貓爪草多糖對(duì)D-gal衰老模型小鼠抗氧化作用的研究

韓紅霞，呂小華*

（1．山西省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，山西 太原 030001；2．廣東醫(yī)科大學(xué)藥理教研室，廣東 湛江 524023）

貓爪草多糖對(duì)D-gal衰老模型小鼠抗氧化作用的研究

韓紅霞1，呂小華2*

（1．山西省中醫(yī)院檢驗(yàn)科，山西 太原 030001；2．廣東醫(yī)科大學(xué)藥理教研室，廣東 湛江 524023）

目的 研究貓爪草多糖（Polysaccharide of Radix Ranunculi Ternati，RTP）對(duì)D-gal衰老模型小鼠的抗氧化作用。方法 建立小鼠D-半乳糖（D-galactose，D-gal）亞急性衰老模型，研究RTP對(duì)D-gal衰老小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，肝臟IL-2、TNF-α含量，臟器T-AOC、SOD活性及MDA含量的影響。結(jié)果 RTP各劑量組（100 mg/mL～400 mg/mL）可提高肝組織、腎組織、心組織勻漿T-AOC能力、SOD活力，降低其MDA含量，可提高D-gal衰老模型小鼠胸腺指數(shù)、脾指數(shù)，促進(jìn)小鼠體內(nèi)細(xì)胞因子IL-2和TNF-α的分泌。結(jié)論 RTP可延緩D-gal衰老模型小鼠組織及細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能衰退，增強(qiáng)衰老小鼠免疫功能，提高體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)酶活性，較好地維護(hù)D-gal衰老模型小鼠體內(nèi)氧化/抗氧化平衡狀態(tài)。

貓爪草多糖；D-gal衰老模型小鼠；抗氧化；

隨著老齡化社會(huì)的發(fā)展，對(duì)于中藥抗氧化作用的研究越來(lái)越多，而D-gal衰老模型小鼠因其衰老變化明顯，模型穩(wěn)定，在抗衰老研究中被廣泛應(yīng)用。其原理為使機(jī)體細(xì)胞內(nèi)過(guò)量的半乳糖，被還原成不能被細(xì)胞代謝的半乳糖醇，影響正常滲透壓，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹，致使動(dòng)物組織細(xì)胞出現(xiàn)衰老的退行性變以及功能的改變。同時(shí)，在半乳糖代謝過(guò)程中產(chǎn)生大量的自由基超過(guò)機(jī)體的清除能力，大量的自由基攻擊位于線粒體內(nèi)膜上的脂類、蛋白質(zhì)和mtRNA，影響線粒體的功能，導(dǎo)致細(xì)胞受損、免疫功能下降、衰老和疾病的發(fā)生[1]。前期研究發(fā)現(xiàn)貓抓草多糖在體外能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞，T，B淋巴細(xì)胞增殖活性及增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力和有較強(qiáng)的清除OH和抑制O2-的能力[2]，并且對(duì)CCl4所致小鼠急性化學(xué)性肝損傷有保護(hù)作用[3]。本研究旨在探討RTP對(duì)D-gal衰老模型小鼠的抗氧化作用，為RTP的進(jìn)一步臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 一般材料

藥品、動(dòng)物及試劑貓爪草多糖，本實(shí)驗(yàn)室以水提醇沉法提取，用蒽酮-硫酸法測(cè)多糖含量為95.12%，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定總多糖中蛋白含量為3.59%[3]；昆明小鼠，SPF級(jí)，♀♂各半，體重（20±2）g，由廣東醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；總抗氧化能力（T-AOC），丙二醛（MDA）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、批號(hào)均為20090804，Mouse TNF-α ELISA Kit，Mouse IL-2 ELISA Kit（武漢博士德生物工程有限公司），D-半乳糖（美國(guó)SIGMA公司）。

1.2 方法

1.2.1 小鼠分組、建立模型[1]及給藥

取昆明小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組，衰老模型組，RTP低、中、高劑量給藥組。實(shí)驗(yàn)室常規(guī)飼養(yǎng)3天后，正常對(duì)照組每天頸背部皮下注射生理鹽水，其余各組每天按200 mg/kg體重頸背部皮下注射D-gal，同時(shí)RTP給藥組每天分別按100、200、400 mg/kg體重灌胃相應(yīng)劑量的RTP，連續(xù)給藥60 d。

1.3 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測(cè)[4-6]

無(wú)菌剖取小鼠胸腺和脾臟，稱重，計(jì)算脾指數(shù)和胸腺指數(shù)。脾指數(shù)=脾質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量，胸腺指數(shù)=胸腺質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量。取小鼠心臟，冰浴下勻漿并離心，取上清用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定組織中蛋白含量，按試劑盒操作測(cè)定組織中T-AOC、SOD活性及MDA含量及10%肝組織勻漿中IL-2、TNF-α含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較用方差分析，組間差異用t檢驗(yàn)，以α=0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié) 果

2.1 RTP對(duì)D-gal衰老模型小鼠心組織T-AOC、SOD活性及MDA含量的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組心組織T-AOC 、SOD水平降低（P＜0.01），MDA含量升高（P＜0.01）。與模型組比較，各RTP組能升高心組織T-AOC、SOD水平（P＜0.01或P＜0.05），降低心組織MDA含量（P＜0.05或P＜0.01），其中以中劑量組作用最明顯（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 RTP對(duì)D-gal衰老模型小鼠心組織T-AOC、SOD活性及MDA含量的影響（x±s）

2.2 RTP對(duì)D-gal衰老模型小鼠脾指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)水平降低（P＜0.01）。與模型組比較，各RTP組能顯著升高小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)（P＜0.01），其中以中劑量組作用最明顯。見(jiàn)表2。

2.3 RTP對(duì)D-gal衰老模型小鼠肝組織勻漿中IL-2、TNF-α含量的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組小鼠肝組織IL-2、TNF-α水平降低（P＜0.01）。與模型組比較，各RTP組能顯著升高肝組織IL-2、TNF-α（P＜0.01），其中以中劑量組作用最明顯。見(jiàn)表3。

表2 RTP對(duì)D-gal衰老模型小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響（x±s）

表3 RTP對(duì)D-gal衰老模型小鼠肝組織中IL-2、TNF-α含量的影響（x±s，n=10）

3 討 論

SOD能清除超氧陰離子自由基保護(hù)細(xì)胞免受損傷。其活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中產(chǎn)生的一種醛類物質(zhì)，可使組織細(xì)胞受損傷，通過(guò)檢測(cè)MDA含量可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接反映出機(jī)體受自由基攻擊導(dǎo)致細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度[7-8]。MDA水平升高，SOD活性降低，即可引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞損傷甚至細(xì)胞死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：RTP可以通過(guò)升高小鼠體內(nèi)臟器T-AOC水平、SOD活性，降低MDA含量達(dá)到抗氧化、抗衰老的目的。

檢測(cè)D-gal衰老模型小鼠的脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，結(jié)果表明RTP可增強(qiáng)D-gal衰老模型小鼠的脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞的增殖功能，增加小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，使D-gal衰老模型小鼠免疫功能有所恢復(fù)。細(xì)胞因子是免疫活性細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生的具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的一類高活性、多功能的蛋白質(zhì)物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，RTP可增加D-gal衰老模型小鼠體內(nèi)細(xì)胞因子IL-2和TNF-α的含量。

綜上所述，RTP可以通過(guò)升高D-gal衰老模型小鼠臟器的T-AOC水平、SOD活性，降低MDA含量達(dá)到抗氧化、抗衰老的目的。同時(shí)RTP能增加衰老小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)，促進(jìn)D-gal衰老模型小鼠分泌細(xì)胞因子IL-2和TNF-α，表明RTP能增強(qiáng)衰老小鼠的免疫功能，防止免疫衰老。

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本文編輯：王雨辰

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廣東省中醫(yī)藥局面上科研立項(xiàng)資助項(xiàng)目（NO. 20171147）

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