楮實(shí)子油對大鼠血脂和脂肪組織的影響

王國權(quán), 龐素秋, 劉蒲， 李永， 林俊生， 刁勇

(1. 華僑大學(xué) 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院, 福建 泉州 362021；2. 華僑大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 福建 泉州 362021；3. 中國人民解放軍第180醫(yī)院 臨床藥學(xué)科, 福建 泉州 362000；4. 華僑大學(xué) 化工學(xué)院, 福建 廈門 361021)

楮實(shí)子油對大鼠血脂和脂肪組織的影響

王國權(quán)1,2, 龐素秋3, 劉蒲1,2， 李永4， 林俊生1,2， 刁勇1,2

(1. 華僑大學(xué) 生物醫(yī)學(xué)學(xué)院, 福建 泉州 362021；2. 華僑大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 福建 泉州 362021；3. 中國人民解放軍第180醫(yī)院 臨床藥學(xué)科, 福建 泉州 362000；4. 華僑大學(xué) 化工學(xué)院, 福建 廈門 361021)

探討楮實(shí)子油(FBO)的脂肪酸的化學(xué)組成及其對大鼠血脂和脂肪組織的影響.首先，用氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法對FBO脂肪酸化學(xué)成分進(jìn)行分析測定；然后，給48只雄性Wistar大鼠飼喂含膽固醇和FBO的飼料28 d，以空白對照和辛伐他汀分散片陽性藥對照比較FBO對大鼠血脂指標(biāo)和脂肪組織的影響.結(jié)果表明：GC-MS法測定出FBO中的11個化合物，主要成分為亞油酸(67.03%)、棕櫚酸(30.53%)、亞麻酸(1.45%)和δ-生育酚；FBO可顯著降低高脂模型大鼠肝臟及脂肪組織的質(zhì)量，降低甘油三酯、總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)濃度，升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的濃度.此外，F(xiàn)BO中68%以上為多不飽和脂肪酸，并含有少量強(qiáng)抗氧化劑δ-生育酚(0.54%)，二者可能是影響高脂模型大鼠有調(diào)節(jié)血脂和抑制皮下脂肪組織聚集作用的主要成分.

楮實(shí)子油； 多不飽和脂肪酸；δ-生育酚； 血脂； 脂肪組織； 大鼠

Abstract： The chemical compositions of fructus broussonetiae oil (FBO) and the effects of dietary FBO on the plasma lipids and adipose tissue were investigated in this study. The chemical composition of FBO fatty acid was determined by gas chromatography and mass spectrometry (GC-MS). Then the effects of FBO on lipid indexes and adipose tissue of 48 male Wistar rats who were fed with diet containing FBO and cholesterol for 28 days were compared using blank control and simvastatin dispersible tablets as positive control. The results showed that eleven compounds were identified from FBO, with the main ingredients of linoleic acid (67.03%), hexadecanoic acid (30.53%), linolenic acid (1.45%), and delta-tocopherol. The FBO could significantly decrease the adipose tissue weight, and the concentrations of triacylglycerol, total cholesterol and low-density li-poprotein cholesterol (LDL-C), whereas increase the concentration of high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C). In addition, more than 68% of FBO were multiple unsaturated fatty acids, and contained a small number of powerful antioxidant delta- tocopherol (0.54%), both of which might be the main ingredients which could regulate blood lipid and inhibit the aggregation in subcutaneous adipose tissue of the high fat model rats.

Keywords： fructus broussonetiae oil； polyunsaturated fatty acids；δ-tocopherol； plasma lipids； adipose tissue； rat

楮實(shí)子(fructus broussonetiae)為桑科構(gòu)樹屬構(gòu)樹(Broussonetiapapyrifera)的干燥成熟果實(shí)[1],具有補(bǔ)腎、清肝、明目、利尿的功效，臨床上用于治療腰膝酸軟、虛勞骨蒸、頭暈?zāi)炕琛⒛可ぁ⑺[脹滿， 還可以治療頑癬、神經(jīng)性皮炎、濕疹等皮膚病.楮實(shí)子不僅具有開發(fā)治療老年性疾病新藥的潛力，還可以制成美容保健類的產(chǎn)品[2].文獻(xiàn)[3-4]的前期研究中已發(fā)現(xiàn)楮實(shí)子中的多個活性部位和成分，以及生物活性.Li等[5]發(fā)現(xiàn)楮實(shí)子提取物具有改善阿爾茨海默病模型認(rèn)知功能.此外，有文獻(xiàn)記載及現(xiàn)代研究均證實(shí)楮實(shí)子中含大量的不飽和脂肪酸[6-7].本文用氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)法對楮實(shí)子油(FBO)成分進(jìn)行分析，并探討楮實(shí)子油對大鼠血脂和脂肪組織的影響.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1材料與儀器

1.1.1 材料與試劑 楮實(shí)子于2015年8月采自福建省泉州市清源山(東經(jīng)118°30′21″，北緯24°55′39″)，性狀特征參照文獻(xiàn)經(jīng)鑒定為桑科植物構(gòu)樹的成熟果實(shí)[8].楮實(shí)子油于動物實(shí)驗(yàn)前用吐溫-80、蒸餾水配制成質(zhì)量濃度分別為12.5,25.0,50.0 g·L-1的乳濁液.辛伐他汀分散片(陽性對照藥物)，廣州南新制藥有限公司生產(chǎn)，批號SST01204，用吐溫-80和蒸餾水配制成質(zhì)量濃度為0.2 g·L-1的乳濁液.膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒，購自日本協(xié)和醫(yī)藥株式會社(Kyowa Medex).高脂飼料配方：質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為90.3%基礎(chǔ)飼料，2.0%膽固醇，0.5%膽鹽,0.2%丙基硫氧嘧啶和7.0%豬油.石油醚(沸程30～60 ℃)、乙醚、氫氧化鉀與甲醇,均為分析純.

1.1.2 主要儀器 7980型氣相色譜儀、5975型質(zhì)譜儀、MSD Chemstation D.03.00.611型色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，均為美國Agilent公司產(chǎn)品；質(zhì)譜檢索數(shù)據(jù)庫為NIST MS Search 2.0；AS 3000 型自動進(jìn)樣器；索氏提取裝置；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置：EYELA N-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，EYELA OSB-2100型水浴鍋，EYELA SCA-111型冷卻水循環(huán)裝置，均為日本東京理化器械上海愛朗儀器有限公司產(chǎn)品；SHZ-D(Ⅲ)型循環(huán)水式真空泵，河南省鞏義市予華儀器有限公司產(chǎn)品；JA2003A型電子分析天平，上海精天電子儀器有限公司產(chǎn)品；全自動生化分析儀，美國Beckman 公司產(chǎn)品.

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動物 Wistar大鼠48只，雄性，一級動物，體質(zhì)量為(160±20) g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供，生產(chǎn)許可證號:SCXK(滬) 2016-0002.

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取楮實(shí)子油 按文獻(xiàn)[9-10]的方法將楮實(shí)子干燥后粉碎，準(zhǔn)確稱取10.0 g，用濾紙包好放入索氏提取器中，加入150 mL 無水乙醚；連接好冷凝裝置，放入40 ℃水浴中回流提取8 h，待冷卻過濾后，將得到的提取液置于真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑；得到橙黃色澄清油狀液體，即FBO，保存于-4 ℃冰箱中備用.為精確計(jì)算出油率，取平行試驗(yàn)中的1份放入105 ℃烘箱中干燥至恒質(zhì)量，經(jīng)計(jì)算，出油率為30.97%.

1.2.2 FBO樣中的脂肪酸組成測定 采用GC-MS法，色譜柱為Agilent HP-5 MS石英毛細(xì)管柱(柱尺寸：30.00 m×0.25 mm×0.25 μm).質(zhì)譜檢測器：EI電離源、電離電壓為70 eV、源溫為200 ℃，發(fā)射電流為150 μA，質(zhì)荷比(m/z)掃描范圍為50～550，掃描周期為0.5 s.數(shù)據(jù)采集掃描模式為全掃描，溶劑延遲時間為1 min.程序升溫：起始溫度70 ℃保持3 min，以5 ℃·min-1速度升溫至180 ℃，保持5 min，再以4 ℃·min-1速度升溫至260 ℃，保持10 min.進(jìn)樣口溫度為250 ℃，進(jìn)樣體積為0.5 μL，分流進(jìn)樣，分流比為30∶1.載氣He的流量為1 mL·min-1.峰面積歸一化法計(jì)算各化合物的相對含量.

1.2.3 動物血脂及相關(guān)指標(biāo)測定 雄性Wistar大鼠48只，室溫20～24 ℃，自然光照，自由進(jìn)食、飲水，每籠8只,在實(shí)驗(yàn)環(huán)境下大鼠喂飼基礎(chǔ)飼料觀察1周，隨機(jī)分為6 組.A組為空白對照組喂普通飼料，灌胃給吐溫-80 乳濁液，其余組喂高脂飼料；B,C,D組按每千克大鼠體質(zhì)量分別灌胃給予10 mL質(zhì)量濃度為12.5,25.0,50.0 g·L-1的楮實(shí)子油/吐溫-80乳濁液；E組按每千克大鼠體質(zhì)量分別灌胃給予10 mL質(zhì)量濃度為0.2 g·L-1的辛伐他汀分散片/吐溫-80乳濁液(大鼠的等效劑量相當(dāng)于人類正常給藥劑量的6.3倍[11])；F組灌胃給予同質(zhì)量的吐溫-80 乳濁液.

給藥處置前進(jìn)行眼眶采血，測血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的質(zhì)量濃度；然后，每日給藥1次，連續(xù)4周，并進(jìn)行眼眶采血測其TC，TG，LDL-C，HDL-C的質(zhì)量濃度；最后，處死動物，稱其體質(zhì)量，并取其肝、心、腎周脂肪及附睪脂肪稱量，計(jì)算臟器/體質(zhì)量比值，即臟體系數(shù).

2 結(jié)果與分析

2.1楮實(shí)子油中的脂肪酸GC-MS分析結(jié)果

通過GC-MS法測定出楮實(shí)子油中脂肪酸成分,如表1所示.表1中：t為保留時間；w為質(zhì)量分?jǐn)?shù).

由表1可知：楮實(shí)子油中共有11種化合物，主要成分分別為亞油酸(67.03%)，棕櫚酸(30.53%)和亞麻酸(1.45%)，即飽和脂肪酸占比30.57%，多不飽和脂肪酸占比68.48%，多不飽和脂肪酸與飽和脂肪酸的比值(P/S值)為2.24.

由表1還可知：FBO中還被測出含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.54%的δ-生育酚，以及少量的植物醇及烯醛類成分.

表1 楮實(shí)子油中脂肪酸成分 Tab.1 Chemical constituents and contents of fructus broussonetiae oil

2.2楮實(shí)子油對大鼠體質(zhì)量、臟器及臟體系數(shù)的影響

楮實(shí)子油對大鼠體質(zhì)量、臟器及臟體系數(shù)的影響(n=8)，如表2所示.由表2可知：通過對各實(shí)驗(yàn)組與空白組的比較，除陽性藥對照組動物體質(zhì)量增長不明顯外(P>0.05)，其余各組動物體質(zhì)量均顯著增長(P<0.05)；與高脂模型組比較，動物體質(zhì)量增長均顯著低于模型組(P<0.05)，這說明楮實(shí)子油對高脂血癥動物模型大鼠的體質(zhì)量增加有明顯抑制作用.各劑量組對動物體質(zhì)量的影響并未呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，其中，25.0 g·L-1實(shí)驗(yàn)組動物體質(zhì)量表現(xiàn)出比其他劑量組略有升高.該現(xiàn)象是否與飲食中的脂肪酸的配比有關(guān)，有待進(jìn)一步研究.

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，陽性藥對照組和楮實(shí)子油各劑量組與高脂模型組比較，可明顯降低受試動物的肝臟、腎周脂肪和附睪脂肪的質(zhì)量(P≤0.05，或P≤0.01)；除12.5 g·L-1的FBO實(shí)驗(yàn)組對肝臟系數(shù)無明顯影響外，F(xiàn)BO各劑量組對肝臟系數(shù)、腎周脂肪系數(shù)與附睪脂肪系數(shù)均有明顯降低，表明FBO對高脂血癥動物模型大鼠的脂肪聚集有抑制作用(P≤0.05，或P≤0.01).

a) 與空白組比較，P≤0.05； b) 與高脂組比較，P≤0.05； c) 與空白組比較，P≤0.01； d) 與高脂組比較，P≤0.01.

2.3楮實(shí)子油對大鼠血脂生化指標(biāo)的影響

楮實(shí)子油對大鼠血脂生化指標(biāo)的影響，如表3所示.由表3可知：與空白組比較，高脂模型組大鼠血清的TG和TC的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著升高，HDL-C則顯著降低(P≤0.05，或P≤0.01)；與高脂模型組比較，辛伐他汀組及FBO高、中、低劑量組的大鼠血清TG和TC的質(zhì)量分?jǐn)?shù)均顯著降低，而HDL-C則顯著升高(P≤0.05，或P≤0.01)；與陽性對照藥辛伐他汀比較，F(xiàn)BO質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25.0,50.0 g·L-1的兩個劑量組在降低大鼠血清TG效果方面無明顯差異.說明，F(xiàn)BO對高脂血癥動物模型大鼠有一定的降血脂作用.

表3 楮實(shí)子油對大鼠血脂生化指標(biāo)的影響Tab.3 Effects of fructus broussonetiae oil on blood lipid biochemical indexes in rats

a) 與空白組比較，P≤0.01； b) 與空白組比較，P≤0.05； c) 與高脂組比較，P≤0.05； d) 與高脂組比較，P≤0.01；e) 與辛伐他汀組比較，P≤0.05； f) 與辛伐他汀組比較，P≤0.01.

3 討論

楮實(shí)子作為補(bǔ)益中藥使用已有上千年的歷史，文中實(shí)驗(yàn)證實(shí)其含有大量脂肪酸，質(zhì)量分?jǐn)?shù)約占30%，其中，68%以上為亞油酸和亞麻酸，均為多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids，PUFA).文中測定到FBO的11個成分，與文獻(xiàn)[7]的報道基本一致，亞油酸和亞麻酸這兩個主成分也大致相同，但遠(yuǎn)不及文獻(xiàn)[6]報道的成分多.這可能與后者的超臨界CO2流體萃取率較高有關(guān).

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)FBO具有調(diào)節(jié)血脂及抑制脂肪聚集作用是與其富含PUFA有密切聯(lián)系的.PUFA是指含有兩個及以上雙鍵的長鏈脂肪酸，在機(jī)體內(nèi)具有廣泛的生理功能和生物學(xué)效應(yīng).具有維護(hù)生物膜的結(jié)構(gòu)和功能、治療心血管疾病、抗炎、抗癌，以及促進(jìn)大腦發(fā)育、減肥等功能[12].據(jù)報道，日本糧食中添加PUFA能抑制動物生脂酶基因的表達(dá)和增加脂肪分解相關(guān)酶基因的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)體脂代謝[13].研究證實(shí)，PUFA可能是通過增加肝的AMPK和PPAR-YmRNA表達(dá)而發(fā)揮減輕體質(zhì)量及抑制體脂聚集的降脂效果[14].本實(shí)驗(yàn)中FBO含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)68%的PUFA，并可明顯降低受試動物的肝臟、腎周脂肪和附睪脂肪的聚集.

通過實(shí)驗(yàn)可知，本實(shí)驗(yàn)楮實(shí)子油中含有0.54%的δ-生育酚.生育酚，又稱維生素E，是存在于細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)較強(qiáng)的抗氧化劑，具有降低肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化損傷作用[15].VE主要分布于線粒體，可改善線粒體功能，促進(jìn)氧化磷酸化，加速脂肪氧化，有降低血漿膽固醇和甘油三酯含量的作用，是維持體內(nèi)血脂穩(wěn)定的一個重要因素.研究表明，核桃油復(fù)合VE能顯著降低雄性高脂血癥大鼠血中的TC和LDL-C，而高劑量核桃油復(fù)合 VE 還能升高其血漿HDL-C值，提高動物的抗動脈粥樣硬化指數(shù)[16].因此，楮實(shí)子油隨著劑量的增大，表現(xiàn)出較好的對高血脂模型大鼠降低TC，TG，LDL-C值，以及升高HDL-C值的作用，具有非常全面的調(diào)節(jié)血脂的功效，以此來達(dá)到預(yù)防血栓形成、降低血管動脈粥樣硬化發(fā)病率.

楮實(shí)子原植物構(gòu)樹在全國分布廣泛，野生資源豐富，果實(shí)含油高，得油率也很高.綜上可知，F(xiàn)BO在保健食品和藥品領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用價值和前景，有待進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用研究.

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(責(zé)任編輯： 黃仲一英文審校： 劉源崗)

EffectsofFructusBroussonetiaeOilonBloodLipidsandAdiposeTissueinRats

WANG Guoquan1,2, PANG Suqiu3, LIU Pu1,2, LI Yong4, LIN Junsheng1,2, DIAO Yong1,2

(1. School of Biomedical Sciences, Huaqiao University， Quanzhou 362021, China；2. School of Medicine, Huaqiao University， Quanzhou 362021, China；3. Department of Clinical Pharmacy， The 180th Hospital of People′s Liberation Army， Quanzhou 362000， China；4. School of Chemical Engineering, Huaqiao University， Xiamen 361021, China)

10.11830/ISSN.1000-5013.201705035

2017-05-18

龐素秋(1972-)，女，副主任藥師，博士，主要從事天然藥物研發(fā)的研究.E-mail:1074730795@qq.com.

福建省泉州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(200712Z)

R 285.5

A

1000-5013(2017)05-0682-05