甲狀腺細針穿刺細胞學涂片的巴氏染色分析

陳倩

摘要：目的 討論甲狀腺細針穿刺細胞學檢查（fine needle aspiration cytology， FNAC）的涂片制作及巴氏染色過程，出現的影響涂片質量的因素。方法 對1742例甲狀腺FNA涂片，采用巴氏染色法染色后鏡下觀察結果。結果 鏡下可觀察到甲狀腺濾泡上皮細胞核和胞漿均呈藍綠色，易區分。細胞核毛玻璃結構，核溝、核內包涵體等可見。結論 甲狀腺FNA涂片涂片后一定要及時固定，否則易腫脹變形，不易診斷。染色時需準確把握蘇木素染色時間，鹽酸酒精分化時間，才能使染色后胞核與胞漿著色分明，易區分。涂片固定時間過久、鹽酸酒精濃度過低，穿刺時出血較多、涂片過厚等都會影響紅細胞著色。

關鍵詞：甲狀腺FNA；細胞學涂片；巴氏染色

中圖分類號：R472.3 文獻標識碼：A 文章編號：1006-1959（2017）19-0176-02

甲狀腺FNA，是一種安全、快速的檢查手段，對于患者的創傷小，且對甲狀腺疾病性質的診斷準確性高[1-2]。經超聲引導下甲狀腺細針穿刺（US-FNA），還可對微小結節進行穿刺[3]，有助于病變的早期發現、合理治療。而對甲狀腺疾病的明確診斷需要依靠病理學，因此，提高甲狀腺FNA涂片的質量，對于甲狀腺疾病性質的診斷至關重要。

1資料與方法

1.1一般資料

以2016年本科室甲狀腺FNA行細胞學檢查的病例為研究對象，共有1742例被納入本研究。納入標準：經B超檢查需進行甲狀腺FNA病例；患者及家屬同意或要求行甲狀腺FNA細胞學檢查。男性408例，女性1334例；年齡14～84歲。

1.2 方法

1.2.1 甲狀腺FNA細針穿刺涂片經B超引導下進行甲狀腺結節細針穿刺，對穿刺出的組織進行抹片。組織盡量涂抹均勻，然后將涂片放入95%酒精中固定30 min。

1.2.2 巴氏染色先將涂片浸入75%的酒精溶液1 s左右，水洗后用蘇木素染液染色3～5 min，再放入1.5%的鹽酸酒精溶液中5～10 s，經水洗，再依次過75%、95%的酒精溶液約10 s，然后放入EA/OG溶液中3～5 min，染色后依次過95%的酒精溶液和無水酒精，最后浸入二甲苯溶液，濕封后鏡檢。

2結果

甲狀腺FNA細胞學涂片，經巴氏染色后鏡下觀察。可見甲狀腺濾泡上皮細胞，核呈藍綠色，胞漿呈藍綠色。膠質成紅色或藍綠色，紅細胞呈淡藍色或淡粉色，見圖1。

經統計195例甲狀腺細胞學涂片鏡下觀察到濾泡上皮成分較少。其中164例無法準確診斷，需進一步檢查。22例診斷為甲狀腺囊性變，3例意義不明確的非典型性變，2例亞急性甲狀腺炎，1例嗜酸性變。濾泡上皮成分少可能與甲狀腺結節小，結節本身病變性質有關。在染色過程中，有少數涂片出現脫片現象，通常出現在膠質結節中。可能是由于穿刺出的膠質多，抹片時膠質較厚而引起的。

在巴氏染色過程中發現：涂片固定時間過久，如超過72 h；或使用濃度過低的鹽酸酒精溶液分化，會出現紅細胞著色明顯，見圖2。這些紅細胞會遮擋所需觀察的甲狀腺濾泡上皮細胞，進而影響診斷。蘇木素染色時間太短，胞漿和核不易區分；染色時間過長，胞核著色深，無法觀察核溝和核內假包涵體。通過鹽酸酒精的分化，可有效分化胞核蘇木素著色，淡化涂片中EA/OG液對紅細胞著色。

3討論

甲狀腺FNAC是細胞病理學的重要組成部分，其診斷結果與組織學診斷結果符合率較高[4]。一些微小乳頭狀癌病例，由于術后大體標本取材未取到穿刺時相應的部位，而導致其診斷結果與細胞學結果不符。通常，影像學檢查無法明確甲狀腺疾病的性質，而甲狀腺FNAC對于鑒別甲狀腺結節的良惡性具有較高的準確度和敏感度[5]。但是，甲狀腺FNAC對于濾泡性腫瘤良惡性無法鑒別。故影像學檢查結合病理診斷，可以更有效、準確地確定甲狀腺疾病的性質[6]。

在所有甲狀腺FNA涂片中，有195例甲狀腺細胞學涂片中濾泡上皮細胞含量較少，其中的164例無法診斷。這與操作者的穿刺技術，以及結節的大小、位置等因素有關[7]。手無法觸及的微小結節，經超聲引導下可準確定位。一些出血皺縮的甲狀腺結節，穿刺出的組織量相對較少，也會出現細胞涂片中濾泡上皮成分較少的情況。

此外，有63例涂片鏡下可見血性成分，其中45例濾泡上皮成分少，無法明確診斷，僅8例為甲狀腺出血囊性變，鏡下可見組織細胞。對于無法明確診斷的病例，我們不能排除血液成分遮擋甲狀腺濾泡上皮細胞，而導致觀察到的細胞量較少。抑或穿刺時出血而影響了穿刺出的細胞量。經過巴氏染色，絕大部分的紅細胞在鹽酸酒精溶液的影響下，著色較淡。但出血囊性變的結節，或者結節周圍血供較豐富時，穿刺時易引起出血。當穿刺的血液成分過多，涂片較厚時，鹽酸酒精溶液對紅細胞著色的淡化不明顯。

染色時，蘇木素染色一般3～5 min，染色后的核漿易區分，且毛玻璃結構、核溝、核內假包涵體明顯可見。若蘇木素染色時間過短，胞核和胞漿著色淺，不易區分；染色時間過久，核深染，核溝、核內假包涵體等病理特征不易觀察。經1%～1.5%的鹽酸酒精溶液作用后，紅細胞著色淡。但血液成分較多且涂片較厚，固定過久或者使用濃度較低的鹽酸酒精染色，紅細胞均正常著色，淡化不明顯。因此，穿刺后的涂片一定要及時固定，但不能固定時間過久。一般來說，經95%酒精溶液固定半個小時后即可進行巴氏染色，固定的時間最好不要超過48 h。染色時宜用1%～1.5%濃度的鹽酸酒精溶液，一般需分化5～10 s。鹽酸酒精濃度過高，引起所有細胞損傷。

總之，甲狀腺細針穿刺細胞學涂片的質量受多種因素的影響，如穿刺的規范及準確操作，細胞涂片后的及時固定，巴氏染色時蘇木素染色時間及鹽酸酒精溶液的濃度和染色時間。在制片時，要及時固定、準確把握蘇木素染色時間和鹽酸酒精溶液分化時間，以平衡甲狀腺濾泡上皮細胞核與胞漿的著色，有效地提高涂片制作的質量。

參考文獻：

[1]馬騰，朱強，石文媛，等. 超聲引導下細針抽吸細胞學檢查對甲狀腺結節的診斷價值[J].中國耳鼻喉頭頸外科，2015（10）：507-509.

[2]陳婭婭，嚴赟，司徒明珠，等. 超聲引導下負壓細針抽吸細胞學檢查對甲狀腺結節診斷價值[J]. 現代實用醫學，2015（9）：1232-1234.

[3]周偉，倪曉楓，葉廷軍，等.超聲引導下小于5mm甲狀腺結節細針穿刺細胞學與超聲評估的應用價值[J].2014（1）：7-10.

[4]陳茂勝.甲狀腺細針穿刺細胞學檢查在甲狀腺結節診斷中的應用[J].2016，10（18）：1065-1067.

[5]韋明. 超聲引導下細針穿刺細胞學檢查對甲狀腺良惡性結節的診斷價值[J]. 臨床醫學研究與實踐， 2016， 1（10）：84-84.

[6]嚴佳梅，黃品同，游向東，等.超聲造影結合細針穿刺對甲狀腺癌的診斷價值[J].中華超聲影像學雜志，2014，23（3）：222-226.

[7]鄔宏恂，張冰潔，臧亞萍，等.甲狀腺結節超聲引導下細針抽吸細胞學無法診斷結果影響因素分析[J].臨床超聲醫學雜志，2014（8）：523-526.

編輯/李樺endprint