鐵冬青芽誘導(dǎo)和增殖的試驗(yàn)初探

嚴(yán)榮斌++龐永容??

摘要：以3 a生鐵冬青莖段為外植體，探討不同培養(yǎng)基對(duì)鐵冬青芽誘導(dǎo)和增殖效果。結(jié)果表明：鐵冬青采用MS+6BA 1 ml/L+IAA 02 ml/L誘導(dǎo)，增殖培養(yǎng)基采用1/2MS+6BA 15 ml/L+IAA 05 ml/L，增殖系數(shù)為33。

關(guān)鍵詞：鐵冬青；誘導(dǎo)；增殖

中圖分類號(hào)：S792文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1004-3020（2017）04-0023-02

A Preliminary Study on the Induction and Proliferation of the Bud of Ilex

Yan RongbinPang Yongrong

（Yulin Forestry Research InstituteYulin537501）

Abstract： Using 3 year old stem segments of pig iron as explants， the effects of different media on the induction and proliferation of the buds were studied. The results showed that 0.2 ml/L was induced by MS+6BA 1 ml/L+IAA， the proliferation medium was 1/2MS+6BA 1.5 ml/L+IAA 0.5 ml/L， and the proliferation coefficient was 3.3.

Key words：Ilex rotunda；inducing；propagating

鐵冬青（Ilex rotunda），別名熊膽木、羊不食、七星香、萬紫千紅等。可入藥，常用于清熱解毒，消腫止痛；用于感冒，扁桃體炎，咽喉腫痛，急性胃腸炎，風(fēng)濕骨痛；外用治跌打損傷，癰癤瘡瘍，外傷出血，燒燙傷，具有較高的藥用價(jià)值[1]。因樹體形態(tài)優(yōu)美，花多且密集，常用作行道樹和庭院綠化[2]。鐵冬青的育苗用一般采用種子播種為主[3]，也有研究表明可以用扦插的方法培育[4]。本試驗(yàn)探索鐵冬青的組織培養(yǎng)的可行性，便于鐵冬青的育苗生產(chǎn)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

玉林市林科所3 a生鐵冬青綠化苗，選取剛進(jìn)入木質(zhì)化且無病蟲害的枝條作為外植體。常規(guī)清理外植體表面后，在超凈工作臺(tái)進(jìn)行滅菌消毒。消毒方法采用：75%乙醇處理15～20 s和01%升汞處理9～10 min，無菌水洗滌5～6次。裁剪腋芽未萌發(fā)莖段作為進(jìn)行誘導(dǎo)芽的材料。

1.2誘導(dǎo)鐵冬青芽的培養(yǎng)基

以MS為基本培養(yǎng)基[5]，內(nèi)含30 g/L蔗糖、3 g/L瓊脂，pH值58～59。分別設(shè)置不同質(zhì)量濃度的細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素等進(jìn)行培養(yǎng)（表1），把處理好的莖段接種于以上的培養(yǎng)基中。接種后的培養(yǎng)基均先常溫暗室培養(yǎng)24 h，再轉(zhuǎn)溫室培養(yǎng)。溫室培養(yǎng)環(huán)境溫度為23～25 ℃，每天12 h光照，光照強(qiáng)度為1 500～2 000 Lux。記錄芽的萌發(fā)時(shí)間和分化數(shù)量。

1.3鐵冬青繼代增殖的培養(yǎng)基

芽的繼代增殖設(shè)置不同質(zhì)量濃度的無機(jī)鹽、細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素。當(dāng)誘導(dǎo)的芽生長(zhǎng)到2～4 cm時(shí)，剪切接種到繼代增殖培養(yǎng)基上，接種30 d后記錄數(shù)據(jù)。接種后的培養(yǎng)基均先常溫暗室培養(yǎng)24 h，再轉(zhuǎn)溫室培養(yǎng)。溫室培養(yǎng)環(huán)境溫度為23～25 ℃，每天12 h光照，光照強(qiáng)度為1 500～2 000 Lux。

1.4數(shù)據(jù)處理分析

采用Excel和SPSS18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1不同質(zhì)量濃度的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素對(duì)鐵冬青芽誘導(dǎo)的影響

誘導(dǎo)出的芽有單芽也有叢芽。不同質(zhì)量濃度的6BA對(duì)芽的誘導(dǎo)也存在顯著差異。表1可見，1 mg/L 的6BA相對(duì)于其他濃度，可以在芽的萌發(fā)時(shí)間有較顯著的縮短，萌芽條數(shù)也有一定量的增殖，且芽的生長(zhǎng)也較好。IAA對(duì)萌芽的生長(zhǎng)有一定的影響，并沒有6BA效果明顯。在含6BA濃度為05 mg/L的情況下，增量的IAA只對(duì)萌芽條數(shù)有影響。不同含量的IAA在1 mg/L6BA下均可誘導(dǎo)芽的增殖。根據(jù)萌芽的生長(zhǎng)狀況，處理6中的激素比在誘導(dǎo)芽的生長(zhǎng)狀況上效果最好。

2.2繼代培養(yǎng)基中無機(jī)鹽和激素質(zhì)量濃度對(duì)鐵冬青芽增殖的影響

在含不同質(zhì)量濃度的無機(jī)鹽處理中，均有叢生芽產(chǎn)生。表2可見，處理C和處理F的增殖系數(shù)最高。1/2MS培養(yǎng)基中，含高濃度細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的增殖系數(shù)有明顯差異。說明在低濃度的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中提高激素含量可以影響芽的增殖。在MS培養(yǎng)基中，激素影響增殖效果并不顯著。說明在充足的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中，激素含量并不是影響增殖的主要因素。綜合增殖芽的生長(zhǎng)狀況，處理C和處理F均可以作為鐵冬青較好的繼代培養(yǎng)基，考慮生產(chǎn)成本的情況下，處理C的為最優(yōu)。

3小結(jié)與討論

通過莖段誘導(dǎo)芽的培養(yǎng)基情況比較，得出6BA對(duì)芽誘導(dǎo)有主導(dǎo)作用，添加量以1 mg/L最為合適，IAA對(duì)芽產(chǎn)生能起一定的促進(jìn)，表現(xiàn)為促進(jìn)了芽的增殖。但6BA和IAA所用配比不同，導(dǎo)致分化芽的生長(zhǎng)情況不同，在添加1 mg/L的6BA，IAA添加到02 mg/L為最佳。

高濃度的無機(jī)鹽培養(yǎng)基相對(duì)于質(zhì)量濃度減半的培養(yǎng)基有較高的增殖系數(shù)。但在加入高濃度的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素后，1/2MS和MS培養(yǎng)基的增殖差異就不顯著了。說明在1/2MS培養(yǎng)基中加入足量的激素可以促進(jìn)增殖，可以達(dá)到增加無機(jī)鹽的質(zhì)量濃度的效果。處理C和處理F的激素濃度：6BA 15+IAA 05的效果對(duì)芽的增殖有較好作用。

綜合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可得出鐵冬青芽誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)的方案：選用帶芽莖段經(jīng)過消毒后，裁切轉(zhuǎn)入芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基（處理1）上。待產(chǎn)生足夠量的芽，以這些無菌芽作為中間繁殖體，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基（處理C）再進(jìn)一步擴(kuò)繁。由于本試驗(yàn)僅對(duì)鐵冬青的芽誘導(dǎo)和繼代階段進(jìn)行初步研究，得出的也僅為誘導(dǎo)和繼代較好的方案，對(duì)運(yùn)用到實(shí)際生產(chǎn)中擴(kuò)繁過程、生根階段具體培養(yǎng)基配方的配比，需要待進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)

[1]藥用植物圖像數(shù)據(jù)庫[DB]. 香港浸會(huì)大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院.http：//libproject.hkbu.edu.hk/was40/detail？lang=cn&record=1&channelid=1288&searchword=%28%E9%93%81%E5%86%AC%E9%9D%92%29&extension=all.

[2]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編委會(huì).中國(guó)植物志：第 45卷第二分卷[M].北京：科學(xué)出版社，1999：13.

[3]劉濟(jì)祥，朱培林.優(yōu)良觀果樹種鐵冬青播種育苗試驗(yàn)研究[J].中國(guó)林副特產(chǎn)，2008（3）：2829.

[4]溫美霞，黃焱輝，胡松竹.鐵冬青扦插繁殖技術(shù)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（18）：94239425.

[5]陳正華.木本植物組織培養(yǎng)及應(yīng)用[M].北京：高等教育出版社，1986.3755.

（責(zé)任編輯：夏劍萍）endprint