脂肪因子Vaspin、Chemerin在妊娠期糖尿病孕婦的表達

李曉紅，陳卓，馬潤玫

（昆明醫科大學第一附屬醫院婦產科，昆明650031）

脂肪因子Vaspin、Chemerin在妊娠期糖尿病孕婦的表達

李曉紅，陳卓，馬潤玫*

（昆明醫科大學第一附屬醫院婦產科，昆明650031）

目的：探討內臟脂肪組織源性絲氨酸蛋白酶抑制劑（visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor，Vaspin）及趨化素（Chemerin）在孕婦血清及大網膜脂肪組織的表達與妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）的關系。方法：研究對象在足月入院待產時收集晨起空腹血，測量各研究對象產前體重、空腹血糖、空腹胰島素等臨床指標。ELISA檢測血清中Vaspin與Chemerin水平。免疫印跡法檢測大網膜組織中Vaspin及Chemerin的表達。結果：（1）GDM組血清中Vaspin及Chemerin水平顯著高于對照組；（2）Spearmen相關性分析顯示Vaspin與產前BMI、OGTT2h血糖、HDL、FINS密切相關。Chemerin與TC、TG、CRP密切相關；（3）肥胖孕婦大網膜脂肪中Chemerin的表達顯著增高。結論：脂肪因子Vaspin及Chemerin與GDM的胰島素抵抗、肥胖及脂代謝密切相關。

妊娠期糖尿病；Vaspin；趨化素；胰島素抵抗

妊娠期由于其特殊的生理狀態，孕婦存在不同程度的胰島素抵抗，隨妊娠進展，獲得性胰島素抵抗加重〔1〕。正常妊娠晚期孕婦存在高血脂代謝改變，妊娠期糖尿病（gestational diabeles mellitus，GDM）孕婦由于其嚴重的胰島素抵抗使胰島素抑制脂肪氧化和分解作用減弱，血脂升高〔2-3〕，即使予以飲食與胰島素治療后，仍存在糖脂代謝紊亂。脂肪組織是強大的內分泌器官，可分泌大量的脂肪因子，對糖脂代謝、胰島素抵抗、系統炎癥等重要代謝中起調節作用〔4-5〕。脂肪因子（Chemerin）參與脂肪組織的分化、成熟〔6-7〕，與肥胖、血脂代謝紊亂密切相關〔8〕。內臟脂肪組織源性絲氨酸蛋白酶抑制劑（visceral adipose tissue-derived serine protease inhib?itor，Vaspin）屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑（serpin）家族，具有胰島素增敏作用〔9〕。本文將檢測血清中及內臟脂肪組織（大網膜脂肪組織）中Vaspin、Chemerin表達及糖脂代謝指標，探討Chemerin、Vaspin與GDM孕婦胰島素抵抗、糖脂代謝的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2012年10月至2013年3月在我院產科門診規律產前檢查單胎且足月妊娠后入我院分娩的產婦52例。本次妊娠前無高血壓、腎臟、心血管、肝臟等疾病，無內分泌疾病，如甲亢、甲減、糖尿病等。未服用干擾糖、脂代謝的藥物，如消炎痛、可的松等。在28～30周時行75 gOGTT試驗，診斷標準參照1998年WHO的GDM診斷標準，分為妊娠期糖尿病和妊娠期糖耐量受損（gestational impaired glucose tolence，GIGT）。GDM和GIGT統稱妊娠期糖代謝異常狀態，按GDM治療。其中GDM組30例，對照組22例。本研究已通過昆明醫科大學第一附屬醫院倫理委員會審核，每位入組者均簽署知情同意書。

1.2 身體參數指標檢測測量受試對象，身高、分娩前體重，詢問孕前體重，計算BMI及孕期增重。

1.3 血清的收集及生化指標的測定受試對象禁食10 h后清晨采集空腹靜脈血，全血5 mL，其中2 mL用于測定空腹血糖（FPG）、空腹胰島素（FINS）。余3 mL靜置2 h后3 000 r∕s離心10 min，取上層血清分裝，用于測定FINS及后續ELISA測定Vaspin、Chemerin。測定FPG采用己糖激酶法（美國OlympasAU2700自動生化分析儀，試劑購自北京中生公司）檢測。FINS采用化學發光法（DPC IMMULITE化學發光分析儀，試劑購自DPC Cirrus Inc）檢測。胰島素抵抗指數（HOMA-IR）=FPG（mmol∕L）×FINS（mU∕L）∕22.5。

1.4 Vaspin、Chemerin的測定Vaspin、Chemerin均采用酶聯免疫吸附法（ELISA法）測定，Vaspin ELISA試劑盒（Visceral Adipose Tissue-Derived Serpin A12（human）ELISA Kit，Cayman Chemical Item Number 579000），Chemerin ELISA試劑盒（Human Omentin-1 ELISA，EZH0MNTN1-29K）。

1.5 網膜組織的收集受試對象在足月妊娠因產科指征需剖宮產分娩的患者，在剖宮產時收集大網膜組織5 g，-80℃保存待測。

1.6 免疫印跡法檢測Vaspin及Chemerin的表達

收集好的大網膜組織5 g，加入1 mL蛋白裂解液（含1 mL RIPA buffer+100 μL蛋白酶抑制劑+100 μL磷酸酶抑制劑）冰上勻漿，4℃，30 000 r∕min離心4 min，去除上層油脂，吸取中層水溶部分（含蛋白質），棄沉淀。BCA法測定蛋白質濃度。取120 μg蛋白質予以上樣，上樣前加入6×上樣緩沖液，予沸水煮沸5 min充分變性，Chemerin蛋白采用15%膠，Vaspin蛋白采用8%膠分別進行聚丙烯胺凝膠電泳（SDS-PAGE），PVDF膜轉移后進行一抗Vaspin（An?ti-Vaspin Antibody，millpore，AB10628）、Chemerin（Human Chemerin MAb（Clone 365317，MAB2324，R&D）孵育，然后通用二抗孵育，增強化學發光（enhanced chemiluminescence，ECL）顯色，底片曝光。每樣至少重復3次以消除誤差。Image J軟件分析圖像灰度值，以目的蛋白灰度值∕內參GAPDH灰度值為蛋白相對表達量。

1.7 統計學處理用SPSS 21.0軟件對數據進行統計學處理。計量資料以表示。組間比較采用獨立樣本t檢驗或單因素方差分析；Spearman相關性分析臨床參數、HOMA-IR與Vaspin、Chemerin之間相關性。檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 GDM組和對照組的一般臨床特征、代謝參數與血清中Vaspin、Chemerin的比較兩組孕婦在孕前平均體重及孕期體重增加、甘油三脂（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）均無明顯差異。而產前GDM組孕婦胰島素水平升高，并表現明顯的胰島素抵抗及高CRP水平，且Vaspin及Chemerin均比對照組明顯升高。見表1。

表1 GDM組和對照組一般臨床特征、代謝參數與血清中Vaspin、Chemerin的比較

2.2 各身體參數與Vaspin、Chemeirn的相關性Spearman相關性分析顯示：Vaspin與孕前產前體重、產前BMI、OGTT2h血糖、甘油三脂、空腹胰島素及HOMA-IR正相關，與高密度脂蛋白負相關。Chemerin與甘油三脂、總膽固醇、CRP正相關。見表2。

表2 各身體參數與Vaspin、Chemeirn的相關性分析

2.3 產前不同BMI（kg∕m2）對GDM組與對照組血清中Vaspin、Chemerin的影響按產前BMI不同將兩組孕婦各分為BMI≤28 kg∕m2組（非肥胖組），及BMI＞28 kg∕m2組（肥胖），比較各組孕婦TG、TC、HDL、LDL、CRP及血清中Vaspin、Chemerin水平。肥胖GDM孕婦存在明顯的高脂血癥（高水平的TC、TG）。對照組肥胖孕婦血脂TC增高。肥胖GDM孕婦血清中Chemerin水平明顯高于任何其他體重指數的孕婦，而非肥胖的GDM孕婦血清中Chemerin水平比對照組非肥胖孕婦明顯升高，但與對照組肥胖孕婦比較無差異性。提示：肥胖的孕婦表現出血脂代謝紊亂，而GDM孕婦的肥胖更加重了血脂代謝紊亂，伴隨著血清中高水平的Vaspin及Chemerin。見表3。

表3 不同BMI的孕婦血脂、CRP及血清中Vaspin、Chemerin的比較

2.4 大網膜脂肪組織中Chemerin及Vaspin的表達Chemerin在BMI＞28 kg∕m2的GDM組及對照組孕婦大網膜組織中高表達，BMI≤28 kg∕m2的孕婦，Chemerin在GDM組與對照組表達無顯著性差異。Vaspin在GDM組網膜組織的表達有增高趨勢，在BMI＞28 kg∕m2的孕婦有高表達于其他BMI的孕婦的趨勢，但差異無統計學意義。見圖1～2。

3 討論

胰島素抵抗是公認的妊娠期糖尿病發生發展的病理生理基礎，胰島素抵抗的高低是影響宮內血糖水平不可忽視的因素，宮內血糖水平對母兒結局有決定性的作用。故探討孕期胰島素抵抗的影響因素，對治療或緩解孕期胰島素抵抗，對妊娠的結局有一定意義。本研究對象均為在我科門診定期產檢，并接受孕期飲食及體重控制指導，在年齡、孕周、孕期體重增加無顯著性差異，仍發現GDM孕婦比對照組孕婦有更明顯的胰島素抵抗。Chemerin在肥胖人群及2型糖尿病動物模型的白色脂肪組織中高表達，與肥胖、高血脂、高胰島素血癥、胰島素抵抗及心血管疾病為表型的代謝綜合癥密切相關，即使校正BMI，年齡和性別后，Chemerin依然和HDL、TC、TG密切相關〔10-11〕。本文發現在GDM孕婦血清中Chemerin的水平明顯高于對照組孕婦，與TC、TG、CRP正相關。肥胖GDM組血清中Chemerin水平明顯高于任何其他孕婦。Chemerin在大網膜脂肪組織中肥胖孕婦均為高表達，且GDM組表達更高。高胰島素水平可促進脂肪組織Chemerin的分泌，二甲雙胍可降低血清及脂肪組織中的Chemerin水平，刺激胰島素作用下的葡萄糖攝取并促進胰島素受體底物-1（insulin receptor substrate-1，IRS-1）的磷酸化而提高胰島素的敏感性〔10〕。Chemerin可降低糖尿病鼠的胰島素水平，并加重糖耐量異常〔12〕。孕期肥胖可促進Chemerin的分泌，Chemerin的高表達促進系統性炎癥的發生，進一步促進肥胖及脂代謝紊亂的發生。GDM孕婦胰島素抵抗及血清中高水平FINS促進脂肪分泌Chemerin，高Chemerin水平加重糖耐量的異常，加重胰島素抵抗〔14〕。

圖1 不同BMI網膜脂肪組織中Chemerin與Vaspin的蛋白表達

圖2 不同BMI網膜脂肪組織中Chemerin的表達分析

Vaspin在肥胖及糖尿病人群循環及脂肪組織中的高表達〔13〕。本文中發現GDM孕婦血清中Vaspin水平明顯高于對照組，且不同BMI，GDM組Vaspin水平均高于對照組，且與孕前及產前體重、BMI、FINS、HOMA-IR正相關。故Vaspin的高表達與肥胖及胰島功能抵抗有關。

特殊的生理特征及傳統的飲食習慣使孕婦在孕期體重增加過快，過多。而肥胖會引起一系列的代謝紊亂及不同程度的胰島素抵抗。妊娠期糖尿病是一種特殊類型的2型糖尿病，伴有不同程度的脂代謝紊亂及胰島素抵抗，脂肪因子Vaspin及Chemerin均是GDM的高危因素，與孕婦的肥胖及脂代謝紊亂有關。

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The Expression of Adipokines Vaspin and Chemerin in Pregnant Women with Gestational Diabetes Mellitus

Li Xiaohong,Chen Zhuo,Ma Runmei*
（Department of Obstetricians and Gynecologists,The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650031,China）

Objective：To explore the relationships between the expression of visceral adipose tissue-derived serine protease inhibitor（vaspin）and Chemerin in serum and visceral omental adipose tissue of pregnant women with gestational diabetes mellitus.Methods：The levels of Vaspin and Chemerin in serum were measured by enzyme-linked immuno sorbent assay（ELISA）.Fasting plasma glucose（FPG）,fasting insulin（FINS）,total cholesterol（TC）,triglyceride（TG）and c-reactive protein（CRP）were also detected.The expression of Vaspin and Chemerin in visceral adipose tissue was detected by western blot.Results：Pregnant women with GDM had higher insulin levels and insulin resistant（IR）than the healthy control group.Serum Vaspin and Chemerin levels were found to be significantly increased in patients with GDM compared with healthy control subjects.Serum Chemerin levels were positively associated with TC,TG and CRP,while Vaspin levels in serum were positively associated with body weight before pregnancy and BMI at delivery,HDL,FINS and HOMA-IR.The expression levels of Chemerin in obese pregnant women obviously increased.Conclusion:Vaspin and Chemerin are closely related to GDM risk factors,obesity and lipid metabolism disorders in pregnant women.

gestational diabetes mellitus;Vaspin;Chemerin;insulin resistance

R714.256

B

2096-2266（2017）08-0044-05

10.3969∕j.issn.2096-2266.2017.08.011

（責任編輯 董杰）

國家自然科學基金資助項目（81160082）

2017-05-16［修改日期］2017-05-25

李曉紅，博士，主治醫師，主要從事圍產醫學研究.

*通信作者：馬潤玫，教授，博士生導師.