急性胃黏膜損傷大鼠背部敏化穴位的分布

朱小香，許金森，薩喆燕，萬 隆，黃倩茹，潘曉華，楊廣印

（福建省中醫(yī)藥研究院，福建省經(jīng)絡(luò)感傳重點實驗室，福建福州350003）

急性胃黏膜損傷大鼠背部敏化穴位的分布

朱小香，許金森，薩喆燕，萬 隆，黃倩茹，潘曉華，楊廣印

（福建省中醫(yī)藥研究院，福建省經(jīng)絡(luò)感傳重點實驗室，福建福州350003）

目的：觀察急性胃黏膜損傷大鼠背部體表伊文思藍（EB）滲出點的分布規(guī)律，為進一步開展穴位敏化的機制研究提供實驗基礎(chǔ)。方法：將24只SD大鼠隨機分為生理鹽水組（6只）和模型組（18只）。采用吲哚美辛腹腔注射法制作急性胃黏膜損傷模型，造模6 h后尾靜脈注射EB，3 h后觀察并記錄大鼠背部體表EB滲出點所分布的神經(jīng)節(jié)段和穴位，最后剖腹取胃觀察胃黏膜損傷指數(shù)（UI）。結(jié)果：與生理鹽水組比較，模型組大鼠UI顯著升高（P＜0.001），在督脈背段及膀胱經(jīng)第一側(cè)線處的體表EB滲出點數(shù)明顯增加（P＜0.001），滲出點呈現(xiàn)神經(jīng)節(jié)段分布，T2～L6均有EB滲出點，出現(xiàn)率較高的 5 個神經(jīng)節(jié)段為：T9＞T13＞T3＞T10=T5，其中“身柱”“神道”“筋縮”“肝俞”“胃俞”等穴位具有較高的 EB 滲出率。結(jié)論：急性胃黏膜損傷可促進EB在體表滲出，滲出點呈現(xiàn)神經(jīng)節(jié)段分布，并與督脈及背俞穴具有較高的相關(guān)性，提示在疾病狀態(tài)下，穴位由靜息態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顟B(tài)，穴位局部血管通透性升高可能是穴位敏化的環(huán)節(jié)之一。

急性胃黏膜損傷；穴位敏化；督脈；背俞穴

穴位是經(jīng)絡(luò)－臟腑相關(guān)中的一個重要環(huán)節(jié)。穴位對于臟腑病變不僅具有治療作用，而且具有診斷作用。穴位的功能活動是一個動態(tài)變化的過程，在生理狀態(tài)下以“靜息”為主，而在病理狀態(tài)下則具有和生理狀態(tài)完全不同的特征，表現(xiàn)為熱敏、痛敏、壓敏等感覺的變化，其面積的大小和功能強弱也會產(chǎn)生相應的變化，表現(xiàn)為病理性的“激活”狀態(tài)，此動態(tài)變化過程即為穴位的敏化，穴位敏化過程是針灸發(fā)揮治療作用的基礎(chǔ)［1］。我們在以往的臨床實踐中發(fā)現(xiàn)，慢性胃炎、胃潰瘍等消化系統(tǒng)疾病患者的督脈背段可按及多個明顯壓痛反應點，這種壓痛反應與疾病的狀態(tài)相關(guān)，當疾病治愈或好轉(zhuǎn)后，沿督脈背段相應的壓痛反應消失或明顯減輕，而在健康人的相應督脈背段上無此反應點［2］。我們推測，督脈背段穴位存在與消化系統(tǒng)疾病相關(guān)的敏化現(xiàn)象。為進一步明確消化系統(tǒng)疾病引起背部穴位敏化的規(guī)律，本研究應用伊文思藍（Evens Blue，EB）滲出法觀察急性胃黏膜損傷大鼠背部穴位的敏化分布規(guī)律，為進一步開展穴位敏化的機制研究提供實驗基礎(chǔ)，也為針灸臨床治療提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物與分組 健康SD大鼠24只，雄性，清潔級，12 w 齡，體質(zhì)量（250±25）g，由福建醫(yī)科大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（閩）2012－0001。購入后置福建省中醫(yī)藥研究院實驗動物中心清潔級實驗室中適應性喂養(yǎng)1 w（恒溫、12 h光照/d）。按隨機數(shù)字表法隨機將動物分為生理鹽水組（6只）和模型組（18只）。實驗動物條件符合國家科學技術(shù)委員會頒布的《實驗動物管理條例》要求。本實驗過程中對動物的處置符合2006年科技部發(fā)布的《關(guān)于善待實驗動物的指導性意見》要求。1.1.2 儀器和試劑 寵物剃毛器（廣州科德士電子公司）；小動物麻醉呼吸系統(tǒng)（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；吲哚美辛（臨汾奇林藥業(yè)有限公司）；EB染料（美國Sigma公司）；脫毛膏（廣州瑪貝拉化妝品有限公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 模型的制備 急性胃黏膜損傷大鼠模型制備采用吲哚美辛腹腔注射法［3］。造模方法：大鼠禁食不禁水15 h，腹腔注射吲哚美辛（30 mg/kg，5 mg/mL溶于雙蒸水中），6 h后制成大鼠急性胃黏膜損傷模型。模型成功的標準：大鼠安靜，萎靡不振，拉柏油樣便；形態(tài)學上動物胃黏膜有出血點和潰瘍病灶。生理鹽水組以腹腔注射等量生理鹽水。1.2.2 背部EB滲出點的觀察 在腹腔注射吲哚美辛造模的當天，先用寵物剃毛器剃掉大鼠背部毛發(fā)，再用人美容用脫毛膏脫毛。腹腔注射吲哚美辛6 h后，所有大鼠尾靜脈注射 EB（50 mg/kg，50 mg/mL溶于生理鹽水中），3 h后于小動物麻醉呼吸系統(tǒng)維持麻醉狀態(tài)下觀察大鼠背部EB滲出點所分布的神經(jīng)節(jié)段，記錄在每個神經(jīng)節(jié)段的滲出點數(shù)，并和局部的穴位分布做比較（動物穴位定位參考華興邦大鼠穴位圖譜）。EB滲出點陽性表現(xiàn)為隱隱于皮膚之下，而不是明顯在表皮，在表皮且顏色鮮艷者往往是表皮損傷所致。

1.2.3 胃黏膜損傷指數(shù)（Ulcer Index，UI）觀察 背部EB滲出點觀察結(jié)束后以1%烏拉坦麻醉大鼠、剖腹取胃。將幽門部和賁門部用線結(jié)扎，向胃內(nèi)注入4%甲醛2 mL，在兩結(jié)扎線外摘下全胃，置于4%甲醛中固定30 min。然后沿胃大彎剪開并用水清洗胃內(nèi)容物，參照GUTH′S法計算UI：全胃各病灶長度之和為損傷指數(shù)［4］。損傷≤1 mm（包括糜爛點）為1分，1 mm＜損傷≤2 mm為2分，2 mm＜損傷≤3 mm為3分，3 mm＜損傷≤4 mm為4分，依此類推。損傷寬度＞2 mm者UI加倍。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)（UI）的比較

生理鹽水組大鼠胃黏膜光整完好，未見潰瘍，UI為0；模型組大鼠的胃黏膜UI值比生理鹽水組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001），提示大鼠急性胃黏膜損傷模型復制成功。結(jié)果見表1。

2.2 兩組大鼠背部伊文思藍（EB）滲出點的比較

尾靜脈注射EB 3 h后，模型組大鼠在督脈背段及膀胱經(jīng)第一側(cè)線處的皮膚上均出現(xiàn)數(shù)量不等的EB滲出點，而生理鹽水組中僅兩只大鼠各出現(xiàn)一個EB點，模型組大鼠督脈及膀胱經(jīng)第一側(cè)線處的EB滲出點個數(shù)顯著高于生理鹽水組（P＜0.001），提示胃黏膜急性損傷會引起督脈及其周圍穴位皮膚毛細血管通透性的增加，進而導致EB的滲出。結(jié)果見表1。

表1 兩組大鼠UI和EB滲出點的比較 （±s）

表1 兩組大鼠UI和EB滲出點的比較 （±s）

組別 n UI EB滲出點（個）生理鹽水組 6 0 0.33模型組 18 60.50±3.80 7.72±1.01 Z－3.632 －3.622 P＜0.001 ＜0.001

2.3 急性胃黏膜損傷大鼠EB滲出點的神經(jīng)節(jié)段分布

急性胃黏膜損傷大鼠在督脈背段及膀胱經(jīng)第一側(cè)線處皮膚出現(xiàn)較多的EB滲出點，滲出點呈現(xiàn)神經(jīng)節(jié)段分布，T2～L6均有EB滲出點，出現(xiàn)率較高的 5 個神經(jīng)節(jié)段為：T9＞T13＞T3＞T10=T5，其中“身柱”“神道”“筋縮”“肝俞”“胃俞”等穴位具有較高的EB滲出率。模型組EB滲出點的脊神經(jīng)節(jié)段分布情況見圖1。

圖1 大鼠腹腔注射吲哚美辛后EB滲出點的神經(jīng)節(jié)段分布

3 討論

《靈樞·九針十二原》記載：“五臟有疾也，應出十二原，而原各有所出，明知其原，睹其應，而知五臟之害矣。”說明觀察原穴的反應可以協(xié)助診察臟腑之病變，穴位具有反映疾病狀態(tài)的作用。在臨床中，我們也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)，當臟腑發(fā)生病變時，可在相關(guān)穴位處出現(xiàn)各種病理反應，表現(xiàn)為局部感覺異常、壓痛敏感、局部瘀絡(luò)、凹陷、皮下結(jié)節(jié)或條索以及色素沉著等，在疾病早期常以血管變化為主。本研究發(fā)現(xiàn)，腹腔注射生理鹽水的大鼠胃黏膜光整完好，未見潰瘍，尾靜脈注射EB后體表幾乎不出現(xiàn)EB的滲出；而腹腔注射吲哚美辛的大鼠胃黏膜損傷指數(shù)顯著升高，尾靜脈注射EB后在督脈背段及膀胱經(jīng)第一側(cè)線處皮膚出現(xiàn)多個EB滲出點，而且這些滲出點和穴位的分布具有一定相關(guān)性，提示胃黏膜急性損傷會引起督脈背段及其周圍穴位皮膚毛細血管通透性的增加，進而導致EB的滲出。Wesselmann U 等［5-6］研究認為，內(nèi)臟-軀體長軸突反射引起的神經(jīng)源性炎癥是經(jīng)絡(luò)穴位活動的一部分，當內(nèi)臟感覺神經(jīng)所支配的組織結(jié)構(gòu)發(fā)生病變時，刺激并不直接進入中樞，而是經(jīng)過長軸突反射傳向皮膚感覺神經(jīng)末梢，感覺神經(jīng)末梢被刺激后釋放活性物質(zhì)而引起神經(jīng)源性炎癥反應。EB滲出點的出現(xiàn)極有可能就是內(nèi)臟病變引起的體表神經(jīng)源性炎性反應所伴隨的局部血管通透性改變的一個體現(xiàn)，這一變化來自內(nèi)臟的病變。本研究中模型組與生理鹽水組EB滲出的顯著差異提示穴位的功能是和疾病密切相關(guān)，隨著疾病的出現(xiàn)，穴位從正常的靜息態(tài)變?yōu)椴±頎顟B(tài)下的激活態(tài)。

督脈為“陽脈之海”，對全身的陽經(jīng)脈氣起統(tǒng)帥和督促作用，它與足太陽膀胱經(jīng)相鄰，督脈之別“別走太陽”，與足太陽膀胱經(jīng)經(jīng)氣交通，共主一身之陽氣。五臟六腑之氣皆通過背俞穴與足太陽膀胱經(jīng)相聯(lián)系，故督脈和背俞穴與臟腑經(jīng)脈氣血的功能活動密切相關(guān)。《素問·繆刺論》記載：“邪客于足太陽之絡(luò)，令人拘攣背急、引脅而痛，刺之從項始，數(shù)脊椎俠脊，疾按之，應手如痛，刺之傍三痏，立已。”描述了古人通過觸摸脊椎，在脊柱及其附近尋找壓痛點，以壓痛點進行診斷并以此作為治療部位進行針刺的方法。在現(xiàn)代臨床中也有較多應用脊柱及其周圍穴位診斷和治療疾病的報道。蓋國才［7］臨床驗證發(fā)現(xiàn)，在1 308例住院患者中，背俞穴被用作穴位壓痛辨病診斷法的基礎(chǔ)穴，診斷符合率達94.66%。郭長青等［8］認為，背俞穴出現(xiàn)的結(jié)節(jié)形狀不同，其所主之病亦不同。金珠［9］在針灸治療失眠癥中，采用背俞穴（肝俞、心俞、脾俞、腎俞、膽俞）為主穴，取得了良好的治療效果。張晨靜等［10］在對慢性功能性便秘患者的臨床觀察中發(fā)現(xiàn)，大部分患者的督脈存在壓痛點，這些壓痛點多分布于神道（T5）、靈臺（T6）、至陽（T7）、腰陽關(guān)（L4）和第 5 腰椎棘突下（L5）。高璐佼等［11］臨床研究發(fā)現(xiàn)，針刺督脈背段T3～T9部位不僅可用于治療胃食管反流病，還可根據(jù)督脈背段的壓痛情況判斷病情。我們在長期的臨床實踐中也發(fā)現(xiàn)，督脈背段穴位存在與消化系統(tǒng)疾病相關(guān)的痛覺敏化現(xiàn)象，當疾病治愈或好轉(zhuǎn)后，沿督脈背段相應的壓痛反應消失或明顯減輕。為進一步研究與胃潰瘍特異對應關(guān)系的背部穴位敏化的規(guī)律性，本研究應用吲哚美辛腹腔注射制作急性胃黏膜損傷模型，以體表EB滲出點為觀察指標。結(jié)果發(fā)現(xiàn)急性胃黏膜損傷大鼠在督脈背段及膀胱經(jīng)第一側(cè)線處皮膚出現(xiàn)較多的EB滲出點，滲出點呈現(xiàn)神經(jīng)節(jié)段分布，T2～L6均有EB滲出點，出現(xiàn)率較高的5個神經(jīng)節(jié)段為：T9>T13>T3>T10=T5，其中“身柱”“神道”“筋縮”“肝俞”“胃俞”等穴位具有較高的EB滲出率。從現(xiàn)代醫(yī)學角度看，負責內(nèi)臟運動和感覺的內(nèi)臟神經(jīng)初級中樞位于脊髓，通過脊神經(jīng)后支分布于背、腰、骶部的深肌層和皮膚，呈節(jié)段性分布規(guī)律，形成軀體-內(nèi)臟和內(nèi)臟-軀體反射通路［12］。現(xiàn)代研究認為，背俞穴的分布規(guī)律與脊神經(jīng)節(jié)段分布特點大致吻合，內(nèi)臟疾病的體表反應區(qū)往往是相應穴位所在［13］。可見，督脈及背俞穴敏化可反映臟腑疾病不僅僅是臨床實踐的規(guī)律總結(jié)，更有傳統(tǒng)中醫(yī)理論作為支撐和現(xiàn)代醫(yī)學實驗研究為其提供科學依據(jù)。

本研究中，急性胃黏膜損傷大鼠EB滲出點主要分布在背部，與何偉等［14］的研究基本一致。它們在EB滲出點的主要分布節(jié)段和穴位上雖有重疊，但并不完全一致，這可能與模型的制作方法不同有一定關(guān)系。本研究應用吲哚美辛腹腔注射法制作急性胃黏膜損傷模型，觀察其所致急性胃黏膜損傷大鼠的背部穴位敏化規(guī)律，將為應用針灸治療解熱鎮(zhèn)痛及非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥所產(chǎn)生的胃腸道副作用提供實驗依據(jù)。EB滲出點作為敏化穴位體表神經(jīng)源性炎性反應的一個體現(xiàn)，這種炎性反應所涉及的炎性物質(zhì)中有P物質(zhì)（substance P，SP）、降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）等［14］，這些物質(zhì)引起血管擴張和血漿滲出等一系列的炎性反應，進而導致局部皮膚痛覺過敏反應。EB滲出點與痛敏、壓敏等敏化形式在分布規(guī)律上重疊性如何有待進一步研究。此外，穴位敏化的概念讓我們進一步認識到揣穴的重要性，過去對穴位的研究多脫離穴位的功能而單純研究穴位的結(jié)構(gòu)，而且研究中為統(tǒng)一操作而“按圖索驥”的穴位定位方法難以保證不同個體定位的絕對準確，又沒有可靠的評判標準，因此有可能存在無效定位，其結(jié)果導致無法探明穴位結(jié)構(gòu)與功能相匹配的關(guān)鍵物質(zhì)結(jié)構(gòu)。因此今后研究中，如何解決實驗操作中統(tǒng)一定位和有效定位的矛盾是針灸研究中急需解決的一個問題。

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（編輯：張世霞）

Distribution of activated acupoints in the back of rat with acute gastric mucosal injury

Zhu Xiaoxiang，Xu Jinsen，Sa Zheyan，Wan Long，Huang Qianru，Pan Xiaohua，Yang Guangyin
（Fujian Academy of Traditional Chinese Medicine，F(xiàn)ujian Key Laboratory of Propagated Sensation along Meridian，F(xiàn)uzhou Fujian 350003）

Objective：To observe the distribution of Evan′s Blue（EB）spots at the back skin of rats with acute gastric mucosal injury，and to provide experimental basis for further research on the mechanism of activated acupoints.Methods：24 SD rats were randomly divided into normal saline group（n=6）and model group（n=18）.The acute gastric mucosal injury model was induced by NSAIDS.After 6 hours，rats were given tail vein injection of EB.Then the EB spots at the back skin of rats were observed and recorded.The gastric mucosal injury index （UI）was observed by Guth′s method.Results：Compared with the normal saline group，the UI and the number of EB spots along governor vessel（GV）on the back and Bladder meridian through the first side line in rats of the model group was significantly increased（P＜0.001）.The EB spots presented a nerve－segmental distribution.The most spots distributed along five nerve segments：T9＞T13＞T3＞T10=T5.The effusion rate of EB through"Shenzhu（GV12）""Shendao（GV11）""Jinshuo（GV8）""Ganshu（BL18）"and"Weishu（BL21）"was higher.Conclusion：Acute gastric mucosal injury can promote the effusion of EB in the body surface.EB spots presented a nerve－segmental distribution and were associated with the back－shu point and GV acupoints.The result suggested that the acupoints were activated in disease state.Increasing of the vascular permeability may be one of mechanism of acupoint activation.

acute gastric mucosal injury；activation of acupoint；governor vessel；back－shu point

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0005-04

國家自然科學基金資助項目（81573886）；福建省自然科學基金（2015J01680）；福建省衛(wèi)生系統(tǒng)中青年骨干人才培養(yǎng)項目（2015－ZQN－JC－35）；福建省經(jīng)絡(luò)感傳重點實驗室（2015）

朱小香，高級實驗師，碩士研究生，E－mail：706488801@qq.com

楊廣印，副研究員，本科，E－mail：ygy158158@163.com