發酵豆粕對斷奶～2月齡肉兔生長發育、血清生化及腸道發育的影響

孫海濤+楊麗萍+姜文學+麻名文+孫作為+白莉雅+高淑霞

摘要：為研究飼糧不同發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔生長性能、血清指標及腸道發育的影響，選用平均體重為（748±50）g的斷奶肉兔150只，隨機分成5組，各組間初始體重無顯著差異，分別飼喂在基礎飼糧中添加0（對照）、3%、6%、9%和12%發酵豆粕的試驗飼糧，預試期7 d，正試期23 d。結果表明：飼糧發酵豆粕添加水平對平均日采食量（ADI）、平均日增重（ADG）、料肉比（F/G）無顯著影響（P>0.05）。對血清總蛋白、堿性磷酸酶含量無顯著影響（P>0.05），但血清尿素氮含量有下降趨勢（P=0.0562），對血清膽固醇含量影響顯著（P<0.05）。飼糧發酵豆粕添加水平對十二指腸絨毛高度、肥大細胞數量及乳酸菌、大腸桿菌含量影響顯著（P<0.05）。綜合本試驗測定指標，飼糧不同發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔的生長發育無顯著影響，但能顯著促進其腸道發育，改善盲腸微生物菌群。

關鍵詞：肉兔；發酵豆粕；生長性能；血清指標；腸道發育

中圖分類號：S829.15 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2017）08-0131-05

Abstract This experiment was conducted to research the effects of fermented soybean meal on growth performance， serum biochemistry and intestinal development of weaner to 2-month-old growing meat rabbits. One hundred and fifty weanling meat rabbits with average body weight of （748±50） g were randomly divided into 5 groups. The rabbits in the 5 groups were fed experimental diets containing 0， 3%， 6%， 9% and 12% fermented soybean meal respectively. The experiment included a pretrial period of 7 days and an experimental period of 23 days. The results were as follows： dietary fermented soybean meal level had no significant influence on average daily feed intake （ADI）， average daily gain （ADG） and ratio of feed to gain （F/G）. Dietary fermented soybean meal level significantly affected the contents of serum cholesterol （CHO） （P<0.05）， but had no significant influence on total protein （TP） and alkaline phosphatase （AKP） （P>0.05）. With the increase of fermented soybean meal level， the serum urine nitrogen （SUN） showed a down trend （P=0.0562）. The dietary fermented soybean meal level also had significant effect on villous height of duodenum， mast cell number， lactobacillus and colibacillus （P<0.05）. In conclusion， the dietary fermented soybean meal level had no significant influence on growing performance， but could promote the intestine development and improve the microbial population status of weaner to 2-month-old meat rabbits.

Keywords Meat rabbit； Fermented soybean meal； Growing performance； Serum index； Intestinal development

作為主要植物性蛋白質原料的豆粕，含有多種抗營養因子，影響其營養物質的吸收利用。發酵豆粕利用現代生物工程技術，將豆粕中大分子蛋白質酶解成多肽、小肽及游離氨基酸，并可產生大量的益生菌、寡肽、乳酸、谷氨酸、維生素以及未知生長因子等物質，某些小肽還具有特殊的生理作用[1]。目前，發酵豆粕對提高仔豬及肉仔雞的生產性能和養分消化率、改善微生態菌群、提高抗氧化能力等方面的報道較多，但發酵豆粕對于幼齡肉兔生長發育各方面影響的研究鮮見報道。本試驗旨在通過肉兔飼糧添加不同水平發酵豆粕，研究其對斷奶～2月齡肉兔生長性能、血清指標及腸道發育方面的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗飼糧

基礎飼糧參照NRC（1977）肉兔飼養標準配制而成，飼糧組成及營養水平見表1。在基礎飼糧中分別添加0（對照）、3%、6%、9%和12%發酵豆粕（由山東和實集團公司提供，粗蛋白≥48%，水溶蛋白≥10%，有機酸≥3.5%），制成5種試驗飼糧。

1.2 試驗設計及飼養管理endprint

選用150只體重（748±50） g的斷奶伊拉肉兔，隨機分為5組，各組間體重差異不顯著，每組15個重復，每個重復2只兔子，分別飼喂以上5種試驗飼糧，預試期7 d，正式期23 d。試驗兔每籠2只進行飼養，自由采食、飲水，常規免疫程序，自然采光、通風。

1.3 樣品的采集與制備

試驗開始后第30 d早晨空腹稱重后每組選取6只試驗兔心臟采血10 mL，室溫避光靜置30 min后，3 000 r/min離心10 min，分離所得血清分裝于Eppendorf管中，置于-20℃冷凍保存待測。試驗兔采血后屠宰取胸腺及脾臟并稱重。取盲腸內容物稱重，并取部分內容物于凍存管中液氮冷凍備測。

1.4 測定指標和方法

1.4.1 生產性能指標 測定斷奶和飼養試驗結束時試驗兔體重，并統計斷奶～2月齡試驗兔的采食量，計算平均日采食量（ADI）、平均日增重（ADG）和料肉比（F/G）。

1.4.2 血清生化指標的測定 血清中堿性磷酸酶（AKP）、白蛋白（ALP）、總蛋白（TP）、尿素氮（BUN）和膽固醇（CHO）的測定采用日本和光提供的試劑盒檢測，按說明書操作，測定儀器采用日立7020型全自動生化分析儀。

1.4.3 腸道發育指標 ①十二指腸切片制作與觀察：統一取幽門下5 cm處十二指腸，磷酸鹽緩沖液洗干凈，置于固定液[卡諾氏（Carnoys）]中固定4 h，經脫水、透明、石蠟包埋，切片4～6 μm；采用蘇木精-伊紅（HE）染色觀察十二指腸絨毛高度，采用甲苯胺藍染色觀察肥大細胞數量。顯微鏡觀察并拍照，應用Image-Pro Plus 6.0軟件對每張照片進行分析得出每張照片上十二指腸絨毛高度及對應絨毛上肥大細胞數量。

②盲腸微生物培養試驗：無菌取盲腸內容物1 g于裝有99 mL滅菌生理菌水及玻璃珠的錐形瓶中，稀釋均勻后取該稀釋液0.5 mL加入盛有4.5 mL滅菌生理鹽水的試管中，依次進行10-3～10-7稀釋。乳酸菌和大腸桿菌經實驗室培養后采用平板計數法進行計數。

1.5 數據處理

采用SAS 9.4統計軟件中的GLM進行方差分析，分別以P<0.05和P>0.05作為差異顯著和不顯著的判斷標準。

2 結果與分析

2.1 飼糧發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔生長性能的影響

由表2可知，在初始體重無顯著差異的情況下，飼糧中不同發酵豆粕水平對斷奶～2月齡伊拉肉兔平均日采食量（ADI）、平均日增重（ADG）及料重比（F/G）影響均不顯著（P>0.05）。

2.2 飼糧發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔血清指標的影響

由表3可知，飼糧不同發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔的血清總蛋白（TP）及堿性磷酸酶（AKP）含量的影響差異不顯著（P>0.05）；對斷奶～2月齡伊拉肉兔的血清膽固醇（CHO）含量影響顯著（P<0.05）， 9%和12%發酵豆粕添加組CHO水平顯著低于對照組并在12%添加組水平達到最低；飼糧不同發酵豆粕水平對斷奶～2月齡伊拉肉兔的血清尿素氮（SUN）含量影響不顯著（P=0.0562），但隨著發酵豆粕添加水平的提高，尿素氮含量呈下降趨勢。

2.3 飼糧發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔腸道發育的影響

由表4可知，飼糧不同發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔的十二指腸絨毛高度影響顯著（P<0.05），其中6%、9%和12%發酵豆粕組顯著高于對照組；對肥大細胞數量影響顯著（P<0.05），其中9%及12%發酵豆粕組肥大細胞數量顯著高于對照組，并在9%發酵豆粕添加組數量達到最大。

2.4 飼糧發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔盲腸微生物的影響

由表5可知，飼糧不同發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔的盲腸內容物大腸桿菌含量影響差異顯著（P<0.05），6%、9%及12%發酵豆粕添加組盲腸大腸桿菌含量顯著低于對照組；對盲腸內容物乳酸菌含量影響差異顯著（P<0.05），隨著發酵豆粕添加水平的提高，乳酸菌含量升高，3%和6%發酵豆粕添加組顯著高于對照組，9%及12%發酵豆粕添加組顯著高于對照組、3%和6%添加組。

3 討論

3.1 發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔生長性能的影響

豆粕是一種植物性蛋白飼料，被廣泛用于工業中，但其中存在許多抗營養因子，會降低動物對其營養物質的吸收和利用。相比豆粕，發酵豆粕不僅能夠降低豆粕中存在的抗營養因子如大豆抗原、蛋白酶抑制因子的含量；而且豆粕經微生物發酵后酶解成小分子蛋白質、肽類和氨基酸等營養物質，能提高機體蛋白質的合成和飼料氨基酸的利用率。研究發現，仔豬飼料中添加發酵豆粕能促進仔豬生長[2]。而李云蘭等[3]發現，發酵豆粕替代豆粕飼喂鯉魚后對鯉魚的飼料系數和特定生長率都沒有產生顯著影響，表明豆粕發酵后對鯉魚的生長性能沒有明顯的促進作用。本試驗研究表明，3%、6%、9%和12%的發酵豆粕替代豆粕對斷奶～2月齡肉兔的ADI、ADG和F/G均無顯著影響，3%、6%、9%和12%的發酵豆粕替代比例對斷奶～2月齡肉兔生長性能沒有明顯的促進作用。

3.2 發酵豆粕添加水平對斷奶～2月齡肉兔血清指標的影響

血清生化指標是評定畜禽營養物質消化代謝及其機能的重要指標[4]。血清總蛋白含量是對動物機體蛋白質代謝狀況的有效反映，血清總蛋白含量高則說明蛋白在體內的沉積較多，可供給動物機體的蛋白質也多。發酵豆粕完全代替普通豆粕配制肉雞飼料，結果血清總蛋白并無顯著差異[5，6]。這與本試驗的結果相一致，本試驗中，不同添加比例發酵豆粕飼喂的肉兔各組血清總蛋白含量無顯著差異。

作為衡量飼糧氨基酸平衡的一個風向標，血清尿素氮直接反映了機體蛋白質分解代謝和營養水平[7]。血清尿素氮水平越高則表明蛋白質分解加強，氮的利用率越低；血清尿素氮水平越低則表明蛋白質分解減弱，機體內氮的利用率越高。 本試驗中，各處理組間血清尿素氮差異不顯著但與對照組相比，隨著發酵豆粕替代水平的升高，尿素氮呈下降趨勢，表明發酵豆粕在一定程度上可以提高肉兔的氮利用率。endprint

堿性磷酸酶與動物成骨細胞活性的高低有著密切關系，堿性磷酸酶活性高則可促進骨膠原蛋白和骨鹽沉積，進而促進動物的生長發育。本試驗中，各試驗組堿性磷酸酶活性與對照組相比均無顯著差異。

血清膽固醇反映了機體對脂類的利用情況，膽固醇水平越低則表明機體對脂肪的利用率越高[8]，本試驗結果發現添加發酵豆粕能降低血清中膽固醇含量，表明發酵豆粕能降低血清膽固醇含量，提高肉兔機體對脂肪的利用率。

3.3 發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔腸道發育影響

作為養分吸收的主要場所，小腸絨毛結構良好是養分消化吸收和動物正常生長的生理學基礎[9]。小腸絨毛高度與絨毛上細胞數量呈顯著正相關，絨毛越高成熟細胞越多，而只有成熟的絨毛細胞才具有吸收養分的功能，所以絨毛越高則說明機體對養分的吸收能力越強[10]，絨毛高度下降則說明吸收功能降低[11]。發酵豆粕能提高小腸絨毛高度，有效改善仔豬小腸絨毛結構[12，2]。本試驗中，6%、9%和12%發酵豆粕替代組的絨毛高度顯著高于對照組，說明發酵豆粕能夠提高絨毛高度，有效改善肉兔小腸絨毛結構。

肥大細胞遍布在所有組織中[13]，其在炎癥反應和速發型過敏反應中扮演重要角色[14，15]，同時還參與抵御細菌感染的免疫反應并且與病毒感染有直接關系[16]。正常劑量的鋅硒對照組中肉雞腸道黏膜結構完整且肥大細胞數量較多，而過高或過低的鋅硒處理組肉雞腸道黏膜結構受損且肥大細胞數量減少[17]。王文利等[18]發現，大蒜溶液飼喂小鼠能夠增加小鼠腸道肥大細胞數量。本試驗結果表明，9%和12%發酵豆粕替代組的肉兔腸道肥大細胞數量顯著高于對照組，說明提高肉兔飼料中發酵豆粕的比例可顯著提高腸道中肥大細胞的數量，從而改善肉兔的腸道免疫功能。

3.4 發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔盲腸微生物的影響

動物體內最大和最復雜的微生態系統是胃腸道微生物生態系統，隨著動物年齡的增長、營養變化等因素的影響，胃腸道微生物菌群發生著不同變化，健康動物胃腸道菌群自身以及與動物機體之間始終處于一種動態平衡中。動物胃腸道菌群的穩定和平衡對動物機體的生理功能具有重要作用，對宿主健康具有深遠影響[19]。動物胃腸道菌群大體可以分為有益菌、有害菌和條件致病菌三大類。當有益菌和有害菌數量在比例范圍內存在于胃腸道部位時則不會引起疾病，此情況下有益菌和有害菌屬于腸道正道菌群[20]，腸道微生物菌群的穩定對宿主健康有著重要作用[21]，當發生食物過敏或腹瀉時，腸道菌群中乳酸菌會減少，而腸桿菌會增多[22]。研究發現，發酵豆粕能改善黃羽肉雞的腸道微生物菌群和腸道粘膜免疫功能[23]。本試驗結果表明，隨著發酵豆粕替代水平的提高，肉兔盲腸微生物中乳酸菌含量顯著增加，而大腸桿菌含量顯著減少，表明發酵豆粕能促進肉兔盲腸中乳酸菌的生長而抑制大腸桿菌的生長。

4 結論

不同發酵豆粕水平對斷奶～2月齡肉兔的生長發育無顯著影響，但能顯著促進伊拉肉兔的腸道發育，改善盲腸微生物菌群。

參考文獻：

[1]王恬， 傅永明， 呂俊龍， 等. 小肽營養素對斷奶仔豬生產性能及小腸發育的影響[J]. 畜牧與獸醫， 2003， 35（6）：4-8.

[2]張露露， 王昕陟， 劉旭龍， 等. 發酵豆粕中大分子蛋白質和肽含量對仔豬小腸絨毛結構的影響[J]. 動物營養學報， 2016， 28（7）： 2213-2220.

[3]李云蘭， 高啟平， 帥柯， 等. 發酵豆粕替代豆粕對鯉魚生長性能和腸道組織結構的影響[J]. 動物營養學報， 2015， 27（2）： 469-475.

[4]劉陽. 發酵豆粕和嗜酸乳桿菌培養物對斷奶仔豬腸道形態結構、消化酶活性及血液生化指標的影響[D]. 南昌：江西農業大學， 2015.

[5]Liu X， Feng J， Liu Y， et al. Effects of Aspergillus oryzae fermented soybean meal on growth and immune function in broilers[J]. Chinese Journal of Animal Science， 2007， 43（9）： 25-27.

[6]馮杰， 劉欣， 盧亞萍， 等. 微生物發酵豆粕對斷奶仔豬生長、血清指標及腸道形態的影響[J]. 動物營養學報， 2007， 19（1）： 40-43.

[7]Borg B S， Libal G W， Wahlstorm R C. Tryptophan and threonine requirements of young pigs and their effects on serum calcium， phosphorus and zinc concentrations[J]. Journal of Animal Science， 1987， 64（4）： 1070-1078.

[8]陳賽娟， 劉亞娟， 王圓圓， 等. 枸杞多糖對泌乳母兔生產性能及血清生化指標的影響[J]. 中國農業科學， 2013， 46（10）： 2168-2174.

[9]姚浪群， 薩仁娜， 佟建明， 等. 安普霉素對仔豬腸道微生物及腸壁組織結構的影響[J]. 畜牧獸醫學報， 2003， 34（3）： 250-257.

[10]章世元， 徐建超， 張杰， 等. 新型發酵豆粕對斷奶仔豬生長性能及胃腸道發育的影響[J]. 畜牧與獸醫， 2009， 41（7）： 20-23.

[11]Eid Y Z， Ohtsuka A， Hayshi K. Tea polyphenols reduce glucocorticoid-induced growth inhibition and oxidative stress in broiler chickens[J]. British Poultry Science， 2003， 44（1）： 127-132.endprint

[12]章世元， 全麗萍， 徐健超， 等. 發酵豆粕對斷奶仔豬生長性能、養分消化率和胃腸道發育的影響[J]. 中國飼料， 2008 （16）： 8-11.

[13]Metcalfe D D， Baram D， Mekori Y A. Mast cells[J]. Physiol. Rev.， 1997， 77（4）： 1033-1079.

[14]Williams C M M， Galli S J. The diverse potential effector and immunoregulatory roles of mast cells in allergic disease[J]. Journal of Allergy and Clinical Immunology， 2000， 105（5）： 847-859.

[15]Lee D M， Friend D S， Gurish M F， et al. Mast cells： a cellular link between autoantibodies and inflammatory arthritis[J]. Science， 2002， 297（5587）： 1689-1692.

[16]Woolley D E， Tetlow L C. Mast cell activation and its relation to proinflammatory cytokine production in the rheumatoid lesion[J]. Arthritis Research & Therapy， 1999， 2（1）： 1.

[17]王子旭. 鋅硒互作對肉雞腸黏膜結構及黏膜免疫相關細胞影響的研究 [D]. 北京： 中國農業大學， 2003.

[18]王文利， 張玉仙， 陳耀星， 等. 不同濃度的大蒜溶液對小鼠小腸黏膜肥大細胞和 IgA 陽性反應物數量變化的研究[J]. 黑龍江畜牧獸醫 （上半月）， 2010 （2）： 16-18.

[19]Lam C， Conway P L， ORiordan K. Gastrointestinal microbial community shifts observed following oral administration of a Lactobacillus fermentum strain to mice[J]. FEMS Microbiology Ecology， 2003， 43（2）： 133-140.

[20]郭興華.益生菌基礎與應用[M]. 北京：北京科學技術出版社，2002.

[21]Backhed F， Ley R E， Sonnenburg J L， et al. Host-bacterial mutualism in the human intestine[J]. Science， 2005， 307（5717）： 1915-1920.

[22]Kalliomaki M， Isolauri E. Role of intestinal flora in the development of allergy[J]. Current Opinion in Allergy and Clinical Immunology， 2003， 3（1）： 15-20.

[23]許麗惠， 祁瑞雪， 王長康， 等. 發酵豆粕對黃羽肉雞生長性能、血清生化指標、腸道黏膜免疫功能及微生物菌群的影響[J]. 動物營養學報， 2013， 25（4）： 840-848.endprint