原發免疫性血小板減少癥患兒中T淋巴細胞亞群、NK細胞及B細胞在外周血中的表達情況分析

張 晴,高長俊

(河北省唐山市婦幼保健院 小兒血液科,河北 唐山,063000)

原發免疫性血小板減少癥患兒中T淋巴細胞亞群、NK細胞及B細胞在外周血中的表達情況分析

張 晴,高長俊

(河北省唐山市婦幼保健院 小兒血液科,河北 唐山,063000)

目的研究原發免疫性血小板減少癥患兒中T淋巴細胞亞群、NK細胞及B細胞在外周血中的表達情況。方法選擇ITP患兒241例作為研究組，另選擇252例健康兒童作為對照組，檢測并比較2組患兒T淋巴細胞亞群(CD3、CD4、CD8細胞)、B細胞和NK細胞水平。結果研究組外周靜脈血中CD3水平、CD4水平和CD4/CD8顯著低于對照組,CD8水平顯著高于對照組(P<0.05);研究組血清中B細胞水平低于對照組。研究組的PAIgG、PAIgA、PAIgM水平顯著高于對照組(P<0.05),IFN-γ水平高于對照組,IL-4水平低于對照組;研究組CD(16+56)水平高于對照組。結論ITP患兒機體存在T淋巴細胞水平失衡,NK細胞以及B細胞表達未見異常發生。

原發免疫性血小板減少癥;T淋巴細胞亞群;NK細胞;B細胞;表達

ABSTRACT:ObjectiveTo explore expression of T lymphocyte subsets,NK cells and B cells in peripheral blood of children with primary immunologic thrombocytopenia(ITP).MethodsA total of 241 ITP children admitted to our hospital were selected as study group,and 252 healthy children were selected as control group.The levels of T lymphocyte subsets(CD3,CD4,CD8cells) and B cells and NK cells in the two groups were detected and compared.ResultsThe levels of CD3,CD4and CD4/CD8in the peripheral blood of the study group were significantly lower,CD8level was significantly higher,and B cells level was significantly lower than that of the control group (P<0.05).The levels of PAIgG,PAIgA and PAIgM in the study group were significantly higher,the level of IFN-γ was higher,IL-4 level was lower,the level of CD(16+56) was higher than that in the control group (P<0.05).ConclusionThere is an imbalance of T lymphocyte level in the children with ITP,and there was no abnormality in the expression of NK cells and B cells.

KEYWORDS:primary immunologic thrombocytopenia;T lymphocyte subsets;NK cells;B cells;expression

免疫性血小板減少癥(ITP)是兒童時期最常見出血性免疫性疾病之一[1],主要癥狀有凝血功能障礙、顱內出血、皮膚黏膜出血以及血小板減少等，而顱內出血是ITP致死的高危因素之一。相關研究[2-3]表明,ITP發病機制為患者體內產生抗血小板抗體，導致網狀內皮系統破壞血小板，血小板數量減少。臨床治療方法主要為藥物治療，即采取激素或者丙種球蛋白，抑制自身抗體產生，封閉網狀內皮系統受體，從而減少血小板的被破壞。臨床研究[4-5]顯示，部分患兒治療無效，病程遷徙，預后不良，最終進展為慢性/難治性ITP。最新研究[6]發現，免疫性血小板減少癥的主要發病機制是機體的細胞免疫和體液免疫異常導致的血小板破壞增加和生成不足，而骨髓穿刺具有創傷性，是否需要常規骨穿仍存在爭議，而通過檢測血小板參數對ITP的早期診斷，治療過程中療效判斷及預后極其重要。本研究對本院小兒血液科病房收治的ITP患兒的T淋巴細胞亞群、NK細胞及B細胞在外周血中的表達情況進行研究，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年6月—2015年6月本院小兒血液科病房收治的ITP患兒241例作為研究組，其中男169例，女72例，年齡3～12歲，平均(7.6±1.3)歲，病程7～25 d,平均病程為(8.72±1.26) d。納入標準:患兒入院后均進行血常規檢查、抗血小板檢查以及化驗T淋巴細胞亞群后確診為原發ITP,排除繼發性血小板減少癥、淋巴細胞增殖、系統性紅斑狼瘡、假性血小板減少癥和各種自身免疫性病導致的血小板減少癥狀[7]。另選擇本院同期來體檢的252例健康兒童作為對照組，其中男165例，女87例，年齡3～12歲，平均(8.2±1.4)歲。2組的性別、年齡等一般資料比較無顯著差異(P>0.05),具有可比性。2組受檢者在進行檢查前4周均無進行輸血以及使用糖皮激素或者相關疫苗接種。所有患者為自愿參加，簽署知情同意書。

1.2 方法

本研究所選儀器和試劑為美國生產的生化分析儀(規格:貝克曼DXC800),流式細胞儀(規格:貝克曼Gallios)，血液分析儀(規格:貝克曼LH750)。

2組受檢者晨起空腹狀態下抽取外周靜脈血2 mL,血清進行乙二胺四乙酸抗凝處理后，取100 μL新鮮乙二胺四乙酸抗凝血標本加入樣品測定管內，同時加入20 μL四色免洗淋巴細胞亞群分析試劑，進行充分混合，后加入2 mL血溶素，再次進行充分混合操作，于10 min后采用流式細胞儀(規格:貝克曼Gallios)檢驗T淋巴細胞亞群(即CD3、CD4、CD8細胞)、B細胞和NK細胞水平。對2組受檢者的T淋巴細胞亞群和B細胞水平進行記錄、計算并比較分析，同時對2組受檢者血小板相關抗體、血清細胞和NK細胞水平進行記錄、計算并比較分析。

1.3 統計學分析

采用SPSS 16.0統計學處理軟件進行數據分析，計量資料采用方差分析，以均數±標準差表示，計數資料采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 2組受檢者T淋巴細胞亞群和B細胞水平比較

研究組外周靜脈血中CD3水平、CD4水平和CD4/CD8顯著低于對照組,CD8水平顯著高于對照組(P<0.05);研究組血清中B細胞水平低于對照組，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 2組受檢者血小板相關抗體、血清細胞和NK細胞水平比較

研究組的血小板相關免疫球蛋白G(PAIgG)、血小板相關免疫球蛋白A(PAIgA)、血小板相關免疫球蛋白M(PAIgM)水平顯著高于對照組(P<0.05);研究組γ-干擾素(IFN-γ)水平高于對照組，白介素-4(IL-4)水平低于對照組;研究組CD(16+56)水平高于對照組。見表2。

表1 2組受檢者T淋巴細胞亞群和B細胞水平比較

與對照組比較,*P<0.05。

表2 2組受檢者NK細胞水平比較

與對照組比較,*P<0.05。

3 討 論

ITP作為兒童時期易發的自身免疫性出血性疾病，臨床表現以血小板減少、凝血功能障礙和皮膚黏膜出血為主要特點，顱內出血是本病死亡的主要原因。目前對本病的認識多集中在血小板相關抗體致血小板被破壞，但臨床上相當一部分患兒血小板相關抗體呈陰性，且應用常規的糖皮質激素、丙種球蛋白等治療后仍有復發[8-11]。

T淋巴細胞在抗原刺激活化作用，產生淋巴因子，調節機體免疫功能，而絕大多數血小板，其自身抗體的產生是由輔助性T淋巴細胞、NK細胞以及B淋巴細胞生成，而ITP患兒的免疫功能紊亂則是引起ITP患兒發病的重要原因[12]。使T淋巴細胞亞群、NK細胞以及B淋巴細胞水平恢復正常，是保證機體進行正常免疫應答的核心[13]。NK細胞作為人體重要的免疫細胞，不僅起到抗病毒感染的作用，還與免疫調節息息相關，同時參與機體內參與自身免疫性疾病。本研究通過對初診ITP患兒的T細胞亞群、NK細胞、B淋巴細胞和血小板相關參數的對比，以及對部分患兒生活質量的調查，較為深入的探討ITP的免疫學發病機制，以期對臨床治療提供一定指導，從而更好地讓ITP患兒參與社會生活[14-16]。本研究結果顯示，ITP患兒與正常體檢兒童相比,CD3、CD4T淋巴細胞、CD4/CD8比值均明顯低于正常體檢兒童,CD8T淋巴細胞明顯高于正常體檢兒童,ITP患兒存在明顯的免疫功能紊亂，這可能是由于T淋巴細胞比例失常，患兒血清內輔助性T淋巴細胞水平降低，使得抑制性T淋巴細胞含量上升，從而抑制B淋巴細胞功能發揮充分，導致B細胞功能性亢進。CD4T細胞水平降低，導致B細胞水平上升，生成大量漿細胞，生成的抗血小板抗體可以縮短血小板的存活時間，使骨髓巨核細胞引起成熟性障礙，導致血小板功能障礙。通過研究發現，ITP患兒的NK細胞和B細胞，雖與正常體檢兒童相比，有輕微差異，但其NK細胞和B細胞表達未見異常，

[1] 中華醫學會兒科學分會血液學組,《中華兒科雜志》編輯委員會.兒童原發性免疫性血小板減少癥診療建議[J].中華兒科雜志,2013,51(5):382-384.

[2] 陸于蘭,張娜,邵靜波,等.兒童急性原發性免疫性血小板減少癥的初始治療指征[J].中華實用兒科臨床雜志,2014,29(12):919-922.

[3] Zhang X M,Shan N N,Sun M,et al.Imbalanced expression of human Tim-1 and Tim-3 in peripheral blood mononuclear cells from immune thrombocytopenia patients[J].International immunopharmacology,2014,19(1):1-4.

[4] 張燕燕,朱淑霞,李建廠,等.Th9細胞及白細胞介素-9在兒童免疫性血小板減少癥發病機制中的作用[J].國際免疫學雜志,2016,39(1):38-40.

[5] 馬靜瑤,吳潤暉,陳振萍,等.兒童原發性免疫性血小板減少癥初發病例T輔助細胞因子表達水平意義初探[J].血栓與止血學,2013,19(3):110-114,117.

[6] 黃美玲,李長鋼,王國兵,等.白細胞相關免疫球蛋白樣受體-1在免疫性血小板減少癥患兒中的表達[J].中國當代兒科雜志,2014,16(4):370-374.

[7] 王鋼強,李長鋼,王國兵,等.免疫性血小板減少癥患兒調節性T淋巴細胞白細胞相關免疫球蛋白樣受體表達的意義[J].中華實用兒科臨床雜志,2015,30(7):521-524.

[8] 李珊珊,蔣慧,夏敏,等.持續性和慢性免疫性血小板減少癥患兒免疫抗體表達的意義[J].中華實用兒科臨床雜志,2015,30(7):517-520.

[9] 汪儉,許喆,程邦寧,等.急性原發免疫性血小板減少癥患兒T淋巴細胞亞群NK細胞及B細胞變化的探討[J].安徽醫學,2012,33(3):280-281.

[10] Shan N N,Hu Y,Hou M,et al.Decreased Tim-3 and its correlation with Th1 cells in patients with immune thrombocytopenia[J].Thrombosis Research:An International Journal on Vascular Obstruction,Hemorrhage and Hemostasis,2014,133(1):52-56.

[11] 蘇文芳,陳梅英,鄭振光,等.T淋巴細胞亞群、NK細胞及B細胞在急性原發免疫性血小板減少癥患兒外周血中的表達[J].海南醫學,2016,27(22):3656-3657,3658.

[12] Mckenzie C G J,Guo L,Freedman J,et al.Cellular immune dysfunction in immune thrombocytopenia (ITP)[J].British Journal of Haematology,2013,163(1):10-23.

[13] 崔亞杰,管玉潔,劉煒,等.兒童原發免疫性血小板減少癥患者外周血濾泡調節性和輔助性T細胞的變化[J].中華血液學雜志,2014,35(11):980-984.

[14] 陳誠,王佳,李義德,等.免疫性血小板減少癥患兒外周血CD4+CD25+調節T細胞和Th17細胞的變化[J].寧夏醫科大學學報,2013,35(8):864-867.

[15] 劉夫紅.Th1/Th2及Th17/Treg細胞平衡在免疫性血小板減少癥發病中的意義[J].中國小兒血液與腫瘤雜志,2013,18(2):90-92,96.

[16] 王穎超,劉滿菊,朱桂英,等.Th17/Treg細胞比例失衡在兒童原發性免疫性血小板減少癥中的意義[J].中國當代兒科雜志,2016,18(3):238-242.

ExpressionofTlymphocytesubsets,NKcellsandBcellsinperipheralbloodofchildrenwithprimaryimmunologicthrombocytopenia

ZHANGQing,GAOChangjun

(DepartmentofPediatricHematology,TangshanMaternalandChildHealthCareHospitalofHebeiProvince,Tangshan,Hebei,063000)

R 558

A

1672-2353(2017)17-045-03

10.7619/jcmp.201717013

2017-04-11

河北省衛生廳(Z2011236)