF-1陽性表達與EGFR突變有相關性(P<0.05)。單因素生存分析顯示，TTF-1陽性、EGFR基因突變、年齡、PS評分、TNM分期與患者預后相關(P均<0.05)。多因素生存分析顯示，TTF-1陽性、EGFR基因突變、TNM分期早期、PS評分0～2分是肺腺癌遠期生存的獨立影響因素(P均<0.05)。結論 檢測肺腺癌組織TTF-1表達情況有助于初步預測肺腺癌EGFR基因突變狀態及判斷患者預后。

肺癌；非小細胞肺癌；肺腺癌；甲狀腺轉錄因子1；表皮生長因子受體

肺癌的發病率和病死率居所有腫瘤的前列，其中非小細胞肺癌(NSCLC)占肺癌總數的80%以上，而腺癌發病率逐年升高，約占NSCLC的50%[1]。近年來，酪氨酸激酶抑制劑(TKIs)等靶向藥物的應用，使肺癌患者預后及治療反應優于細胞毒性藥物，尤其是針對有表皮生長因子受體(EGFR)基因突變患者[2]。以EGFR基因為靶點治療NSCLC是目前治療肺癌的前沿手段，而且尋找可預測NSCLC患者EGFR基因突變及遠期生存的免疫組化指標備受關注?，F階段檢測EGFR基因的方法多樣，主要有直接測序法、擴增阻滯突變系統、突變高效液相色譜法等，這些方法對組織標本、實驗設備等要求高，且因費時、費用高而不便于推廣。因此有必要尋找一種經濟、便捷、準確預測EGFR基因突變的指標。甲狀腺轉錄因子1(TTF-1)常表達于肺及甲狀腺組織中，是肺腺癌特異的免疫組化診斷標志物，有助于轉移性腺癌和原發性肺腺癌的鑒別[3]。既往文獻[4～6]表明，TTF-1表達與EGFR基因突變之間存在一致性，且TTF-1表達影響患者遠期生存。本研究觀察了肺腺癌組織TTF-1表達變化，并分析其與EGFR基因突變、患者預后的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 選取北京世紀壇醫院保存的肺腺癌標本192例份，其中手術標本(切除或活檢)88例份，穿刺標本47例份，支氣管鏡標本32例份，遠處轉移灶標本25例份?；颊吣?5例，女107例；年齡27～87歲，中位年齡56.5歲；≤65歲132例，>65歲60例；吸煙史(一生中連續或累積吸煙6個月以上)80例；TNM分期參照2009年國際抗癌聯盟(UICC)公布的修訂后的第七版國際肺癌分期法，其中Ⅰ期19例、Ⅱ期31例、Ⅲa期46例、Ⅲb期36例、Ⅳ期60例；采用美國東部協作腫瘤組的PS評分標準，評分0～1分者165例，2分及以上者27例。

1.2 TTF-1檢測方法 組織標本用10%中性甲醛固定，脫水后以石蠟包埋，4 μm連續切片，采用小鼠抗人TTF-1單克隆抗體試劑(北京中杉金橋生物技術公司，克隆號：SPT24)，以En Vision免疫組化法檢測TTF-1。TTF-1表達于細胞核，高倍視野下陽性細胞為染色出現棕黃色或褐色。

1.3 EGFR基因突變檢測方法 采用擴增阻滯突變系法進行RT-PCR擴增，檢測外顯子18、19、20、21突變。EGFR基因突變檢測試劑盒(共29種突變位點)購于廈門艾德生物醫藥科技公司，采用StrataGene MX3000P實時熒光定量PCR儀(德國)進行擴增，具體實驗步驟參照試劑盒說明書進行。結果判定：樣品的外控信號擴增曲線的Ct值<26則提示有突變，Ct值≥26則為野生型。

1.4 患者生存觀察 總生存期定義為患者從病理確診開始至死亡或2016年3月30日。隨訪截止至2016年3月30日，隨訪時間2～71個月，中位隨訪時間23.5個月。所有患者中獲得隨訪181例(100例死亡，81例存活)，失訪11例。

1.5 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。組間比較采用χ2檢驗或Fisher精確檢驗。單因素分析使用χ2檢驗，多因素分析用非條件Logistic回歸分析。應用Kaplan-Meier曲線進行生存分析，組間差異采用Log Rank檢驗。采用Cox風險回歸模型分析影響患者預后因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

192例患者中，TTF-1陽性表達157例(81.8%)，陰性表達35例(18.2%)；EGFR基因突變型80例(41.7%)，野生型112例(58.3%)。TTF-1陽性表達、EGFR基因突變與肺腺癌臨床病理參數的關系見表1，由表1可知，TTF-1陽性表達與肺腺癌TNM分期相關，EGFR基因突變與肺腺癌患者性別、吸煙史相關，P均<0.05。157例TTF-1陽性患者中有79例(50.3%)發生EGFR基因突變，而35例TTF-1陰性患者中僅有1例(2.9%)發生EGFR基因突變，TTF-1陽性表達與EGFR基因突變有明顯相關性(P<0.05)。

表1 TTF-1陽性表達、EGFR基因突變與肺腺癌臨床病理參數的關系(例)

TTF-1陽性患者中位生存時間48個月(95%CI=35.1～60.9)，陰性患者13個月(95%CI=5.1～20.9)，Kaplan-Meier生存曲線顯示陽性患者優于陰性患者；EGFR基因突變型患者中位生存時間58個月(95%CI=46.3～69.7)，野生型患者28個月(95%CI=11.2～44.8)，K-M生存曲線顯示突變型患者優于野生型患者。不同因素患者中位生存期比較見表2，由表2可知TTF-1陽性、EGFR突變、年齡、PS評分級、TNM分期與患者預后相關，而性別及吸煙與患者預后無關。

表2 不同因素患者中位生存期比較

多因素COX回歸分析結果見表3，由表3可知TTF-1陽性、EGFR突變、TNM分期早期、PS評分0～2分是肺腺癌遠期生存的獨立影響因素，而高齡(年齡>65歲)不是其獨立影響因素。

3 討論

TTF-1是NKX2轉錄基因家族的成員之一，位于人類染色體14q13.3，編碼的蛋白含有371～378個氨基酸，生理情況分布于甲狀腺、呼吸道上皮的Ⅱ型Clara細胞及部分大腦前腹側核等[7]。研究發現，在肺腺癌和小細胞型肺癌中TTF-1高表達；然而在大細胞性肺癌和肺鱗癌中，TTF-1多不表達，臨床將TTF-1視為肺腺癌特異的免疫組化診斷標志物。

本研究顯示，肺腺癌TTF-1陽性率為81.8%(157/192)，此結果與亞洲人群報導相近(沙特阿拉伯人群為83.3%[8])，略高于西方人群(法國人群為66%[9]，英國人群為73%[10])。

表3 多因素COX回歸分析結果

進一步分析TTF-1表達與EGFR基因突變的關系，本組157例TTF-1陽性患者中有79例發生EGFR基因突變，而TTF-1陰性患者35例中僅有1例發生EGFR基因突變，提示TTF-1陽性表達預測EGFR為突變型意義重大。Somaiah等[11]報道，224例TTF-1陰性表達患者僅有2例EGFR基因突變，TTF-1預測EGFR基因突變的靈敏度和特異度分別為99.1%、36.4%。相關基礎研究發現，EGFR基因突變最常見于“終末呼吸單位”的肺腺癌，其起源于Ⅱ型肺泡上皮、肺Clara細胞和無纖毛柱狀上皮細胞的肺組織中，而上述細胞常表達TTF-1[12]。

大部分研究傾向于TTF-1陽性表達是NSCLC患者有利預后因素，Chung[13]等研究分析496例晚期腺癌，TTF-1陽性表達者總生存期27.4個月，而陰性表達者總生存期11.8個月，差異有統計學意義。一項分析中[14]包括17項研究的2 235例患者，表達TTF1的NSCLC是生存有利的影響因素，尤其是在Ⅰ期及Ⅲb/Ⅳ期患者中。

Nakamura等[15]認為，由于TTF-1生理狀況下參與調節肺上皮組織發育、分化，因此可以推測腫瘤中TTF-1陽性代表著腫瘤尚保留一定的正常分化能力，說明腫瘤細胞相對分化成熟，其侵襲力較弱。Winslow等[16]發現，低分化的肺癌中TTF-1表達多為陰性；TTF-1可以控制腫瘤分化程度及限制惡性細胞轉移的潛能。本研究單因素生存分析顯示，TTF-1陽性、EGFR基因突變、年齡、PS評分、TNM分期與患者預后相關，多因素生存分析顯示TTF-1陽性、EGFR基因突變、TNM分期早期、PS評分0～2分是肺腺癌遠期生存的獨立影響因素。上述結果提示，TTF-1在肺腺癌發生發展過程中起重要作用，其表達的缺失引起腫瘤侵襲性增強，分化程度降低，從而影響患者預后。

總之，TTF-1是一個預測肺腺癌EGFR基因突變狀態的免疫組化指標，對于尚未開展EGFR基因檢測的醫療機構，可以檢測TTF-1用于靶點基因的初步篩選。TTF-1在肺腺癌的發生發展過程中起著重要作用，其陽性表達是肺腺癌患者有利的預后因素。

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北京市衛生系統高層次衛生技術人才隊伍建設專項經費；北京市屬醫院科研培育計劃項目(PX2016044)；北京世紀壇醫院院青年基金資助項目(2015-q10)。

魏博(E-mail: weibos@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.31.012

R734.2

B

1002-266X(2017)31-0044-03

2017-06-14)