塔里木兔人工采精技術(shù)試驗(yàn)研究

木沙·托合提 買買提江·阿布拉克 陳海燕 蘭文旭 庫爾班·吐拉克*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，烏魯木齊，830052；2.天山西部國有林管理局尼勒克分局，尼勒克，835700；3.新疆阿勒泰地區(qū)林業(yè)局，阿勒泰，836500)

塔里木兔人工采精技術(shù)試驗(yàn)研究

木沙·托合提1買買提江·阿布拉克2陳海燕1蘭文旭3庫爾班·吐拉克1*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，烏魯木齊，830052；2.天山西部國有林管理局尼勒克分局，尼勒克，835700；3.新疆阿勒泰地區(qū)林業(yè)局，阿勒泰，836500)

稿件運(yùn)行過程

塔里木兔； 麻醉； 電刺激采精； 按摩采精； 解剖取精

塔里木兔(Lepusyarkandensis)中文俗名野兔、莎車兔[1]。棲息在塔里木盆地海拔900～1 200 m河流沿岸的胡楊(Populuseuphratica)和多枝檉柳(Tamarixramosissima)林中、塔克拉瑪干沙漠四周的半沙漠草原和塔里木河河水泛濫地區(qū)等[2]，是在世界范圍內(nèi)僅分布于新疆塔里木盆地的特有兔種之一。近年來，由于開發(fā)和經(jīng)濟(jì)建設(shè)活動(dòng)的影響，塔里木兔棲息地不斷萎縮，種群數(shù)量日益下降，物種生存面臨嚴(yán)重威脅。因此，開展其繁殖生物學(xué)研究將對(duì)其種群延續(xù)、數(shù)量恢復(fù)、有效保護(hù)與利用具有積極的作用。

兔子屬于刺激性排卵動(dòng)物[3]，人工授精時(shí)需要對(duì)母兔采用外源性激素或藥物誘發(fā)排卵。根據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，公母家兔自然交配按1∶5或1∶8；人工授精時(shí)，公、母兔比為1∶20～1∶30較合適[4]。草兔(Lepuscapensis)人工馴繁，公母自然交配比例為1∶4比較合適[5-6]；不宜多放，因?yàn)橐巴糜幸Ъ艿膼毫?xí)，放多了會(huì)干擾野兔的正常交配，并且野兔的母性較差，對(duì)幼兔也會(huì)造成危害。雖然兔子自然交配配種率高，但這次實(shí)驗(yàn)研究，為今后的野兔人工授精工作提供參考數(shù)據(jù)，有一定的利用價(jià)值。

近年來在新疆為有效保護(hù)與利用塔里木兔資源，已建立人工馴養(yǎng)繁育基地并嘗試將人工采精、同期發(fā)情、人工授精等多種現(xiàn)代動(dòng)物繁殖技術(shù)應(yīng)用在塔里木兔上，但由于塔里木兔個(gè)體小、野性強(qiáng)、許多繁殖生理特性不清楚等原因，塔里木兔繁殖技術(shù)研發(fā)進(jìn)展緩慢。

人工馴養(yǎng)繁殖是野生動(dòng)物保護(hù)，種群延續(xù)、數(shù)量恢復(fù)與利用工作中最為有效的方法之一。其中人工采精是首先要解決的技術(shù)問題，國內(nèi)外已將現(xiàn)代動(dòng)物繁殖技術(shù)應(yīng)用于許多野生動(dòng)物的繁殖上，并已在多種野生動(dòng)物繁殖技術(shù)中取得了進(jìn)展，且相繼開發(fā)了野生動(dòng)物采精、精液保存(建立種質(zhì)資源庫)及野生動(dòng)物人工授精等技術(shù)，目前這些技術(shù)在陸生野生動(dòng)物、水生野生動(dòng)物中都有應(yīng)用。

動(dòng)物人工采精常用方法有：按摩采精法、假陰道采精法、電刺激采精法等。按摩采精法最初由Burrow 和Quinn首先應(yīng)用于家禽和火雞(Meleagrisgallopavo)[7]，后來被世界各地采用于貂(Martesspp.)、狐貍(Vulpesspp.)、兔等其他動(dòng)物。自從蘇聯(lián)研究者于1931年假陰道采精法發(fā)明后，很快被廣泛應(yīng)用在畜牧業(yè)中。1933年由 Kardyinowich及Milowanov創(chuàng)造了兔假陰道和假臺(tái)兔法采取精液，1938年Macirone與Walton在此基礎(chǔ)上又作了進(jìn)一步改進(jìn)[8]。目前假陰道采精法多用于馴化程度較高、性情溫馴的動(dòng)物上。電刺激采精法由Serebrovskii和Sokolovskaja等人發(fā)明，在1934年首先應(yīng)用于水禽[9]。目前，電刺激采精已運(yùn)用在狼(Canislupus)[10]、東北虎(Pantheratigrisaltaica)[11]、東北馬鹿(Cervuselaphusxanthopygus)[12]、林麝(Moschusberezovskii)[13]、梅花鹿(Cervusnippon)[14]、天山馬鹿(Cervuselaphussongaricus)[15]、大熊貓(Ailuropodamelanoleuca)[16]、黑猩猩(Pantroglodytes)[17]、非人靈長(zhǎng)類(non-human primate)[18]等野生動(dòng)物上。解剖取精法方面報(bào)道少，主要是采集附睪內(nèi)的精子用于保存方法的研究[19]，以及體外受精等方面。相關(guān)報(bào)道有，褐家鼠(Rattusnorvegicus)體外受精時(shí)附睪精子優(yōu)于鮮精，此后，張世生等[20]水牛(Bubalusbubalis)研究證明了附睪精子用于體外受精的可行性。陳瑩瑩等[21]采用手握法、電刺激法及附睪采精法采集精液，并進(jìn)行精液品質(zhì)分析，從而得出手握法采集精液為最佳的結(jié)論。

對(duì)于野性較強(qiáng)的野生動(dòng)物，麻醉可以使它們達(dá)到鎮(zhèn)定、鎮(zhèn)靜、肌肉松弛的效果，從而避免采精時(shí)動(dòng)物對(duì)采集人員的傷害。目前，常用的麻醉劑有鹿眠寶、眠乃寧、水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥鈉、陸眠寧、速眠新Ⅱ、陸眠靈、阿佛丁等。周昆等[22]在犬、貓、兔用3%戊巴比妥鈉靜脈注射麻醉劑量為30 mg/kg；徐春忠[23]用眠乃寧對(duì)不同動(dòng)物進(jìn)行麻醉，大熊貓最佳劑量為(1.45±0.20)mL/100 kg，貓科(Felidae)動(dòng)物的推薦劑量是1.9～2.6 mL/100 kg，對(duì)非洲獅(Pantheraleo)劑量稍大(2.81±0.42)mL/100 kg，對(duì)熊科(Ursidae)動(dòng)物的推薦劑量是1.8～3.1 mL/100 kg，狼(6.14±0.75)mL/100 kg[23]。張亞飛等[24]對(duì)犬的試驗(yàn)用速眠新Ⅱ，先肌肉注射0.06 mL/kg，再肌肉注射戊3% 巴比妥鈉0.5 mL/kg，得到較好麻醉效果。從精液采集、麻醉效果上看，適宜不同動(dòng)物的麻醉藥劑量和采精方法，學(xué)術(shù)界仍有不一致的各類報(bào)道。

基于此，本試驗(yàn)以健康、成年塔里木兔為試驗(yàn)對(duì)象，采用常用不同麻醉劑(速眠新Ⅱ、戊巴比妥、烏來糖等)進(jìn)行保定，采用不同采精方法(按摩法、電刺激法及解剖取精法等)進(jìn)行精液采集，研究不同麻醉劑及劑量、不同采精方法對(duì)塔里木兔麻醉及采精效果的影響，為今后人工授精工作的開展提供試驗(yàn)參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物

由新疆烏什縣塔里木兔種源繁育有限責(zé)任公司提供，健康成年純種塔里木公兔80只，體重1 200 g左右，試驗(yàn)動(dòng)物單籠飼養(yǎng)，日糧包括新鮮苜蓿草300 g/只，玉米粒30 g/只，自動(dòng)飲水器飲水。

1.1.2主要儀器及藥品

試驗(yàn)儀器：顯微鏡(OLYMPUS CX23)、電刺激采精儀(型號(hào)：KH-DC 北京坤恒畜牧設(shè)備中心)、數(shù)顯電熱水浴鍋(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn))、電子稱。

藥品：速眠新Ⅱ、蘇3號(hào)(吉林省華牧動(dòng)物保健品有限責(zé)任公司生產(chǎn))、烏來糖(烏拉坦，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司20080610)、戊巴比妥鈉(Sigma P3761)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1分組設(shè)計(jì)

1.2.1.1麻醉藥以及劑量的篩選

試驗(yàn)用公兔隨機(jī)分為3組，每組20只，共60只，每種麻醉劑的每個(gè)不同劑量用5只兔子，速眠新Ⅱ按0.01、0.03、0.05、0.07 mL/kg劑量肌肉注射；3%戊巴比妥鈉按0.3、0.6、0.9、1.2 mL/kg，20%烏來糖按1.0、2.0、3.0、4.0 mL/kg劑量靜脈注射，記錄進(jìn)入麻醉所需時(shí)間，蘇醒所需時(shí)間，觀察麻醉狀態(tài)、呼吸、心跳等情況。

1.2.1.2人工采精方法的篩選

在塔里木兔繁殖季節(jié)試驗(yàn)用公兔隨機(jī)分為3組，每組6只，對(duì)照組采用解剖取附睪精液，試驗(yàn)1組采用電刺激法采精，試驗(yàn)2組采用按摩法采精，前2組隔3 d采1次精液，重復(fù)3次，記錄采精量、精子活力、密度、電刺激電壓、電流、陰莖勃起狀態(tài)等。

1.2.2采精方法

1.2.2.1解剖取精

摘取成年公兔附睪后，立即送到實(shí)驗(yàn)室，在無菌操作室，用滅菌剪刀將包皮和睪丸鞘膜剖開剪取附睪尾部，于37℃恒溫載物臺(tái)上事先預(yù)熱的稀釋液中(稀釋液2 mL)，并用無菌剪刀細(xì)切附睪尾部使精子流入稀釋液中，最后在配有恒溫載物臺(tái)的顯微鏡下觀察，記錄精子活力及密度等各項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.2.2電刺激采精

電刺激采精一般3人操作，1人保定兔子，1人撥動(dòng)主機(jī)開關(guān)，另1人采集精液并記錄。對(duì)公兔麻醉后進(jìn)行采精前的準(zhǔn)備工作。保定員用右手持塔里木兔背部大腿基部，使兩腿自然分開，左手固定頭部保持頭部略高于臀部，保定員用力要適度，既要使公兔安靜，又要防止掙脫。采精員將備好的集精杯(本試驗(yàn)采用1.5 mL離心管)套在公兔陰莖上，將電刺激儀的電壓調(diào)節(jié)到最小檔位，將涂有凡士林的刺激棒從肛門緩慢插入6～8 cm，打開開關(guān)，由低向高慢慢調(diào)整刺激電壓，每檔通電時(shí)間為10 s，斷電3 s，以0.1 V幅度增加電壓至排精。

1.2.2.3按摩采精

所有取精用公兔提前1 d斷水，公兔麻醉處理后，首先操作者按壓膀胱處擠出膀胱內(nèi)尿液以免尿液混入精液。然后，剪去陰莖周圍的長(zhǎng)毛，用生理鹽水沖洗、擦干。采精時(shí)需要3人操作，1人一手抓公兔耳朵將兔子懸掛提起來，另一手呈八字形從腹部到睪丸方向，一松一緊地節(jié)湊性按摩，另一人將兔子后腿岔開，第3個(gè)人一手持離心管或集精杯并套在公兔陰莖上，另一手輕輕按摩睪丸和陰莖一直到排完全部精液。

1.2.3精子活力和密度的評(píng)價(jià)

采精結(jié)束后，取15 μL精液，滴于恒溫載物臺(tái)上預(yù)熱的載玻片上，蓋上蓋玻片，于37℃在20～40倍顯微鏡下觀察精子運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，根據(jù)多個(gè)視野的觀察情況及時(shí)估計(jì)直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子在總精子中的比例，以0～1.0的十級(jí)評(píng)分法評(píng)定精子活力，如有50%的精子做直線運(yùn)動(dòng)，活力計(jì)為0.5，每個(gè)樣本評(píng)價(jià)3次，取平均值；精子密度的評(píng)價(jià)可采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在光學(xué)顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。

1.2.4統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)EXCEL結(jié)果用平均數(shù)(X)。

2 結(jié)果

2.1麻藥劑量及種類對(duì)塔里木兔麻醉效果的影響

由表1可見，隨麻醉藥劑量的增加進(jìn)入麻醉所需時(shí)間縮短，而麻醉持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)；速眠新Ⅱ劑量0.05 mL/kg時(shí)，麻醉所需時(shí)間(6.3±0.4)min，麻醉持續(xù)時(shí)間(47±4.5)min，進(jìn)入良好的麻醉狀態(tài)，劑量0.05 mL/kg時(shí)，麻醉所需時(shí)間縮短(4.0±0.5)min，麻醉持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)到(62±8.5)min，進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)；3%戊巴比妥鈉劑量0.9 mL/kg時(shí)，麻醉所需時(shí)間(7.3±0.4)min，麻醉持續(xù)時(shí)間(63±11.5)min，進(jìn)入良好麻醉狀態(tài)，劑量1.2 mL/kg時(shí)，麻醉所需時(shí)間縮短到(3.2±0.8)min，麻醉持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)到(102±18)min，進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)；20%烏來糖劑量3.0 mL/kg時(shí)，麻醉所需時(shí)間(5.0±0.7)min，麻醉持續(xù)時(shí)間(35±7.5)min，麻醉狀態(tài)良好，劑量4.0 mL/kg時(shí)，麻醉所需時(shí)間縮短到(3.0±0.5)min，麻醉持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)到(95±11.5)min，進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)。

表1麻藥種類及其劑量對(duì)塔里木兔麻醉效果的影響

Tab.1 Effect of anesthetic on tarim rabbits using different types and dosage of anesthetics

2.2 不同方法對(duì)塔里木兔采精效果的影響2.2.1 解剖取精法

由表2可見，6只公兔精子活力之間沒有較大差異，精子活力在0.70～0.85之間，平均為0.79；精子密度在78.33×107～110.67×107/mL之間。

2.2.2 電刺激法對(duì)塔里木兔采精效果的影響

由表3可見，6只公兔射精量在0.10～0.15 mL之間，平均為0.12 mL；精子活力在0.10～0.60之間，平均為0.45；陰莖勃起狀態(tài)較差，精子密度在0.23×107～69.53×107/ mL，大部分精液成乳白色，部分精液伴隨有尿液成乳黃色；電刺激電壓0.1～3 V，平均為1.42 V，電刺激時(shí)通電10 s，斷電3 s；刺激次數(shù)最高達(dá)4～60次，平均為27次。

表2 解剖取精法對(duì)塔里木兔采精效果的影響

Tab.2 Effect of semen collection on tarim rabbits by anatomy

2.2.3 按摩法對(duì)塔里木兔采精效果的影響

由表4可見，6只公兔射精量差異較大在0.10～0.2 mL之間，平均為0.15 mL；精子活力0.50～0.75，平均為0.65；多數(shù)公兔陰莖勃起狀態(tài)較好，精液成乳白色，精子密度在20.33×107～69.33×107/ mL之間。

表3 電刺激法對(duì)塔里木兔采精效果的影響

Tab.3 Effect of semen collection on tarim rabbits by electrostimulation

表4 按摩法對(duì)塔里木兔采精效果的影響

Tab.4 Effect of semen collection on tarim rabbits by massage

3 討論

3.1 麻藥劑量及其種類對(duì)塔里木兔麻醉效果的影響

為合理地使用動(dòng)物麻醉藥最終獲得理想的麻醉效果，試驗(yàn)中，選擇安全、有效的麻醉方法是保證試驗(yàn)成功的重要因素。麻醉劑的濃度、劑量、種類、給藥方式等對(duì)動(dòng)物麻醉效果影響較大。烏拉坦是無色透明結(jié)晶，學(xué)名氨基甲酸乙酯，又名烏來糖，常用于動(dòng)物的靜脈注射。戊巴比妥鈉是白色粉末，多用于犬、貓、兔麻醉時(shí)靜脈注射。速眠新Ⅱ是一種復(fù)方制劑，具有中樞神經(jīng)性鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜和肌肉松弛作用，有著麻醉起效快、誘導(dǎo)期短等特點(diǎn)，肌肉注射。

麻醉藥的說明書會(huì)告知使用量，但動(dòng)物的個(gè)體存在差異，種類不同等原因，在試驗(yàn)中一定要用量逐漸增加。目前麻醉藥在很多動(dòng)物上的使用劑量并不十分清楚。陳秋羊等[25]對(duì)林麝的電刺激采用速眠新Ⅱ肌肉注射0.035～0.050 mL/kg。王相友等[26]對(duì)犬的研究速眠新Ⅱ推薦劑量為0.04～0.05 mL/kg。塔里木馬鹿(Cervuselaphusyarkandensis)[27]的研究報(bào)道，半麻醉試驗(yàn)用量為每100 kg 體重注射鹿眠寶0.5 mL。山羊的研究報(bào)道[28]建議劑量為0.06～0.08 mL/kg(速眠新Ⅱ、肌注)。張亞飛等[24]對(duì)犬麻醉實(shí)驗(yàn)采用速眠新(0.06 mL/kg)待動(dòng)物進(jìn)入麻醉期后，再臀部肌肉注射戊巴比妥鈉(3%、0.5 mL/kg)并取得了良好的麻醉效果。周小林等[29]采用速眠新Ⅱ按0.1 mL/kg臀部肌注，聯(lián)合3%戊巴比妥鈉0.2 mL/kg靜脈注射麻醉，以及單獨(dú)使用3%戊巴比妥鈉按1 mL/kg靜脈麻醉，得到戊巴比妥鈉聯(lián)合速眠新Ⅱ注射麻醉效果好的結(jié)果。陳國英等[30]烏來糖、安定、強(qiáng)痛定在家兔麻醉試驗(yàn)，25%烏來糖(4 mL/kg)加安定加強(qiáng)痛定成功率高，單純使用25%烏來糖靜脈注射，發(fā)現(xiàn)大多數(shù)家兔在實(shí)驗(yàn)手術(shù)時(shí)需加麻醉劑，穩(wěn)定性較差。丁運(yùn)萍等[31]的研究結(jié)果證實(shí)了3種不同的注射方式會(huì)得到不一樣效果；肌肉注射被認(rèn)定為是最方便的注射方法之一，其作用效果適中但是需要較長(zhǎng)的時(shí)間來誘導(dǎo)；對(duì)于小型動(dòng)物采用最多的莫過于腹腔注射，鑒于腹腔在動(dòng)物體的特殊位置這種注射方式可以產(chǎn)生較長(zhǎng)的時(shí)間的麻醉效果，非常適用于長(zhǎng)時(shí)間操作的試驗(yàn)；靜脈注射也是一種較為普遍的注射方式，然而只適用于一些特別需要靜脈藥物注射或者需要進(jìn)行緊急麻醉時(shí)才適用此種注射方式，其原因是操作難度大，不易掌握[31]。

本試驗(yàn)準(zhǔn)確稱量塔里木兔體重，選用用量的下線進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，并根據(jù)塔里木兔的反應(yīng)，以及保定者對(duì)塔里木兔肢體力量的感應(yīng)來確定是否需要添加用量。本試驗(yàn)單獨(dú)使用不同劑量速眠新Ⅱ、3%戊巴比妥鈉和20%烏來糖的麻醉效果來看，隨著3種不同麻醉藥劑量增高麻醉所需時(shí)間縮短，麻醉持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)趨勢(shì)，其中速眠新Ⅱ最佳劑量為0.05 mL/kg；3%戊巴比妥鈉的最佳劑量為0.9 mL/kg；20%烏來糖為3.0 mL/kg，雖然3%戊巴比妥鈉和20%烏來糖比速眠新Ⅱ麻醉持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，但注射量大、靜脈注射、操作麻煩、蘇醒慢、副作用大、安全性差，再加上塔里木兔體型小、性情暴烈、野性強(qiáng)，易受驚嚇，而且靜脈血管很細(xì)，很難注射麻醉藥，因此，塔里木兔選用速眠新Ⅱ肌肉注射有較好的麻醉效果。

3.2 不同方法對(duì)野生動(dòng)物采精效果的影響

近年，隨著野生動(dòng)物保護(hù)與利用的發(fā)展，一些先進(jìn)的繁殖技術(shù)應(yīng)用于野生動(dòng)物的人工繁殖中，雖對(duì)改良品種和提高其生產(chǎn)性能有一定成效，但是由于對(duì)不同方法采精，精液保存方面的研究不足，進(jìn)而嚴(yán)重制約了人工繁殖技術(shù)的研究和進(jìn)一步推廣應(yīng)用。人工授精是保護(hù)動(dòng)物資源，擴(kuò)大動(dòng)物品種數(shù)量的一種手段，而其首要的工作是采精。采精試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)動(dòng)物特性采用不同的采精措施。家畜、溫順動(dòng)物、馴化程度較高動(dòng)物采用按摩法或假陰道法采精；而對(duì)馴化程度低，按摩反應(yīng)較差的動(dòng)物，采用電刺激法[32]。

國內(nèi)外不同學(xué)者對(duì)不同采精方法對(duì)動(dòng)物采精效果的看法不一。孔慶松等[33]人認(rèn)為，狐貍的采精按摩法較電刺激法好。陳瑩瑩等[21]采用不同3種采精方采集精液，認(rèn)為手握法采集精液最佳。趙家才等[34]針對(duì)大額牛和婆羅門牛，對(duì)電刺激法、按摩法和假陰道法3種方法的采精效果進(jìn)行了比較，認(rèn)為假陰道法是最好。Setioko和Hetzel[35]對(duì)ALAABIO雄鴨采精效果采用3種方法研究了精液品質(zhì)與受精率，結(jié)果是假陰道方法效果最佳。Palmer[36]對(duì)肉牛研究采用直腸按摩法和電刺激法采精，認(rèn)為精子形態(tài)不受采精方法的影響，但直腸按摩法精子活力、活率低于電刺激采精法。

本試驗(yàn)采用解剖取精法、電刺激法及按摩法采集精液，并進(jìn)行了精液品質(zhì)分析，本試驗(yàn)采精結(jié)果來看，3種采精方法均能采集到精液，解剖取精法(對(duì)照組)精子活力較高，達(dá)0.70以上，但需要屠宰公兔。與其相比按摩法采精法效果最佳，采精量達(dá)0.20 mL，精子活力達(dá)0.65以上且操作簡(jiǎn)單易行，其次為電刺激法，射精時(shí)電壓為0.1～3.0 V，采精量達(dá)0.15 mL，精子活力為0.60左右。陳玉等[37]用假陰道法采集公兔精液，每次可采精液 0.2～2 mL。王亞鳴[38]測(cè)定的家兔采精量0.5～1.5 mL，Paál[39]對(duì)兔子的采精過程中采精量從0.4 mL逐漸提高達(dá)到1.0 mL，平均采精量(0.68±0.34)mL，平均精子活力達(dá)到(55.55±26.63)%與本試驗(yàn)結(jié)果有較大的差異，這可能是家兔老實(shí)、個(gè)體大，采精方便，采用的方法不一樣等原因。

另外，公兔進(jìn)行電刺激采精時(shí)，有摻雜尿液的現(xiàn)象。這可能是電刺激采精電壓過高，刺激過度的原因。不同動(dòng)物，不同個(gè)體對(duì)電流刺激強(qiáng)度的敏感度不同，研究報(bào)道，黑吼猴(Alouattacaraya)的電刺激采精電壓為2～8 V，插入深度為9.8～14.5 cm[40]。林麝的采精電壓為3～5 V[13]。盤羊(Ovisammon)的采精電壓為6～8 V[41]。王柏林等對(duì)梅花鹿采精試驗(yàn)過程中采用4～6 V電壓，插入肛門深度為20 cm[42]。黃少東[43]的報(bào)道梅花鹿電刺激電壓為3～5 V。本試驗(yàn)結(jié)果表明，塔里木兔一般射精時(shí)電壓為0.1～3 V范圍內(nèi)，插入深度為6～8 cm之間。陰莖勃起與射精沒有相伴，也可以不勃起就射精，陰莖勃起較差。

總而言之，解剖取精法(對(duì)照組)雖然在精子活力、密度等方面效果最好，但成本太高，只能一次性采精，對(duì)優(yōu)良種公兔來說，不能充分利用。按摩法精子活力、密度、陰莖勃起狀態(tài)等各方面效果較好，精液成乳白色，操作簡(jiǎn)單，對(duì)兔子不會(huì)產(chǎn)生不良刺激。電刺激采精法采精效果不如按摩法，再者電刺激操作麻煩，另外，電刺激時(shí)電壓過高、刺激強(qiáng)度過強(qiáng)等方面還存在許多問題。因此，塔里木兔按摩法采精得到的效果最佳，其次為電刺激采精。

致謝：感謝導(dǎo)師庫爾班教授的精心指導(dǎo)；在試驗(yàn)研究期間獲得新疆塔里木兔種源繁育有限責(zé)任公司的大力支持，貴公司為本研究提供了很多幫助，為此對(duì)貴公司領(lǐng)導(dǎo)及相關(guān)工作人員表示衷心感謝；衷心感謝新疆維吾爾自治區(qū)林業(yè)廳野生動(dòng)物保護(hù)處處長(zhǎng)史軍的關(guān)心和支持!

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Yarkand hare； Electrical stimulation method； Anesthesia； Massage method； Anatomical semen collection method

塔里木兔(Lepusyarkandensis)為中國特有兔種，是國家Ⅱ級(jí)保護(hù)動(dòng)物。近年來國內(nèi)野兔需求市場(chǎng)日趨火爆，其巨大的經(jīng)濟(jì)效益，造成新疆塔里木兔偷捕盜獵、非法倒賣時(shí)有發(fā)生，并呈日益上升趨勢(shì)。人工馴養(yǎng)繁殖是野生動(dòng)物保護(hù)，種群延續(xù)、恢復(fù)種群數(shù)量與開發(fā)利用等工作中最為有效的方法之一。其中人工采精是首先要解決的技術(shù)問題。本文以塔里木兔為試驗(yàn)對(duì)象，采用3種麻藥(速眠新Ⅱ、3%戊巴比妥鈉、20%烏來糖)進(jìn)行藥物保定，并采用不同方法(解剖取精法、電刺激法、按摩法)進(jìn)行精液采集，探索適合塔里木兔的麻藥種類、劑量和采精方法。結(jié)果表明，3種麻醉藥物均能有效誘導(dǎo)麻醉，其中速眠新Ⅱ(0.05 mL/kg)的麻醉效果最佳，其次為3%戊巴比妥鈉(0.9 mL/kg)，20%烏來糖(3.0 mL/kg)。本試驗(yàn)采用的3種采精方法來看，3種采精方法均能采集到精液，解剖取精法(對(duì)照組)精子活力較高，達(dá)0.70以上，但需要屠宰公兔。與其相比，按摩法采精法效果最佳，采精量達(dá)0.20 mL，精子活力達(dá)0.65以上且操作簡(jiǎn)單易行；其次為電刺激法，射精時(shí)電壓為0.1～3.0 V，采精量達(dá)0.15 mL，精子活力為0.60左右。

Experimental Study of Semen Collection from Captive Yarkand Hare

Musha Tuoheti1Maimaitijiang Abulake2Chen Haiyan1Lan Wenxu3Kuerban Tulake1*

(1.College of Animal Science，Xinjiang Agricultural University，Urumqi，830052，China；2.Nilka Branch Station，F(xiàn)orestry Administration Bureau of Western Tianshan，Nilka，835700，China；3.Forestry Bureau of Altay Prefecture，Altay，836500，China)

Yarkand hare is endemic to China，and listed as a second-class national protected species.In recent years，domestic market demand for wild rabbit has increased and the resulting potential for economic benefit has led to increasing levels of poaching and illegal trade of Yarkand hare.Domestication and captive breeding is one of the most effective ways for wildlife protection，population maintenance and recovery，and exploitation.Semen collection is one of the first technical problems to be solved in captive breeding.We evaluated 3 kinds of anesthetic drugs (sumianxinⅡ，3% pentobarbit and 20% Urethane)used to sedate Yarkand hare，and 3 methods (massage，electrical stimulation，and anatomical semen collection)to collect semen.The results showed that 3 kinds of anesthetic drugs can effectively induce anesthesia，in which Sumianxin II (0.05 mL/kg)has the best anesthetic effect，followed by 3% sodium pentobarbital (0.9 mL/kg)，and 20% ethylurethanm (3.0 mL/kg).The test results showed that semen can be collected effectively by using 3 kinds of semen collection methods.Sperm motility of semen collected by anatomical method (control group)was the highest (over 0.70)，but the disadvantage of this method was that male rabbits had to be slaughtered.The massage method was more suitable and easy to operate，and yielded semen volume up to 0.20 mL，with sperm motility over 0.65.By electrical stimulation，semen volume reached 0.15 mL with sperm motility of about 0.60，with voltage at 0.1-3.0 V for ejaculation.

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2013211A029)；橫向課題(塔里木兔快繁技術(shù)研發(fā))

木沙·托合提，男，26歲，碩士研究生；主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究。E-mail：1350896482@qq.com

*通訊作者：庫爾班·吐拉克，E-mail：kturak@sina.com

2016-11-09

S865.42

A

修回日期：2017-01-29

發(fā)表日期：2017-05-10

2310-1490(2017)02-215-07