武漢地區漢族人群纖溶酶原激活物抑制物基因多態性分析

馬良鵬，唐靜宜，蔣捷，胡磊，張耕

(武漢市第一醫院，武漢 430030)

武漢地區漢族人群纖溶酶原激活物抑制物基因多態性分析

馬良鵬，唐靜宜，蔣捷，胡磊，張耕

(武漢市第一醫院，武漢 430030)

目的 分析武漢地區漢族人群纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因多態性。方法 采用熒光染色原位雜交技術檢測1 533例(男728例、女805例)武漢漢族人群PAI-1-675基因多態性，并結合文獻比較不同地區及種族PAI-1-675位點等位基因、基因型頻率。結果 武漢地區漢族人群PAI-1-675位點等位基因及基因型分布不具有性別差異(P>0.05)。武漢地區漢族人群4G等位基因頻率低于廣州地區，4G/4G基因型頻率低于廣州、長沙地區，4G/5G基因型頻率高于廣州、長沙地區，P均<0.01。武漢漢族人4G等位基因頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人；4G/4G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、馬其頓人、日本人、南非人；4G/5G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于馬其頓人；P均<0.01。結論 武漢地區漢族人群PAI-1基因多態性有地區、種族差異，但無性別差異。

纖溶酶原激活物抑制物-1；武漢市；漢族；基因多態性

靜脈血栓栓塞(VTE)是血栓在形成部位脫落，隨血液流動時部分或完全堵塞靜脈血管，引起相應組織或器官缺血壞死的病理過程。VTE是一種環境及遺傳因素共同促發的障礙性疾病，多見于長期臥床、肢體制動、大手術或創傷后、晚期腫瘤或有遺傳風險因素的患者。遺傳因素促發VTE約占60%[1]，多項研究指出纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因多態性為VTE形成的遺傳風險因素之一[2]。此外，由于基因多態性分布在不同地區、種族、性別間可能存在差異，且目前國內外尚無關于PA1-1基因多態性分布的性別、地區、種族差異性研究。本研究對武漢地區漢族人群PAI-1多態性進行分析，并探討不同性別、地區及種族間的差異，旨在為VTE的遺傳流行病學研究提供方向。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1～6月來武漢市第一醫院進行PAI-1基因檢測的1 533例漢族人群，男728例，女805例；年齡21～95歲；相互之間無親緣關系，且籍貫為武漢市戶籍。

1.2 PAI-1-675基因多態性分析 ①血液采集和處理：靜脈采血2 mL，加至EDTA抗凝管中，并充分混勻，避免凝血或溶血。血液標本采集后應及時處理(-20 ℃保存不超過7周)，送檢。②白細胞提?。喝〕?00 μL混勻全血，分別加入1 mL 1×NH4Cl預處理液，顛倒混勻，室溫靜置5 min，隔2～3 min混勻1次，至液體顏色為橙清紅色。3 300 r/min離心5 min，棄上清，以1×NH4Cl小心洗滌沉淀，棄上清，加入30 μL PHARM-GENE 01 SNP分析保存液，渦旋震蕩10 s至混勻。③加入耀金分：取1.5 μL白細胞樣本，加入相應的耀金分基因分析檢測試劑中，混勻。④上機雜交：雙擊“Microseq”檢測程序，選擇標本放置的管口及檢測位點后運行檢測程序，待檢測完成后儀器在結果欄自動給出檢測結果的基因類型。⑤結果分析：PAI-1-675位點多態性分為5G/5G(野生型)、5G/4G(突變雜合型)、4G/4G(突變純合型)。

1.3 統計學方法 采用SPSS22.0統計軟件。等位基因、基因型頻率用%表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗及PAI-1-675位點等位基因、基因型分布 本研究對收集到的漢族人群PAI-1基因啟動子區-675 bp處的檢測數據進行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗，計算檢驗結果P=0.54，符合Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗，樣本具有本區域群體代表性。武漢地區漢族人群PAI-1-675 4G、5G等位基因頻率分別為56.72%和43.28%，4G/4G、4G/5G、5G/5G基因型頻率分別為32.55%、48.34%、19.11%。

2.2 不同性別武漢地區漢族人群PAI-1-675位點等位基因、基因型頻率比較 結果見表1。由表1可知，不同性別之間的等位基因和基因型頻率比較無統計學差異(P均>0.05)。

2.3 不同地區漢族人群PAI-1-675位點等位基因、

表1 不同性別武漢地區漢族人群PAI-1-675位點等位基因、基因型分布比較

基因型頻率比較 結果見表2。由表2可知，武漢地區漢族人群4G等位基因頻率低于廣州地區，4G/4G基因型頻率低于廣州、長沙地區，4G/5G基因型頻率高于廣州、長沙地區，P均<0.01。

2.4 不同種族人群PAI-1-675位點等位基因、基因型頻率比較 結果見表3。由表3可致，武漢漢族人4G等位基因頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人；4G/4G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、馬其頓人、日本人、南非人；4G/5G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于馬其頓人；P均<0.01。

表2 不同地區漢族人群PAI-1-675位點等位基因、基因型分布比較

表3 不同種族人群PAI-1等位基因、基因型分布比較

3 討論

VTE是多因素參與的常見病、多發病，病死率高。國外流行病學資料[16,17]顯示，VTE年發病率為1/1 000～2/1 000，其高發病率給患者和國家帶來了沉重的醫療負擔。PAI-1通過特異性抑制血管纖溶酶原激活物(PA)來調節纖溶系統活性，若PAI-1-675位點發生突變，可能導致PA活性降低，進而導致血管內纖維蛋白凝塊溶解降低，最終導致VTE發生[18]。

在遺傳流行病學領域，基因型的群體變異、種族變異被認為是研究遺傳因素和疾病關系的重要橋梁。由于PAI-1的基因多態性分布存在明顯的性別、地區及種族差異，所以本研究對武漢地區1 533例漢族人群PAI-1-675位點進行基因分型，并比較了不同性別、地區及種族間PAI-1-675位點等位基因及基因型頻數頻率分布差異，旨在為VTE的流行病學研究提供遺傳分子基礎。本研究我們發現，武漢地區漢族人群PAI-1-675位點等位基因及基因型分布不具有性別差異，提示性別可能不是武漢漢族人PAI-1-675位點4G/5G多態性分布的影響因素。

本研究還將本文結果與既往研究數據進行比較，我們發現武漢漢族PAI-1-675位點4G等位基因頻率顯著低于廣州，與青島、石家莊、濰坊、北京、長沙相比無顯著性差別。4G/4G基因型頻率顯著低于廣州、長沙，與青島、石家莊、濰坊、北京地區無顯著性差異；4G/5G基因型頻率顯著高于廣州、長沙，與青島、石家莊、濰坊、北京地區無顯著性差異。以上結果提示地區可能是PAI-1-675位點4G/5G多態性分布的影響因素，華中華北地區可能具有相似的PAI-1-675位點遺傳背景，而華南地區PAI-1-675位點遺傳多態性可能有自己的獨特性。

由于我國幅員遼闊民族多樣，導致遺傳背景可能存在差別，又由于本研究所采用的樣本量較大，有一定的代表性，因此我們選擇以武漢漢族人代表中國人與其他種族進行比較。通過比較我們發現，武漢漢族人4G等位基因頻率顯著高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，與荷蘭人、馬其頓人無顯著性差異；4G/4G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、馬其頓人、日本人、南非人；4G/5G基因型頻率高于加納人、土耳其人、印度人、日本人、南非人，低于馬其頓人，與荷蘭人無顯著性差異。以上結果提示種族可能是PAI-1-675位點遺傳多態性的影響因素。

[1] Souto JC, Almasy L, Borrell M，et al.Genetic susceptibility to thrombosis and its relationship to physiological risk factors: the GAIT study. genetic analysis of idiopathic thrombophilia[J].Am J Hum Genet, 2000,67(6):1452-1459.

[2] Sartori MT, Danesin C, Saggiorato G，et al.The PAI-1 gene 4G/5G polymorphism and deep vein thrombosis in patients with inherited thrombophilia[J].Clin Appl Thromb Hemost, 2003,9(4):299-307.

[3] 李長貴,董硯虎,王海燕,等.PAI-1基因4G/5G多態性與2型糖尿病合并腎病的相關性研究[J].中國糖尿病雜志,2001,9(6):334-336.

[4] 國雪,石曉明,趙曉云,等.PAI-1啟動子區4G/5G基因多態性、ACE插入/缺失多態性與腦卒中的相關性[J].基礎醫學與臨床,2011,31(11):1238-1241.

[5] 管立學,杜欣瑩,王敬先,等.PAI-1基因和MTHFR基因多態性與復發性早期自然流產的關系[J].中華醫學遺傳學雜志,2005,22(3):330-333.

[6] 張曉巖,林江濤,楊萌,等.PAI-1基因多態性對哮喘氣道重塑影響的研究[J].實用臨床醫藥雜志,2009,13(12):1-6.

[7] Luo Y, Wang C, Tu H. Impact of the 4G/5G polymorphism in the plasminogen activator inhibitor-1 gene on primary nephrotic syndrome[J]. Mol Med Rep, 2014,9(3):894-898.

[8] 陳懿建,張立群,陳方平.腦梗死患者PAI-1基因啟動子區域4G/5G多態性與血漿活性關系的研究[J].中國全科醫學,2008,11(2A):213-227.

[9] White MJ, Kodaman NM, Harder RH, et al.Genetics of plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) in a ghanaian population[J]. PLoS One, 2015,10(8):0136379.

[10] van Goor ML, Gómez García E, Leebeek F, et al.The plasminogen activator inhibitor (PAI-1) 4G/5G promoter polymorphism and PAI-1 levels in ischemic stroke. a case-control study[J]. Thromb Haemost, 2005,93(1):92-96.

[11] Gunes HV, Cosan DT, Ata N, et al. Plasminogen activator inhibitor type-1 gene 4G/5G polymorphism is associated with hypertensive patients in the Turkish population[J]. Genet Test Mol Biomarkers, 2010,14(3):303-305.

[12] Pegoraro RJ, Ranjith N. Plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1) and platelet glycoprotein Ⅲa (PGⅢa) polymorphisms in young Asian Indians with acute myocardial infarction[J].Cardiovasc J S Afr, 2005,16(5):266-270.

[13] Spiroski I, Kedev S, Antov S, et al. Investigation of SERPINE1 genetic polymorphism in macedonian patients with occlusive artery disease and deep vein thrombosis[J]. Kardiol Pol, 2009,67(10):1088-1094.

[14] Sugano T, Tsuji H, Masuda H, et al. Plasminogen activator inhibitor-1 promoter 4G/5G genotype is not a risk factor for myocardial infarction in a Japanese population[J]. Blood Coagul Fibrinolysis, 1998,9(2):201-204.

[15] de Lange Z, Rijken DC, Hoekstra T, et al. In black South Africans from rural and urban communities, the 4G/5G PAI-1 polymorphism influences PAI-1 activity,but not plasma clot lysis time[J]. PLoS One, 2013,8(12):e83151.

[16] Cohen AT, Agnelli G, Anderson FA, et al. Venous thromboembolism (VTE) in Europe. The number of VTE events and associated morbidity and mortality[J]. Thromb Haemost, 2007,98(4):756-764.

[17] Naess IA, Christiansen SC, Romundstad P, et al. Incidence and mortality of venous thrombosis: a population-based study[J]. J Thromb Haemost, 2007,5(4):692-699.

[18] Hosseini S, Kalantar E, Hosseini MS, et al. Genetic risk factors in patients with deep venous thrombosis, a retrospective case control study on Iranian population[J]. Thromb J, 2015(13):35.

張耕(E-mail： 370924938@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.31.031

R968

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1002-266X(2017)31-0098-03

2017-03-13)