SLC11A1基因多態性與寧夏南部人群肺結核易感性研究

朱圭娜 侯懷哲 尹媛婕 陳丹丹 Ellis K. Magda 關光玉 楊書鯤 楊延輝 Donald P. McManus 景永峰 王平 楊玉榮

·論著·

SLC11A1基因多態性與寧夏南部人群肺結核易感性研究

朱圭娜 侯懷哲 尹媛婕 陳丹丹 Ellis K. Magda 關光玉 楊書鯤 楊延輝 Donald P. McManus 景永峰 王平 楊玉榮

目的探索SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865等位點多態性與中國寧夏回族自治區南部人群肺結核易感性的關系。方法于2010年7—11月選取寧夏回族自治區南部的西吉、海原、涇原、彭陽、原州、同心、中衛、隆德等8個地區，并在該地區居住10年以上，且經當地疾病預防控制中心確診為活動性肺結核的患者作為觀察組，共965例。同期選取上述地區的健康人群作為對照組，共897名。收集研究對象基本信息，采集研究對象外周靜脈血5 ml，應用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，-80 ℃保存，用于提取基因組DNA。利用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)的方法對SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865位點進行基因分型，分析3個單核苷酸多態性(SNP)位點與結核易感性的關系。結果rs17235409位點AA、AG、GG基因型在觀察組和對照組中分布頻率分別為1.4%(13/950)、23.5%(223/950)、75.1%(714/950)和2.7%(23/842)、25.1%(211/842)、72.2%(608/842)，兩組比較差異無統計學意義(χ2=5.12，P=0.077)；rs17235416位點TGTG(-)/(-)、TGTG(+)/(-)、TGTG(+)/(+)基因型在觀察組和對照組中的分布頻率分別為1.8%(17/939)、22.7%(213/939)、75.5%(709/939)和3.4%(28/824)、23.8%(196/824)、72.8%(600/824)，兩組比較差異無統計學意義(χ2=4.99，P=0.082)；rs3731865位點CC、GC、GG基因型在觀察組和對照組中分布頻率分別為2.3%(22/951)、26.1%(248/951)、71.6%(681/951)和2.4%(20/843)、24.9%(210/843)、72.7%(613/843)，兩組比較差異無統計學意義(χ2=0.32，P=0.852)。在隱性模型中，rs17235409位點AA、AG+GG基因型在觀察組和對照組中分布頻率分別為1.4%(13/950)、98.6%(937/950)和2.7%(23/842)、97.3%(819/842)，兩組分布頻率比較差異有統計學意義(χ2=4.21，P=0.040)；但多因素logistic回歸分析結果與單因素結果不一致，說明條件因素包括性別、年齡、民族等不同對結果有一定影響，所以不能說明rs17235409位點與肺結核發病相關(OR=0.51，95%CI=0.25～1.03，P=0.060)。rs17235416位點TGTG(-)/(-)、TGTG(+)/(-)+TGTG(+)/(+)基因型在觀察組和對照組中分布頻率分別為1.8%(17/939)、98.2%(922/939)和3.4%(28/824)、96.6%(796/824)，兩組分布頻率比較差異有統計學意義(χ2=4.45，P=0.038，OR=0.52、1.91，95%CI=0.23～0.97、1.04～3.51)；經多因素logistic回歸分析，排除性別、年齡和民族等條件因素對結果的影響，多因素結果與單因素結果相似，發現條件因素對結果無影響，結果仍有意義，說明攜帶rs17235416位點TGTG(+)/(-)和(或)TGTG(+)/(+)基因型的個體較攜帶TGTG(-)/(-)基因型的個體患肺結核的風險增加(OR=0.54，95%CI：0.29～1.00，P=0.049)。結論SLC11A1基因rs17235409和rs3731865位點多態性與寧夏南部地區人群肺結核易感性不相關。而rs17235416位點在隱性模型中，即攜帶TGTG(+)/(-)與 TGTG(+)/(+)基因型的個體發病風險增高。

結核,肺； 多態性，單核苷酸； 疾病易感性； 病例對照研究

結核病的主要免疫保護機制是細胞免疫，而巨噬細胞是結核分枝桿菌在機體內的主要宿主細胞，也是殺滅人體內結核分枝桿菌的主要效應細胞[1-2]。所以，巨噬細胞在結核病免疫保護中的作用不容忽視。本研究主要選擇與巨噬細胞功能相關的溶質性載體蛋白家族成員1(solute carrier family 11 member 1 protein，SLC11A1)基因進行研究。SLC11A1，又名natural resistance associated macrophage protein 1，NRAMP1，其基因已被定位于人染色體2q35，長達12 000 bp，含15個外顯子，編碼的是相對分子質量約為60 000，包含550個氨基酸的疏水蛋白。它包括10～12個跨膜區(TM)，1～2個糖基化的胞質外環狀結構和1個胞質內的轉運蛋白特征結構域[3-4]。目前發現SLC11A1蛋白主要分布在巨噬細胞吞噬溶酶體膜上，它位于靜息巨噬細胞晚期胞腔內，可能調節吞噬體內錳、鐵等金屬二價離子的轉運，是一種調節蛋白[5-6]。其作用是可以泵出吞噬體內的二價陽離子，造成吞噬體內細菌或細胞Fe2+和 Mn2+攝取難度，從而細菌被消化殺滅[7-8]。但SLC11A1基因一旦變異使這一功能減弱或喪失，則難以控制胞內菌的復制從而可能影響巨噬細胞對細菌的消滅功能。研究發現，巨噬細胞的這一功能與多種感染性疾病(如結核病、麻風病及流行性腦脊髓膜炎)以及自身免疫性疾病(如類風濕關節炎、結節病及克隆恩病)的易感性相關。

許多研究者推測SLC11A1基因的D543N(rs17235409)、3′UTR(rs17235416)、INT4(rs3731865)和5′(GT)n等4個位點多態性可能會影響到免疫系統對結核分枝桿菌的清除殺滅功能，進而說明SLC11A1基因多態性與結核病易感性相關。從復習國內外一些學者對不同民族、地域的人群的研究結果中發現，rs17235409、rs17235416和rs3731865等3個位點多態性與肺結核的發生相關性較大[9-16]，但也存在著一定的差異。筆者以寧夏回族自治區南部人群為研究對象，選擇這3個位點展開研究。利用分子生物學技術對SLC11A1基因的rs17235409、rs17235416和rs3731865位點進行病例-對照研究，探討其與寧夏南部人群肺結核發生的相關性。

資料和方法

1.樣本量計算：根據前期回顧性調查[17]，寧夏回族自治區南部地區肺結核登記年患病率為500/10萬～700/10萬。以α=0.05，β=0.5～0.8，計算顯示樣本量應≥1800檢驗效能可達50%～80%。具體計算方法參見http://pngu.mgh.harvard.edu/～purcell/gpc/cc2.html。

2.研究對象：于2010年7—11月選取寧夏回族自治區南部的西吉、海原、涇原、彭陽、原州、同心、中衛、隆德等8個地區，并在該地區居住10年以上，且經當地疾病預防控制中心確診為活動性肺結核的患者作為觀察組，共965例。同期選取上述地區的健康人群作為對照組，共897名。對照組研究對象均與觀察組研究對象的年齡、性別、民族分布相匹配。采集研究對象外周靜脈血5 ml，應用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，-80 ℃保存，用于提取基因組DNA，共收集血液標本1862份。所有研究對象均經知情同意。

3.納入和排除標準：(1)觀察組納入標準為年滿18周歲，嚴格按照肺結核診斷標準[18]，即細菌學(痰涂片或分離培養)診斷陽性、胸部X線攝影檢查顯示結核征象及有臨床表現。排除糖尿病、高血壓、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌等并發癥患者；HIV、肝炎病毒感染者；腫瘤患者及長期使用激素者和器官移植等免疫功能低下者；有家族遺傳病史者。(2)對照組納入標準為年滿18周歲，無結核病史，痰涂片檢查陰性，胸部X線攝影檢查無結核征象，肝功能正常。排除標準同觀察組。

4.調查方法：對研究對象進行一對一的問卷調查，填寫《肺結核易感性調查登記表》。調查表主要內容包括基本信息(姓名、性別、年齡、民族、家庭住址、聯系方式等)，結核既往史，卡介苗接種史，乙肝史和其他疾病史。調查人員為各縣市疾病預防控制中心結核病防治所相關負責人員，工作開展前對調查人員在寧夏醫科大學進行集中培訓。本次調查對所有研究對象進行一般性臨床檢查和乙型肝炎(簡稱“乙肝”)全套檢查及肝功能檢查。

5. PCR反應：以裂解紅細胞法提取基因組DNA，具體提取方法和DNA質量檢測參照文獻[11]，提取結果經核酸測試儀測定，所有標本波長260 nm和280 nm可見光吸光度值(A值)比值A260/A280均在1.8～2.0之間，純度符合實驗要求。引物設計參照文獻[14]，經Primer Premier 5.0 軟件驗證其合理性。引物均由北京普洛麥格生物公司合成。rs17235409及rs17235416位點采用同一引物進行擴增(擴增的序列中包含此2個位點)，其引物序列：上游：5′-GCATCTCCCCAATTCATGGT-3′，下游：5′-AACTGTCCCACTCTATCCTG-3′。PCR產物長度為244 bp或240 bp。rs3731865位點引物序列：上游：5′-TCTCTGGCTGAAGGCTC-TCC-3′，下游：5′-TGTGCTATCAGTTGAGCCTC-3′。PCR產物長度為624 bp。采用96孔板進行反應，SLC11A1基因 rs17235409、rs17235416 及rs3731865的 PCR 反應總體積均為25 μl，其中，2×Mix混合液12.5 μl，上下游引物各0.4 μl，ddH2O 11.7 μl，rs17235409、rs17235416位點的DNA模板為150 ng，rs3731865位點的DNA模板為200 ng。PCR反應條件：95 ℃預變性2 min；95 ℃變性30 s，rs17235409和rs17235416位點57.5 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循環35次；rs3731865位點61 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，循環30次；72 ℃終末延伸5 min。擴增產物用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。

6.酶切分型：應用限制性片段長度多態性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)分析各位點基因型。分別用AvaⅡ內切酶、FokⅠ內切酶、ApaⅠ內切酶對SLC11A1基因的rs17235409、rs17235416 及rs3731865多態性進行分型。采用96孔板進行酶切，酶切反應體系均為20 μl。rs17235409酶切反應體系及條件：7 μl DNA產物，AvaⅡ內切酶1.7 μl，RE buffer緩沖液(10×)2 μl，BSA緩沖液 100 μg/μl 2 μl，7.5 μl ddH2O，37 ℃ 酶切2 h，65 ℃酶切20 min。rs17235416酶切反應體系及條件：7 μl DNA產物，FokⅠ內切酶1 μl，BEB緩沖液(10×)2 μl，7.5 μl ddH2O，37 ℃酶切4 h，65 ℃酶切20 min。rs3731865酶切反應體系及條件：8 μl DNA產物，ApaⅠ內切酶0.5 μl，RE buffer緩沖液(10×)2 μl，BSA 100 μg/μl 2 μl，7.5 μl ddH2O，37 ℃酶切3 h，65 ℃酶切20 min。rs17235409、rs17235416及rs3731865酶切產物各取10 μl，以50～500 bp或100～700 bp的DNA Marker為對照，采用3%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測。

rs17235409位點A/G酶切結果：GG基因型，酶切產物顯示39、79、126 bp等3個片段；AG基因型，酶切產物顯示39、79、126、201 或205 bp等4個片段；AA 基因型，酶切產物顯示39、201或205 bp等2個片段。rs17235416位點TGTG(+)/TGTG (-)酶切結果：TGTG(+)/(+)基因型，酶切產物顯示33、211 bp等2個片段；TGTG(+)/(-)基因型，酶切產物顯示33、211、240 bp等3個片段；TGTG(-)/(-) 基因型，酶切產物顯示240 bp片段。rs3731865位點G/C酶切結果：GG基因型，酶切產物顯示604 bp片段；GC基因型，酶切產物顯示604、455、149 bp等3個片段；CC基因型，酶切產物顯示455、149 bp等2個片段。

7.統計學分析：應用SPSS 16.0軟件進行分析。觀察組和對照組研究對象性別、民族構成的比較采用χ2檢驗；年齡差異的比較采用兩獨立樣本t檢驗。采用依據Hardy-Weinberg平衡法則，檢驗研究對象的基因型頻率是否達到遺傳平衡，以OR(95%CI)值表示基因型與疾病的危險程度。對觀察組和對照組中各基因單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism，SNP)基因型及等位基因頻率進行χ2檢驗，并用HaploView 4.2軟件對其結果進行驗證；分析各基因SNP位點的顯性模型、隱性模型、共顯性模型在觀察組與對照組之間的分布差異；對各基因SNP位點的顯性和隱性模型進行單因素和多因素logistic回歸分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1.基本情況：觀察組965例，其中，男527例(54.6%)，女438例(45.4%)；回族618例(64.0%)，漢族347例(36.0%)；平均年齡為(46.4±17.2)歲。對照組共897名，其中，男498名(55.5%)，女399名(44.5%)；回族550名(61.3%)，漢族347名(38.7%)；平均年齡為(47.8±17.6)歲。觀察組和對照組性別、民族構成及年齡差異均無統計學意義(χ2=0.16，P=0.690；χ2=0.85，P=0.358；t=1.91，P=0.060)。

經遺傳平衡檢驗，SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865位點基因型頻率均符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡規律，說明所選擇的人群具有群體代表性，可進行下一步研究(表1)。由于此研究受檢的SNP位點數目為3，所以校正概率P=0.05/3≈0.017。

2.等位基因與基因型頻率比較：等位基因研究顯示，rs17235409位點等位基因A和G，rs17235416位點等位基因TGTG(-)和TGTG(+)，rs3731865位點等位基因C和G在觀察組和對照組中的分布差異均無統計學意義。基因型研究顯示，rs17235409位點基因型AA、AG、GG，rs17235416位點基因型TGTG(-)/(-)、TGTG(+)/(-)、TGTG(+)/(+)，rs3731865位點基因型CC、GC、GG在觀察組和對照組中的分布差異均無統計學意義(表2～4)。

3.不同遺傳模型的基因頻率比較：單因素分析顯示，rs17235409位點在隱性模型中基因頻率在觀察組和對照組中的分布差異有統計學意義(表5)；rs17235416位點在隱性模型中基因型頻率在觀察組和對照組中的分布差異有統計學意義，攜帶TGTG(+)/(-)和(或)TGTG(+)/(+)基因型的個體患肺結核的風險較攜帶TGTG(-)/(-)基因型的個體大[OR(95%CI)值：1.91(1.04～3.51)]，是肺結核發病的危險因素；而TGTG(-)/(-)基因型與肺結核的患病呈負相關[OR(95%CI)值：0.52(0.23～0.97)]，是隱性模型中的保護因素(表6)。

表1 SLC11A1基因rs17235409、rs17235416、rs3731865位點基因型Hardy-Weinberg遺傳平衡分析

注表中括號外數值為“例數”，括號內數值為“比率(%)”；剔除無實驗結果的樣本后，rs17235409位點觀察組950例，對照組842名；rs17235416位點觀察組939例，對照組824名；rs3731865位點觀察組951例，對照組843名

表2 rs17235409位點不同基因型及等位基因頻率在觀察組和對照組的分布情況

注表中括號外數值為“例數”，括號內數值為“比率(%)”

表3 rs17235416位點不同基因型及等位基因頻率在觀察組和對照組的分布情況

注表中括號外數值為“例數”，括號內數值為“比率(%)”

表4 rs3731865位點不同基因型及等位基因頻率在觀察組和對照組的分布情況

注表中括號外數值為“例數”，括號內數值為“比率(%)”

表5 rs17235409位點不同遺傳模型的基因型單因素分析

注表中括號外數值為“例數”，括號內數值為“比率(%)”

表6 rs17235416位點不同遺傳模型的基因型單因素分析

注表中括號外數值為“例數”，括號內數值為“比率(%)”

表7 三個SNP位點顯性和隱性模型的多因素logistic回歸分析

經多因素logistic回歸分析，rs17235409位點排除性別、年齡和民族因素對結果的影響后，發現條件因素對結果有一定的影響，所以不能說明rs17235409位點與肺結核患病相關；rs17235416位點排除性別、年齡和民族因素對結果的影響，發現條件因素對結果無影響，說明攜帶rs17235416位點TGTG(+)/(-)和(或)TGTG(+)/(+)基因型的個體較攜帶TGTG(-)/(-)基因型的個體患肺結核的風險增加(表7)。

討 論

21世紀，雖然人們通過接種卡介苗以及藥物治療來控制結核病的流行和感染的發展，但結核病目前仍然是傳染性疾病中導致死亡率較高的疾病之一。世界范圍內有1/3的人口受到結核病的威脅,每年有接近300萬例患者死于結核病。雖然全球有1/3的人感染結核分枝桿菌，但在感染人群中僅1/10 發病，這提示個體差異對結核病易感性不同。

近幾年，隨著遺傳流行病學的迅速發展，宿主易感基因的調查在疾病發生發展的研究中也日益受到重視，越來越多與結核病易感性和疾病發展相關的候選基因被發現。而SLC11A1基因在眾多候選基因中被研究較多，并且在國內外研究結果中有較大差異。本次針對寧夏南部人群的研究顯示：rs17235409、rs17235416和rs3731865等3個位點等位基因和基因型頻率在觀察組和對照組中均無明顯差異，可能不是寧夏南部人群肺結核發病的易感基因，這與國內一些研究結果存在差異，如李春柱等[9]研究發現，rs17235416位點TGTG缺失等位基因可能是新疆哈薩克族人群結核病的易感基因；熊宇和李革[10]的研究發現，NRAMP1基因的rs17235409位點A等位基因和rs17235416位點TGTG(-)等位基因可能是重慶市漢族人群肺結核患病的易感基因。

此外，本研究還對rs17235409、rs17235416和rs3731865等3個位點不同模型基因型頻率進行單因素分析，并經多因素分析排除性別、年齡和民族因素對結果的影響，發現rs17235409和rs3731865位點多態性可能與寧夏南部人群肺結核易感性不相關，而rs17235416位點多態性與寧夏南部人群肺結核易感性相關。這與一些研究結果有不同之處，如Bellamy等[11]發現NRAMP1基因的INT4、D543N及3′UTR等3個多態性位點與非洲人群肺結核患病均有相關性。也與一些學者的研究結果有相似之處，如Abe等[12]發現3′UTR位點基因型變異與日本人群結核病的患病明顯相關；Ryu等[13]和 Kim等[14]發現TGTG(+)/(-)基因型頻率升高與韓國人群結核易感性明顯相關；林容等[15]發現NRAMP1基因 3′UTR TGTG(+)/(-)、TGTG(-)/(-)位點多態性可能是海南黎族人群結核病患病的易感因素；王喜等[16]研究發現，TGTG/del基因型可能是新疆維吾爾族人群結核病易感基因型。雖與這些結果有相似之處，但在本研究中發現攜帶TGTG(+)/(-)和(或)TGTG(+)/(+)基因型的個體發病率較高，并且攜帶TGTG(-)/(-)為保護因素，而在大部分的研究報導中，發現攜帶TGTG(-)/(-)和(或)TGTG(+)/(-)的個體患病率較高。

本研究結果與先前的研究結果存在差異，原因可能與樣本量、地區差異有關。從筆者對目前國內外學者在相同基因研究的文獻調查結果可以看出，前期的研究樣本量均比較小(沒有超過500例患者)；本研究根據結核病在寧夏地區的年發病率，將同民族地域的樣本收集，按統計效能所需樣本量計算為基本條件，在擴大樣本量的前提下，對寧夏南部地區的人群進行研究，理論上認為其結果能代表這個地域人群遺傳特征。這些研究結果的差異還可能與不同研究者對病例和對照來源的入選標準，以及研究對象群體的遺傳結構的不同有關。本研究所選取的對照組是與觀察組年齡、性別相似的人群，年齡、性別相似則說明人群具有相似的體質，比較好的排除了年齡、性別對結果的干擾。另外，還應考慮到SLC11A1基因多態性位點可能與其他基因位點存在連鎖不平衡現象。因為，雖然SLC11A1基因對肺結核易感性的影響與巨噬細胞有關，但就目前所發現的與巨噬細胞相關的基因較多(如SP110基因、P2X7受體基因等)。因此，還應該考慮可能SLC11A1基因與上述這些基因之間存在交互作用而影響疾病易感性或疾病發生發展的結果。

另外，還有研究報道發現，SLC11A1基因與結核病易感性相關，并且證實了這個基因家族是局限于年輕女性[19]。國內學者對SLC11A1基因3′UTR位點變異研究提示，這個變異可能與中國兒童結核病易感性相關，并且提示性別對結核病發生發展的結果有影響[20]。這說明SLC11A1基因與結核病的相關性可能與個體的年齡、性別及環境等諸多因素有關(如發育的成熟程度，以及激素體液等因素共同作用的結果)。

綜上，因為機體清除結核分枝桿菌的功能是由不同的免疫細胞和免疫因子配合完成的，僅對單個基因的研究不能徹底闡述人群易感性的全面特征。因此，應當在擴大樣本量的基礎上研究多基因位點之間的相互作用，并結合年齡、性別及環境等因素進行更深入的探討，這不僅對疾病的正確診斷、治療及預防有重要意義，還將有助于進一步認識結核病的發病機制，找到控制結核感染、發病和治療的新方法。

[1] Rook GA, Seah G, Ustianowski A.M.tuberculosis: immuno-logy and vaccination. Eur Respir J, 2001, 17(3): 537-557.

[2] 江道斌, 齊曼古力·吾守爾.巨噬細胞功能相關的易感基因多態性與結核病相關性的研究進展.中國防癆雜志,2014, 36(5):385-387.

[3] Blackwell JM, Barton CH, White JK, et al. Genomic organization and sequence of the humanNRAMP1 gene: identi cation and mapping of a promoter region polymorphism. Mol Med, 1995, 1(2): 194-205.

[4] Cellier M, Govoni G, Vidal S, et al. Human natural resis-tance-associated macrophage protein: cDNA cloning, chromosomal mapping, genomic organization, and tissue-specific expression. J Exp Med, 1994, 180(5): 1741-1752.

[5] Goswami T, Bhattacharjee A, Babal P, et al. Natural-resis-tance-associated macrophage protein 1 is an H+/bivalent cation antiporter. Biochem J, 2001, 354(Pt 3): 511-519.

[6] Gruenheid S, Pinner E, Desjardins M, et al. Natural resis-tance to infection with intracellular pathogens: the Nramp1 protein is recruited to the membrane of the phagosome. J Exp Med, 1997, 185(4): 717-730.

[7] Kehres DG, Zaharik ML, Finlay BB, et al. The NRAMP proteins of Salmonella typhimurium and Eseherichia coli are selective manganese transporters involved in the response to reactive oxygen. Mol Microbiol, 2000, 36(5): 1085-1100.

[8] Jabado N, Jankowski A, Dougaparsad S, et al. Natural resis-tance to intracellular infections: natural resistance-associated macrophage protein 1 (Nramp1) functions as a pH-dependent manganese transporter at the phagosomal membrane. J Exp Med, 2000, 192(9): 1237-1248.

[9] 李春柱, 賈學斌, 孟憲杰, 等.NRAMP1基因3′UTR多態性與新疆哈薩克族結核病易感性的研究. 生命科學研究, 2010, 14(2): 125-129.

[10] 熊宇, 李革.NRAMP1基因多態性與重慶市漢族人群肺結核易感相關性研究. 重慶醫科大學學報, 2010, 35(12): 1820-1824.

[11] Bellamy R, Ruwende C, Corrah T, et al. Variations in the NRAMP1 gene and susceptibility to tuberculosis in West Africans. N Engl J Med, 1998, 338(10): 640-644.

[12] Abe T, Iinuma Y, Ando M, et al. NRAMP1 polymorphisms, susceptibility and clinical features of tuberculosis. J Infect, 2003, 46(4): 215-220.

[13] Ryu S, Park YK, Bai GH, et al. 3′ UTR polymorphisms in theNRAMP1 gene are associated with susceptibility to tuberculosis in Koreans. Int J Tuberc Lung Dis, 2000, 126(4): 577-580.

[14] Kim JH, Lee SY, Lee SH, et al.NRAMP1 genetic polymorphisms as a risk factor of tuberculous pleurisy. Int J Tuberc Lung Dis, 2003, 7(4): 370-375.

[15] 林容, 薄建萍, 蔡望偉, 等.NRAMP1基因DNA多態性與海南黎族人結核病易感性的研究. 實用臨床醫藥雜志, 2008, 12(1): 61-64.

[16] 王喜, 任麗君, 吳芳, 等. 新疆維吾爾族人群結核病易感基因的多態性分析. 中國現代醫學雜志, 2011, 21(15): 1839-1845.

[17] Yang YR, McManus DP, Gray DJ, et al. Evaluation of the tuberculosis programme in Ningxia Hui Autonomous region, the People’s Republic of China: a retrospective case study. BMC Public Health, 2012, 12: 1110.

[18] 中華人民共和國衛生部. WS288-2008 肺結核診斷標準. 北京: 人民衛生出版社, 2008.

[19] Leung KH, Yip SP, Wong WS, et al. Sex- and age-dependent association ofSLC11A1 polymorphisms with tuberculosis in Chinese: a case control study. BMC Infect Dis, 2007, 7: 19.

[20] Jin J, Sun L, Jiao W, et al.SLC11A1 (Formerly NRAMP1) gene polymorphisms associated with pediatric tuberculosis in China. Clin Infect Dis, 2009, 48(6): 733-738.

(本文編輯：李敬文)

SLC11A1genepolymorphismsandassociationofsusceptibilitytotuberculosisamongstpopulationinsouthernNingxiaofChina

ZHUGui-na*,HOUHuai-zhe,YINYuan-jie,CHENDan-dan,EllisK.Magda,GUANGuang-yu,YANGShu-kun,YANGYan-hui,DonaldP.McManus,JINGYong-feng,WANGPing,YANGYu-rong.

*LaboratoryDepartment，QingyangCentreforDiseaseControlandPrevention,GansuProvince,Qingyang745000,China

Correspondingauthor:YANGYu-rong,Email:yangyurong@hotmail.com

ObjectiveTo explore the relationship between the polymorphism ofSLC11A1 gene (such as rs17235409, rs17235416 and rs3731865) and tuberculosis susceptibility in the population in the southern part of Ningxia Hui Autonomous Region.MethodsBetween July and November 2010, a total of 965 patients, who were from eight regions including Xiji, Haiyuan, Jingyuan, Pengyang, Yuanzhou, Tongxin, Zhongwei and Longde, in the southern part of Ningxia Hui Autonomous Region, had lived in these regions for more than 10 years and diagnosed with active tuberculosis by the local Centers for Disease Control and Prevention, were taken as case group. During the same period, a total of 897 healthy volunteers from the above regions were selected as control group. Their basic characteristics were collected. In addition, 5 ml of peripheral venous blood was collected from the study subjects, followed by the addition of anticoagulant-ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA), and then stored at -80 ℃ for the following extraction of genomic DNA. The genotyping of rs17235409, rs17235416 and rs3731865 inSLC11A1 gene was performed using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP), and then the relationship between three single nucleotide polymorphisms (SNPs) and tuberculosis susceptibility was analyzed.ResultsThe distribution frequency of genotypes AA, AG, and GG at rs17235409 site in the case group was 1.4% (13/950), 23.5% (223/950) and 75.1% (714/950), respectively, while which was 2.7% (23/842), 25.1% (211/842) and 72.2% (608/842) in the control group, respectively; the difference was not statistically significant between two groups (χ2=5.12,P=0.077). The distribution frequency of genotypes TGTG (-)/(-), TGTG (+)/(-) and TGTG (+)/(+) at rs17235416 site in the case group was 1.8% (17/939), 22.7% (213/939) and 75.5% (709/939), respectively, while which was 3.4% (28/824), 23.8% (196/824) and 72.8% (600/824) in the control group, respectively; there was no significant difference between two groups (χ2=4.99,P=0.082). The distribution frequency of genotypes CC, GC and GG at rs3731865 site in the case group was 2.3% (22/951), 26.1% (248/951) and 71.6% (681/951), respectively, while which was 2.4 % (20/843), 24.9% (210/843) and 72.7% (613/843) in the control group, respectively; the difference was not statistically significant (χ2=0.32,P=0.852). In the recessive genetic model, the distribution frequency of genotypes AA and AG+GG at rs17235409 site in the case group was 1.4% (13/950) and 98.6% (937/950), respectively, while which was 2.7% (23/842) and 97.3% (819/842) in the control group, respectively; the difference was statistically significant (χ2=4.21,P=0.040). However, multivariable logistic regression analysis had inconsistent results with the univariate analyses, which indicated that the different condition factors, including genders, ages and ethnicity, had a certain effect on the results. Thus, these results did not explain that rs17235409 was related to the occurrence of tuberculosis (OR=0.51, 95%CI=0.25-1.03,P=0.060). The distribution frequencies of genotypes TGTG (-)/(-) and TGTG (+)/(-)+TGTG (+)/(+) at rs17235416 site were 1.8% (17/939) and 98.2% (922/939) in the case group, while 3.4% (28/824) and 96.6% (796/824) in the control group, respectively; there was no significant difference between two groups (χ2=4.45,P=0.038,OR=0.52, 1.91, 95%CI=0.23-0.97 and 1.04-3.51, respectively). Based on multifactor logistic regression analysis adjusted to the condition factors, including gender, age and ethnicity, multifactor results were similar to single factor results, and condition factors were found to have no effects on the results, as well as the results were still significant (OR=0.54, 95%CI=0.29-1.00,P=0.049), which indicated that the individuals with genotypes TGTG (+)/(-) and (or) TGTG (+)/(+) at rs17235416 site had increased risk of suffering from tuberculosis compared to individuals with genotype TGTG (-)/(-) (OR=0.54, 95%CI=0.29-1.00,P=0.049).ConclusionThe polymorphisms of rs17235409 and rs3731865 inSLC11A1 gene were not correlated with tuberculosis susceptibility in the southern region of Ningxia. However, in the recessive genetic model, the onset risk of individuals with genotype TGTG (+)/(-) and TGTG (+)/(+) at rs17235416 site was increased.

Tuberculosis, pulmonary; Polymorphism, single nucleotide; Disease susceptibility; Case-control studies

10.3969/j.issn.1000-6621.2017.10.011

National Health Medical Research Councils(APP1025166)；國家自然科學基金(81460311)

745000 甘肅省慶陽市疾病預防控制中心檢驗科(朱圭娜、景永峰、王平)；甘肅省慶陽市人民醫院檢驗科(侯懷哲)；寧夏醫科大學基礎醫學院病原生物學與免疫學系(尹媛婕、楊延輝、楊玉榮)；山東省濰坊康華生物技術有限公司(陳丹丹)；澳大利亞新南威爾士州結核研究所(Ellis K. Magda)；寧夏回族自治區疾病預防控制中心中心研究所(關光玉)；寧夏醫科大學第二附屬醫院(銀川市第一人民醫院)影像診斷室(楊書鯤)；澳大利亞昆士蘭醫學研究所傳染病研究部[Donald P.McManus、楊玉榮(客座教授)]

楊玉榮，Email：yangyurong@hotmail.com

2017-07-14)