紫外分光光度法測定晉產白芍芍藥苷含量

溫建英，李文偉，任 蕾，王京康

（山西中醫學院，山西太原030024）

紫外分光光度法測定晉產白芍芍藥苷含量

溫建英，李文偉，任 蕾，王京康

（山西中醫學院，山西太原030024）

目的：建立晉產白芍中芍藥苷含量的紫外分光光度測定方法。方法：用芍藥苷為對照品，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸（40∶10∶5∶0.2）為展開劑，用5%香草醛硫酸溶液為顯色劑，采用紫外分光光度法對白芍中芍藥苷進行含量測定。結果：在230 nm處測得白芍中芍藥苷含量為4.230%，回歸方程為y=21.918x+0.059 2，芍藥苷標準品在0.008 176～0.040 880 mg/mL濃度范圍內與吸光度線性關系良好，加樣回收率為95.42%，RSD為2.65%。結論：該方法操作簡便、穩定可靠、準確度高，適用于白芍的質量控制。

白芍；芍藥苷的含量測定；紫外分光光度法

白芍（Paeonia lactiflora）是毛茛科植物芍藥去了皮的干燥根。白芍主產于浙江、安徽等地［1-2］，具有養血調經、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽等功效，用于治療自汗、血虛萎黃、月經不調、腹痛等［3］。國內外對白芍的研究應用主要集中在化學成分、質量控制、藥理作用、抗氧化應用等方面。研究表明白芍主要有效成分為白芍總苷，70%以上為芍藥苷（paeoniflorin），具有擴張冠狀動脈、增加冠脈流量、抗急性心肌缺血、降低血壓等藥理作用［4-5］。白芍的藥用價值高，蘊藏著巨大的開發潛力。近年來，人工種植白芍方法不斷改進推廣，在山西也成立了白芍的人工種植基地。本文就山西本地所產白芍的指征性成分芍藥苷的含量進行測定。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

QE-300克粉碎機（浙江屹立工貿有限公司），JA4003精密電子天平（上海良平儀器儀表有限公司），十萬分之一分析天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司，型號：FA224），HH-6數顯恒溫水浴鍋，TU-1810紫外可見分光光度計，硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠，規格：50 ×100 mm），定性毛細管（上海積裕實驗設備有限公司，規格：0.3×100），PHS-4C+智能酸度計。

1.2 藥材與試劑

白芍，產自山西省靜樂縣杜家村，經山西中醫學院中藥鑒定教研室王兵老師鑒定，本實驗所用芍藥為正品。芍藥苷標準品（中國食品藥品檢定研究院），三吡啶三吖嗪 （tripyridyl-triazine，TPTZ，Aladdin）（上海伊卡生物技術有限公司），硫酸亞鐵、無水乙醇、三氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、甲酸、香草醛硫酸均為分析純（天津市科密歐化學試劑有限公司）。

2 方法與結果

2.1 白芍中芍藥苷的薄層定性鑒別

取白芍粉末0.5 g左右，加50%乙醇10 mL，超聲15 min，用濾紙濾過，于蒸發皿中蒸干，殘渣加乙醇1 mL溶解，作為供試品；再取芍藥苷標準品加50%乙醇制成1 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。分別用定性的毛細管各吸2管，交叉點于同一硅膠G薄層板上，用三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-甲酸（40∶10∶5∶0.2）為展開劑，展開完成取出，晾干，用5%香草醛硫酸溶液噴灑，以吹風機熱風熱至有顯色斑點出現。在色譜中，對照品和供試品在相同的位置上有相同大小的淺藍色斑點。結果見圖1。

圖1薄層色譜圖

由圖1可見，兩份樣品與對照品在相同的位置上有相同大小的淺藍色斑點，說明樣品中含有芍藥苷成分。

2.2 白芍中芍藥苷的含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱定芍藥苷標準品5.11 mg，以50%乙醇溶液定容至25 mL容量瓶中，配制成0.204 4 mg/mL濃度的對照品溶液，搖勻，靜置。得芍藥苷對照品溶液。

2.2.2 最大吸收波長的確定 取對照品溶液適量，以 50%（V/V）乙醇溶液為參比，于 200～600 nm波長處進行全波長掃描，確定最大吸收波長。結果見圖2。芍藥苷在230 nm處有最大吸收波長。

圖2 芍藥苷標準品光譜圖

2.2.3 標準曲線的繪制 分別精密移取2.2.1項下芍藥苷對照品 0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2 mL于10 mL于5個容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，并以其作為參比，在230 nm處測定各溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標（y），芍藥苷濃度為橫坐標（x）繪制標準曲線。結果如圖3。

芍藥苷回歸方程為y=21.918x+0.059 2，相關系數r=0.999 5。由圖3可知，芍藥苷標準品在0.008 176～0.040 880 mg/mL濃度范圍內線性關系良好。

圖3 芍藥苷標準曲線

2.2.4 供試品溶液的制備 白芍飲片粉碎，過80目篩。精密稱取白芍粉末1.000 g于250 mL錐形瓶中，加入50%乙醇50 mL，采用超聲提取法，提取33 min。減壓抽濾，50%乙醇定容至100 mL，搖勻，吸取1 mL原溶液于50 mL容量瓶中，50%乙醇定容至刻度，得樣品溶液，即供試品溶液。將一定量的白芍供試品溶液全波長掃描，來確認最大吸收波長。結果白芍的供試品溶液在230 nm處有最大吸收波長。結果見圖4。

圖4 白芍供試品溶液的光譜圖

2.2.5 精密度試驗 取適量的供試品溶液，以50%（V/V）乙醇溶液為參比，于230 nm處測定吸光度，平行測定5次代入回歸方程計算芍藥苷含量。結果見表1。

表1 精密度試驗結果

結果：該RSD值為0.27%，證明儀器精密度良好。2.2.6 穩定性試驗 取適量的供試品溶液于試管中，分別在 0 h，2 h，4 h，8 h，12 h 測定吸光度值。結果見表2。

表2 穩定性試驗結果

結果：該RSD值為0.64%，證明供試品溶液在12 h內穩定性良好。

2.2.7 重復性試驗 稱白芍粉末5份，每份1 g，精密稱定，用2.2.4法制備供試品溶液，在230nm下測定其相應的吸光度值，并計算芍藥苷含量。結果見表3。

表3 重復性試驗結果

結果：含量的RSD值為2.88%，證明該實驗重復性較好。

2.2.8 加樣回收率試驗 取5份已知含量的樣品，每份約50 mg，精密稱定，分別加入定量芍藥苷對照品溶液（0.204 4 mg/mL）10 mL，在 230 nm處檢測吸光度值，計算平均回收率。結果見表4。

表4 加樣回收率試驗結果

結果：平均回收率為95.42%，RSD為2.65%，證明本法回收率良好，測定結果較準確。

2.2.9 含量測定 平行精密稱定白芍粉末5份，各約1.000 g，依照2.2.4制備供試品溶液，以50%乙醇溶液為參比，于230 nm處測定吸光度值，計算白芍飲片中芍藥苷含量。結果見表5。經測定吸光度均值為0.245 2，代入回歸方程，求得白芍芍藥苷含量為0.008 461 mg/mL，占白芍藥材粉末百分比為4.230%。

表5 樣品含量測定結果

3 討論

通過紫外分光光度法對山西本地所產白芍飲片中的芍藥苷的含量進行測定，經測定芍藥苷標準品在0.008 176～0.040 88 mg/mL濃度范圍內線性關系良好，白芍芍藥苷含量為4.230%，符合《中國藥典》的規定。經相應的方法學考察，結果均較為理想。用紫外分光光度法測定白芍中芍藥苷的含量，該方法穩定可靠，準確度高，且操作簡便，可用于白芍中芍藥苷含量的測定。

［1］中國藥材公司，測繪科學研究院.中國藥材資源地圖集［M］.北京：科學出版社，1994：14-15，35-36.

［2］胡世林.中國道地藥材原色圖說［M］.濟南：山東科學技術出版社，1998：112，246.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：6.

［4］張曉燕，工金輝，李銑.白芍的化學成分研究［J］.沈陽藥科大學學報，2001，18（1）：30-32.

［5］劉鷹翔，馬玉卓.白芍的化學成分和藥理研究進展［J］.中草藥，1995，26（8）：437-440.

（編輯：張世霞）

Content determination of Paeoniflorin in Radix Paeoniae Alba from Shanxi by ultraviolet spectrophotometry

Wen Jianying，Li Wenwei，Ren Lei，Wang Jingkang
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To establish a method for determination of Paeoniflorin in Radix Paeonian Alba of Shanxi Province.Methods：The content of peony paeoniflorin was detected by UV with paeoniflorin as reference substance.The solvent system trichloromethane-methanol-ethyl acetate-formic acid（40∶2∶5∶0.2）was used as a developer and 5%vanillin aldehyde sulfuric acid as the spray reagent.Results：The content of Paeoniflorin in the samples was 4.230%.On the basis of statistical analyseso，a regressive equation between concentration（x）and absorbance（y）was established as below：y=21.918x+0.059 2.The standard curve of Paeoniflorin was linear in the concentration range of 0.008 176 to 0.040 88 mg/mL.The average recovery was 95.42%with the relative standard deviation（RSD）2.65%.Conclusion：The method is simple，stable and reliable，accurate and suitable for the quality control of Radix Paeoniae Alba.

Radix Paeonian Alba；determination of the content of the Paeoniflorin；ultraviolet spectrophotometry

R285

：A

：1671-0258（2017）03-0014-03

溫建英，助教，碩士，E-mail：50285213@qq.com