高危HPV基因型檢測在宮頸癌篩查中的應用價值

蘇 華，陳 琛

高危HPV基因型檢測在宮頸癌篩查中的應用價值

蘇 華，陳 琛

目的探討高危人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)基因型檢測在宮頸癌篩查中的應用價值。方法選取我院2012年1月—2016年2月行宮頸癌篩查的10 482例，均行宮頸脫落細胞液基細胞學檢查(TCT)和人乳頭狀瘤病毒(HPV)基因型檢測，觀察HPV基因型與年齡、TCT結果及病理分型的相關性。結果與<21歲組比較，21～29歲組低危人乳頭狀瘤病毒(L-HPV)陽性率降低，差異有統計學意義(P<0.05)；與21～29歲組比較，30～65歲組、>65歲組HR-HPV陽性率均升高，差異有統計學意義(P<0.05)；與30～65歲組比較，>65歲組HR-HPV陽性率升高，差異有統計學意義(P<0.05)。不同TCT結果HR-HPV及L-HPV陽性率比較均差異有統計學意義(P<0.05)；病理分型為正常(慢性宮頸炎)、宮頸上皮內瘤變(CIN)Ⅱ級、CINⅡ～Ⅲ級、CINⅢ級及宮頸浸潤癌的HR-HPV及L-HPV陽性率比較差異均有統計學意義(P<0.05)。結論HR-HPV基因型檢測在宮頸癌篩查中具有重要的臨床意義。

宮頸癌；人乳頭狀瘤病毒；基因檢測

持續的高危人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)感染是宮頸癌癌前病變的危險因素。通過HR-HPV基因型檢測，可早期發現宮頸癌癌前病變，從而降低宮頸癌的發病率和死亡率。本文對HP-HPV基因型檢測與宮頸病理分型進行調查分析，旨在探討HR-HPV與宮頸病變的相關性，為臨床篩查提供理論依據，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2012年1月—2016年2月行宮頸癌篩查的10482例，其中<21歲組54例，21～29歲組1420例，30～65歲組8855例，>65歲組153例，均行宮頸脫落細胞液基細胞學檢查(TCT)和人乳頭狀癌病毒(HPV)基因型檢測，符合2012年美國宮頸癌篩查推薦指南[1]，同時排除伴急性生殖道炎癥及其他婦科疾病、既往行全子宮切除術、1周內有陰道用藥史、近期接受過HPV治療者。所有患者均知情同意且簽署知情同意書，本研究經醫院倫理委員會審查并通過。

1.2檢查方法

1.2.1TCT檢測方法：嚴格按照宮頸脫落細胞取樣步驟常規取材，即擴陰器充分暴露宮頸口，擦去分泌物，用宮頸刷深入宮頸口，順時針方向采集移行帶宮頸脫落細胞送檢。經Thin Prep 2000全自動超薄液基細胞學檢測系統(美國Hologic公司)制備成均勻的薄層細胞涂片，將玻片進行染色固定，請專業婦科病理醫師進行細胞學診斷。采用2001年診斷報告分級標準[2]，分為正常(炎癥)、非典型鱗狀細胞(ASCUS)、鱗狀上皮內低度病變(LSIL)、鱗狀上皮內高度病變(HSIL)及鱗狀細胞癌(SCC)。

1.2.2HPV基因型檢測：采用HPV基因分型檢測基因芯片試劑盒(廣東凱普生物技術有限公司)，定性檢測宮頸樣本中常見的23種HPV基因型，包括17種高危型(即HR-HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)和6種低危型(即L-HPV6、11、42、43、81、83)。所需儀器包括PCR儀、核酸分子快速雜交儀、基因芯片-微陣列掃描分析儀，常規提取宮頸黏液脫落細胞DNA，并進行擴增，反應體系嚴格按照說明書，擴增條件為：25℃ 10 min，94℃ 10 min，94℃ 20 s，56℃ 30 s，72℃ 20 s，循環40次，72℃ 5 min延伸，擴增后產物HPV DNA與基因芯片探針進行雜交，通過洗脫、顯色、掃描分析等步驟確定標本是否感染及感染亞型。

1.2.3病理學檢查：若TCT出現異常，于可疑病變區行一點或多點宮頸活組織病理形態學檢查，由2位以上病理專家進行診斷。病理分級：①正常(慢性宮頸炎)；②宮頸上皮內瘤變(CIN)Ⅰ級；③CINⅡ級；④CINⅢ級/宮頸原位癌(CIS)；⑤宮頸浸潤癌。

1.3統計學方法 運用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計數資料采用卡方檢驗，以率(%)表示。以α=0.05為檢驗水準。

2 結果

2.1不同年齡段人群HPV基因型陽性率比較 本文HPV總感染率為17.7%(1856/10482)，其中HR-HPV占13.1%(1371/10482)，L-HPV占4.6%(485/10482)。與<21歲組比較，21～29歲組、30～65歲組HR-HPV及L-HPV陽性率降低，>65歲組HR-HPV陽性率升高，差異無統計學意義(P>0.05)，而>65歲組L-HPV陽性率降低，差異有統計學意義(P<0.05)；與21～29歲組比較，30～65歲組、>65歲組HR-HPV陽性率均升高，差異有統計學意義(P<0.05)，而L-HPV陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)；與30～65歲組比較，>65歲組HR-HPV陽性率升高，差異有統計學意義(P<0.05)，而L-HPV陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 不同年齡段人群HPV基因型陽性率比較[例(%)]

注：HPV指人乳頭狀瘤病毒，HR-HPV指高危型人乳頭狀瘤病毒，L-HPV指低危型人乳頭狀瘤病毒；與<21歲組比較，aP<0.05；與21～29歲組比較，cP<0.05；與30～65歲組比較，eP<0.052.2不同TCT結果及病理分型與HPV基因型檢測結果比較 TCT結果異常852例，異常率為8.1%。不同TCT結果HR-HPV及L-HPV陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)；病理分級為正常(慢性宮頸炎)、CINⅡ級、CINⅡ～Ⅲ級、CINⅢ級、宮頸浸潤癌HR-HPV及L-HPV陽性率比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 不同TCT結果及病理分級與HPV基因型檢測結果比較[例(%)]

注：TCT指宮頸脫落細胞液基細胞學檢查，HPV指人乳頭狀瘤病毒，HR-HPV指高危型人乳頭狀瘤病毒，L-HPV指低危型人乳頭狀瘤病毒，ASCUS指非典型鱗狀細胞，LSIL指鱗狀上皮內低度病變，HSIL指鱗狀上皮內高度病變，SCC指鱗狀細胞癌，CIN指宮頸上皮內瘤變2.3TCT結果與病理分級的相關性 病理診斷為慢性宮頸炎569例，TCT為452例，符合率79.4%，病理診斷宮頸浸潤癌的18例，TCT為13例，符合率為72.2%，見表3。

表3 不同年齡人群(10 482例)宮頸脫落細胞液基細胞學檢查結果與病理分級的相關性[例(%)]

注：ASCUS指非典型鱗狀細胞，LSIL指鱗狀上皮內低度病變，HSIL指鱗狀上皮內高度病變，SCC指鱗狀細胞癌，CIN指宮頸上皮內瘤變

3 討論

臨床侵襲性宮頸癌多為HR-HPV16和HR-HPV18感染所致[3]，其次為HR-HPV45、31和33感染。由于HPV感染是一個無癥狀、病情不斷演變的過程，疾病早期不易察覺，往往錯過最佳治療時機，因此，通過早期篩查HR-HPV可盡早預測和發現宮頸癌及癌前病變。本研究TTC分型為SCC中HR-HPV感染率高達92.9%，推測HR-HPV篩查可發現部分宮頸癌患者。然而，宮頸癌HR-HPV篩查最重要的意義并不是證實癌變患者HR-HPV高感染率，而是在疾病早期發現更多的癌前病變患者，爭取早期治療。本研究顯示，CINⅠ、CINⅡ、CINⅡ～Ⅲ、CINⅢ及宮頸浸潤癌HR-HPV感染率分別為38.0%、36.1%、61.9%、68.8%、75.7%、94.4%，其感染率隨病理分級嚴重程度的增加而逐漸升高，與趙旭曄等[4]研究一致。

宮頸癌篩查結果與年齡密切相關[5]。本研究對不同年齡段人群HPV感染情況進行了統計分析，發現<21歲組與>65歲組HR-HPV感染率較高。有研究顯示，<20歲組HR-HPV感染率較高，但多為單次一過性HPV感染陽性，無長期持續性感染，其組織學病理診斷多為陰性，過度的干預和治療可能會潛在影響生育能力[6]。Rositch等[7]對持續HR-HPV感染進行了系統評價，通過對全球HPV持續感染模式進行綜合分析，探討女性宮頸HPV感染的持續時間及其對宮頸異常病變的影響，將持續性定義為至少兩個時間點的HPV陽性，發現12個月之后HPV復檢陽性與宮頸癌前病變密切相關。HPV感染持續性因地域和基因型的不同而產生差異，其平均持續時間為9.8個月，HR-HPV持續時間(9.3個月)較L-HPV持續時間(8.4個月)更長，其中HR-HPV16、31、33和52持續時間最長，而HR-HPV16持續時間(12.4個月)較廣泛關注的HR-HPV18持續時間(9.8個月)更長。有文獻報道，大范圍篩查不宜在<20歲女性中開展[6]，而30～65歲為宮頸病變和HR-HPV持續感染的高發人群，建議對潛在HR-HPV感染的女性進行長期、有序的組織學隨訪。

本研究分析HPV在宮頸癌篩查中的應用價值，為臨床早期篩查提供理論基礎，盡早發現潛在的宮頸癌前病變，避免過度醫療。

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R737.33

B

1002-3429(2017)09-0075-03

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.09.027

2017-05-04 修回時間：2017-06-13)

河北省衛生和計劃生育委員會青年基金項目(20120158)；河北省張家口市科技計劃項目(12110051D)

075000 河北 張家口，河北北方學院附屬第一醫院檢驗科(蘇華)，重癥醫學科(陳琛)