高效液相色譜法測定硫酸阿托品滴眼液的含量

鄧曉玲

(江蘇省鹽城市第一人民醫院，江蘇 鹽城 224000)

高效液相色譜法測定硫酸阿托品滴眼液的含量

鄧曉玲

(江蘇省鹽城市第一人民醫院，江蘇 鹽城 224000)

目的建立測定硫酸阿托品滴眼液含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱采用瑞士Spherigel C18柱(150 mm×4.6 mm，5 m)，流動相為甲醇 -0.5%KH2PO4(35∶65)，流速為 1 mL／min，檢測波長為 217 nm。結果 硫酸阿托品質量濃度在 40.0～163.0 g／L范圍內與峰面積線性關系良好（r＝0.999 86，n＝7）；平均回收率為 101.33% ，RSD ＝1.74%(n＝9)；日內精密度 RSD 分別為 0.52% ，0.33% ，0.30%(n＝5)；日間精密度 RSD分別為1.67%，1.20%，0.89%(n＝5)。結論 該法簡便、敏捷、準確，可用于硫酸阿托品的質量控制。

高效液相色譜法；硫酸阿托品；含量

硫酸阿托品滴眼液是常用的眼科制劑，用于治療角膜潰瘍、角膜炎、虹膜睫狀體炎，同時可用于眼底檢查前的散瞳，也用于青少年假性近視的驗光檢查及治療[1]。我院采用雙向中和滴定法測定其含量[2]，但終點不易觀察；且硫酸阿托品分子中含有酯鍵，弱酸集中性條件下較穩定，在堿性溶液中分解，如加熱則分解更迅速，生成莨菪酸及莨菪醇而失效，故滴定用標準溶液不穩定，需經常標定，比較煩瑣。同時，該制劑在消毒后含量一直高于消毒前，可能消毒后硫酸阿托品酯鍵水解產生酸根，而酸堿滴定法測定的是酸根，所以該法不能直接反映其中阿托品的含量。采用酸性染料比色法[3]，但其所用各種賦形劑在紫外分光光度計上測定有不同程度的干擾，含量測定結果偏低，給生產帶來不必要的麻煩。采用BaSO4比濁法[4]、系數倍率法[5]、電荷轉移中和分光光度法[6]、電子對比色法[7]、多波長吸光度比之差法[8]、反相高效液相色譜法[9]等方法測定硫酸阿托品滴眼液中主藥的含量等，但操作比較煩瑣，且方法不穩定。高效液相色譜（HPLC）法測量硫酸阿托品片劑[10]和滴鼻劑[11]含量的報道，均證明了方法的可行性和優越性。本試驗中采用HPLC法測定硫酸阿托品滴眼液的含量，操作簡便，能真實反映所測硫酸阿托品的含量，對醫院制劑的質量控制具有一定的指導意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

紫外可見分光光度計（美國瓦里安醫療系統公司）；Agilent1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；BP211D型準微量分析精密電子天平（德國賽多利斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

硫酸阿托品滴眼液（批號分別為150102，150202，150321，醫院制劑）；硫酸阿托品對照品（含量為 0.5 g ／L，批號為1611261，天津金耀藥業有限公司）；氯化鈉（含量為 10 mL∶0.9%，批號為 7A89D3，中國大冢制藥有限公司）；對羥基苯甲酸乙酯（批號為150801，石家莊第一制藥集團新華制藥廠）；磷酸二氫鉀（批號為150802，上海新華化工廠）；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 系統適用性試驗

色譜柱：瑞士 Spherigel-C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇 -0.5% 磷酸二氫鉀(35 ∶65)；流速：1 mL ／min；檢測波長：217 nm；進樣量：20 μL；柱溫：室溫。按擬訂色譜條件，硫酸阿托品峰與雜質峰分離良好，理論板數達3 000[12]，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 方法學考察

標準曲線制備：取105℃干燥至恒重的硫酸阿托品對照品100 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。精密量取貯備液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 mL，置 50 mL 容量品中，加水稀釋至刻度，搖勻，配成系列標準溶液，按擬訂色譜條件進樣20 μL，進行線性回歸，得回歸方程 H＝0.916 4 C-4.840，r＝0.999 86（n＝ 7）。結果表明，硫酸阿托品質量濃度在40.0～163.0 g／L范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗： 取 142.8，102.0，61.2 g／L 3 種標準溶液，按擬訂色譜條件重復進樣5次，測定峰高，計算日內 RSD和日間 RSD。結果日內 RSD分別為 0.52%，0.33% ，0.30% （n＝5），日 間 RSD 分 別 為 1.67% ，1.20%，0.89%（n ＝ 5），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗：稱取105℃干燥至恒重的硫酸阿托品對照品 80，100，120 mg，精密稱定，各 3 份，置 100 mL容量瓶中，同時按處方比例分別加入對羥基苯甲酸和氯化鈉使溶解后，加水稀釋至刻度，配成模擬硫酸阿托品滴眼液樣品，精密量取模擬樣品5 mL，置50 mL容量瓶中，加水至刻度配成低、中、高（80%，100%，120%）濃度的模擬樣品溶液，按擬訂色譜條件進樣，計算含量及回收率。結果表1。

2.3 樣品含量測定

HPLC法：精密吸取硫酸阿托品眼藥水成品1.0 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件進樣20 μL，依法測定，計算含量。結果見表2。

表1 硫酸阿托品加樣回收試驗結果（n＝9）

雙向酸堿中和滴定法：精密量取硫酸阿托品滴眼液成品5 mL，加中性乙醇與中性氯仿（對酚酞指示液顯中性）各5 mL，酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉液（質量濃度為 0.02 mol／L）滴定，至溶液顯淡紅色，即得每 1 mL的氫氧化鈉（質量濃度為 0.02 mol／L）相當于 6.948 mg 的硫酸阿托品，計算含量，并與HPLC法進行比較。結果見表2。

表2 兩種含量測定方法供試品含量比較(%，n＝3)

3 討論

3.1 含量測定方法選擇

由表2可知，雙向酸堿中和滴定法的結果高于HPLC法，與實際工作中的情況相似。酸堿中和滴定法結果受終點指示劑變色判斷，測得含量誤差大，所以不能真實反映硫酸阿托品的實際含量。由于對羥基苯甲酸乙酯的干擾以及硫酸阿托品為末端吸收，也不能用紫外分光光度法。因此，本試驗中根據硫酸阿托品的化學結構和相關文獻報道，采用HPLC法測定含量，方法簡便準確，可不經分離直接測定硫酸阿托品的含量，且對羥基苯甲酸乙酯不干擾主要的含量測定。

3.2 流動相波長選擇

阿托品與654-2（消旋山莨菪堿）的化學結構相似，但654-2較硫酸阿托品多1個—OH[12]，即654-2的極性稍大。參考654-2高效液相含量測定的色譜條件，選流動相為甲醇-KH2PO4(22∶78)，檢測波長為217 nm。結果分離效果較好但出峰時間偏晚，故提高甲醇比例，選擇甲醇-0.5%KH2PO4(35∶65)。硫酸阿托品的吸收波長為210 ～220 nm[2，13]，經多次試驗發現，于 217 nm 處出峰效果良好。

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[3]鄧朝暉，劉銀生，葛碧謹.復方硫酸阿托品滴眼液中硫酸阿托品含量測定方法研究[J].中國藥業，2000，9(9)：23-24.

[4]林玉洪，華 劍.BaSO4比濁法測定硫酸阿托品滴眼液的含量[J].實用全科醫學，2003，1(2):155-156.

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[7]習 丹，胡堅信，張 瑛.離子對比色法測定硫酸阿托品滴眼液中主藥的含量[J].中國藥房，2007，18(7)：549-550.

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Content Determination of Atropine Sulfate Eye-Drops by HPLC

Deng Xiaoling
(Yancheng First People′s Hospital of Jiangsu Province,Yancheng,Jiangsu,China 224000)

ObjectiveTo establish an HPLC method for the content determination of Atropine Sulfate Eye-Drops.Methods The Switzerland Spherigel C18column(150 mm × 4.6 mm,5 μm)was adopted with carbinol-0.5%KH2PO4(35 ∶65)as mobile phase,the flow rate was 1 mL／min and detection wavelength was 217 nm.Results The linear range of atropine sulfate was 40.0-163.0 g ／L(r＝0.999 86,n ＝7),the average recovery rate was 101.33%,RSD ＝1.74%(n ＝9).The inter-day precision (RSD)were 0.52%,0.33%,0.30%(n ＝ 5),the intra-day precision(RSD)were 1.67%,1.20%,0.89%(n ＝ 5).Conclusion This method is simple,rapid and accurate,which can be used for quality control of atropine sulfate.

HPLC;atropine sulfate;content

R927.2；R988.1

A

1006－4931(2017)17－0023－03

10.3969 ／j.issn.1006-4931.2017.17.007

鄧曉玲（1981-），女，大學本科，主管藥師，研究方向為醫院藥學，（電子信箱）512360560＠qq.com。

2017－03－06；

2017－05－31)