大白菜BrTILs基因鑒定及功能分析

楊翠翠，崔冰，張一卉，李景娟，李化銀，劉立鋒，王鳳德，高建偉

(1.山東省農業科學院蔬菜花卉研究所/山東省設施蔬菜生物學重點實驗室/國家蔬菜改良中心山東分中心，山東 濟南 250100；2.山東師范大學生命科學學院，山東 濟南 250100； 3.曹縣第一中學， 山東 菏澤 274200)

大白菜BrTILs基因鑒定及功能分析

楊翠翠1,3，崔冰1,2*，張一卉1，李景娟1，李化銀1，劉立鋒1，王鳳德1，高建偉1

(1.山東省農業科學院蔬菜花卉研究所/山東省設施蔬菜生物學重點實驗室/國家蔬菜改良中心山東分中心，山東 濟南 250100；2.山東師范大學生命科學學院，山東 濟南 250100； 3.曹縣第一中學， 山東 菏澤 274200)

溫度誘導載脂蛋白(temperature induced lipocalin, TIL)在調控植物生長發育以及抗逆境脅迫方面具有重要作用。本研究利用生物信息學方法，從大白菜基因組中鑒定獲得4個TILs基因(被命名為BrTILs)，它們不均勻分布在大白菜2、3、10號染色體上。通過對其基因和蛋白特征的分析發現，BrTILs基因編碼區序列長414～750 bp，預測編碼蛋白氨基酸長度為137～249 aa，分子量15.71～28.41 kD，等電點4.90～9.25。通過多重序列比對發現，BrTILs基因不同成員的DNA序列存在高度的相似性，但不同成員的exon/intron結構存在較大差異。利用RT-qPCR技術對BrTILs基因的表達模式進行分析發現，不同成員在不同組織中的表達以及對溫度脅迫的響應模式方面存在較大差異，這可能與它們的啟動子區具有不同的順式響應元件有關。在擬南芥中過量表達BrTIL2和BrTIL4基因發現，雖然它們的表達模式存在較大差異，但是二者在抗溫度和鹽脅迫中的功能相似。過量表達BrTIL2和BrTIL4基因都不能提高轉基因植株對溫度脅迫的基礎抗性，但二者均可提高轉基因植株對鹽脅迫的抗性。本研究不僅為我們全面了解大白菜TILs基因功能奠定基礎，也為大白菜抗逆分子育種提供了重要參考。

大白菜；TIL基因；溫度脅迫；鹽脅迫

AbstractThe temperature induced lipocalin (TIL) protein plays an important role in the regulation of plant growth and development as well as the resistance to various stresses. In this study, four TIL genes were identified from the Chinese cabbage genome by bioinformatics method, and they were unevenly distributed on the Chinese cabbage chromosomes of A02, A03 and A10. Through the analysis of their gene and protein characteristics, it was found that the coding region of the four TIL genes were 414～750 bp, the predicted amino acid length were 137～249 aa, the molecular weight were 15.71～28.41 kD, and the pI value were 4.90～9.25. The multiple sequence alignment revealed that the DNA sequences of differentBrTILswere highly similar, while their exon/intron structures were largely different. Furthermore, the expression pattern ofBrTILgenes were analyzed using real-time quantitative PCR method (qRT-PCR). It was shown that differentBrTILshad different expression patterns in different tissues of Chinese cabbage and the response patterns to temperature stress were also different, which might be related to different cis-elements in their promoter regions. The over-expression ofBrTIL2 andBrTIL4 genes inArabidopsisrevealed that they both had similar functions in response to temperature and salt stress although their expression patterns had big differences. For example, over-expression ofBrTIL2 andBrTIL4 genes could not improve the resistance to temperature stress, but could enhance the resistance to salt stress. This study not only provides a basis for the comprehensive understanding of the function ofTILgenes in Chinese cabbage, but also provides important references for their applications in molecular breeding of Chinese cabbage.

KeywordsChinese cabbage;TILgene; Temperature stress; Salt stress

載脂蛋白(lipocalins)是一個古老的、功能多樣的蛋白家族，廣泛存在于動物、植物以及微生物中[1-5]。2002年，人們從小麥和擬南芥中分離鑒定出第一個植物載脂蛋白[6]。由于植物載脂蛋白受溫度脅迫誘導而顯著表達，因此又被命名為溫度誘導載脂蛋白(temperature induced lipocalin, TIL)。近幾年的研究表明，TIL在調控植物生長發育以及抗溫度脅迫、鹽脅迫和氧化脅迫等過程中發揮重要作用[7-11]。

大白菜(BrassicarapaL. ssp.pekinensis)起源于中國，是我國分布最廣、種植面積最大的蔬菜作物，常年種植面積2×106公頃左右，素有“國菜”之稱。多年的生產實踐表明，大白菜不耐高溫、冷凍，對高鹽、干旱等逆境脅迫也非常敏感。因此，挖掘與大白菜抗逆境脅迫相關的基因并用于大白菜分子設計育種將有助于培育具有較強逆境脅迫抗性的大白菜新品種。基于TIL基因已取得的研究進展，本研究擬對大白菜TILs基因的組成、表達模式以及功能等進行系統分析，以期為大白菜抗逆分子設計育種奠定基礎。

1 材料與方法

1.1植物材料

大白菜(BrassicarapaL. ssp.pekinensis)為山東地方品種福山包頭，擬南芥為哥倫比亞野生型(Col-0)。

1.2BrTILs基因鑒定及分析

以擬南芥AtTIL(AT5G58070)蛋白序列為探針在大白菜基因組數據庫(Brassicadatabase，http://brassicadb.org/brad/)[12,13]中進行BlastP檢索，參數默認。然后利用基因ID號下載所有BrTILs成員的DNA和蛋白序列用于后期分析。

利用ProtParam在線軟件(http://web.expasy.org/protparam/)分析BrTILs蛋白的氨基酸長度、分子量及等電點等理化性質；利用Gene Structure Display Server在線分析軟件(http://gsds.cbi.pku.edu.cn/)分析BrTILs基因的exon/intron組成結構；利用大白菜基因組數據庫中的syntenic gene在線分析工具(http://brassicadb.org/brad/searchSyntenytPCK.php)分析擬南芥和大白菜TILs基因之間的共線性關系；利用DNAMAN 6.0.40軟件對擬南芥和大白菜TILs基因序列進行多重比對分析；利用PlantCARE(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/)在線分析軟件對BrTILs基因起始密碼子上游1.5 kb范圍進行順式響應元件分析。

1.3 RNA提取及反轉錄

RNA提取和反轉錄分別采用Trizol總RNA提取試劑盒(Invitrogen，美國)和cDNA第一鏈合成試劑盒(TaKaRa，大連寶生物)，步驟按試劑盒說明書進行。

1.4表達模式分析

BrTILs基因在不同組織器官中的表達模式分析：分別提取包心初期(23～25葉期)根、莖、蓮座葉、包葉以及開花期盛開的花、受精后10天的果莢和花蕾的總RNA，然后以反轉錄產物為模板，以大白菜Actin基因為內參，利用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)方法分析其表達模式，所用引物如表1。

BrTILs基因對高溫和低溫脅迫的響應模式分析：將種子表面消毒后播種于裝滿營養土(草炭土∶蛭石=1∶3)的小花盆(7 cm×7 cm)內，每盆4棵，然后20℃、16 h光照/8 h黑暗條件下培養，待長出第三片真葉時(約兩周)，進行高溫(35℃)和低溫(4℃)脅迫處理，并在處理0、1、3、6、9、12 h時分別取樣。提取總RNA，以反轉錄產物為模板，以大白菜Actin基因為內參，利用RT-qPCR方法分析其表達模式，所用引物如表1。

表1實時熒光定量PCR引物

1.5基因克隆

根據BrTILs基因序列設計克隆引物如下：BrTIL2-F:5′-CGGGATCCGGAAGAAAAGATGACGC-AA-3′, BrTIL2-R:5′-GCTCTAGACTGTAACTATT-TGCCGAACATAGA-3′; BrTIL4-F:5′-CGGGATCC-GAGAAGAAAAGATGACGTCGACGGA-3′, BrTIL4-R:5′-GCTCTAGAGCGTCCATGTGTATCTACTTGCCG-A-3′，帶下劃線堿基分別為BamHⅠ和XbaⅠ酶切位點。

以cDNA為模板進行PCR擴增，將擴增產物分別連接到克隆載體pMD18-T(TaKaRa，大連寶生物)上，轉化大腸桿菌，測序鑒定。

1.6植物表達載體構建

用限制性內切酶BamHⅠ和XbaⅠ(TaKaRa)分別雙酶切含目的基因的克隆載體和植物表達載體pCAMBIA-2300，然后電泳、切膠回收目的基因片段和線性pCAMBIA-2300植物表達載體，最后用T4 DNA連接酶(TaKaRa)連接回收片段。

1.7轉基因植株的獲得及表型分析

首先將構建的植物表達載體轉化農桿菌感受態細胞，然后利用浸滲花蕾法轉化野生型擬南芥。通過卡那霉素抗性篩選、PCR擴增的方法，經過至少兩代以上的篩選鑒定獲得分別過量表達BrTIL2和BrTIL4的轉基因擬南芥純合體植株。

低溫脅迫處理：將正常條件下(20℃、16 h光照/8 h黑暗)生長30 d的轉基因擬南芥轉入4℃培養箱(16 h光照/8 h黑暗)培養48 h，然后測定光系統Ⅱ最大光化學效率(Fv/Fm)。

高溫脅迫處理：將正常條件下生長30 d的轉基因擬南芥轉入40℃培養箱(16 h光照/8 h黑暗)培養24 h，然后測定Fv/Fm值。

NaCl脅迫處理：利用200 mmol/L NaCl溶液處理正常條件下生長30 d的轉基因擬南芥，處理21 d后測定Fv/Fm值。

Fv/Fm值采用便攜式熒光儀(Handy PEA)測定，測定時將Handy PEA光源強度調整為 3 000 μmol/(m2·s)(飽和光強)，作用光為波峰650 nm的紅光，熒光信號記錄時程2 s。另外，測定前需將植株葉片暗適應至少30 min。

上述試驗均以轉空載體植株(vector)作為對照。

2 結果與分析

2.1BrTILs基因鑒定及序列分析

以擬南芥TIL(AT5G58070)蛋白的氨基酸序列為探針，利用BlastP技術對大白菜基因組數據庫(http://brassicadb.org/brad/)進行搜索，共獲得4個大白菜TILs基因(基因ID分別為：Bra020391、Bra020393、Bra006784和Bra002674)，根據它們在染色體上的相對位置分別命名為BrTIL1、BrTIL2、BrTIL3和BrTIL4(表2)。進一步分析發現，4個BrTILs基因的編碼序列(CDS)長度為414～750 bp，預測編碼的氨基酸序列長度為137～249 aa，分子量為15.71～28.41 kD，等電點為4.90～9.25。

表2大白菜BrTILs基因及其編碼蛋白特征分析

基因基因號染色體正反鏈所在位置編碼序列蛋白長度(aa)分子量(kD)等電點BrTIL1Bra020391A02+5501909/550386475024928.414.90BrTIL2Bra020393A02+5507094/550774056418721.566.10BrTIL3Bra006784A03+5039845/504049556418721.435.97BrTIL4Bra002674A10_8365381/836579441413715.719.25

利用DNAMAN軟件對大白菜和擬南芥TILs基因的核苷酸序列進行多重比對發現，BrTILs與AtTIL基因之間具有較高的序列一致性和保守性，其中BrTIL2與AtTIL基因之間的序列相似性高達85.64%(圖 1)。這種序列上的高度一致性說明它們可能具有相似的生物學功能。

圖1大白菜與擬南芥TILs基因序列多重比對分析

大白菜和擬南芥都屬于十字花科植物，二者具有較近的親源關系和良好的基因組共線性關系[14]。根據Brassicadatabase中共線性數據(http://brassicadb.org/brad/searchSynteny.php)可知，BrTIL1、BrTIL3和BrTIL4與AtTIL屬于共線性基因，而BrTIL1和BrTIL2則屬于串聯重復基因。

另外，通過對擬南芥和大白菜TILs基因的exon/intron結構分析發現，AtTIL、BrTIL2和BrTIL3基因含有1個內含子，BrTIL1基因含有2個內含子，而BrTIL4基因則不含有內含子(圖 2)。

圖2擬南芥和大白菜TILs基因的exon/intron結構分析

2.2BrTILs基因啟動子區順式響應元件分析

為了研究BrTILs基因的生物學功能，我們利用PlantCARE在線分析軟件對其起始密碼子(ATG)上游1.5 kb序列進行了分析。發現BrTILs基因啟動子區除了都含有TATA-box和CAAT-box外，還有多個其它順式響應元件。但不同BrTILs基因啟動子區所含有的順式響應元件的種類和數量存在較大差別。例如，BrTIL1基因啟動子區不存在HSE順式響應元件，而BrTIL2、BrTIL3和BrTIL4則分別存在4、1、2個HSE順式響應元件。這種順式響應元件種類和數量的不同暗示不同基因在調控植物生長發育及響應外界脅迫的過程中可能發揮不同的作用。

表3大白菜和擬南芥TILs基因啟動子區順式響應元件分析

注：ABRE (cis-acting element involved in the abscisic acid responsiveness)、ARE (cis-acting regulatory element essential for the anaerobic induction)、ERE (ethylene-responsive element)、CAT-box (cis-acting regulatory element related to meristem expression)、G-box (cis-acting regulatory element involved in light responsiveness)、GARE-box (gibberellin-responsive element)、GT1-motif (light responsive element)、HSE (cis-acting element involved in heat stress responsiveness)、MBS (MYB binding site involved in drought-inducibility)、TCA-element (cis-acting element involved in salicylic acid responsiveness)、TGA-element (auxin-responsive element)、circadian (cis-acting regulatory element involved in circadian control)。

2.3BrTILs基因表達模式分析

2.3.1BrTILs在不同組織器官中的表達模式 利用RT-qPCR方法對BrTILs基因在不同組織器官中的表達模式進行分析發現，不同BrTILs基因的表達模式存在顯著差異。其中，BrTIL1基因在所有被檢測組織中均未見表達；BrTIL2和BrTIL3基因均在結球初期的成熟葉中表達量最高，但分別在根和花蕾中表達量最低；BrTIL4基因則在盛開的花中表達量最高，在短縮莖中表達量最低。這種組織表達的特異性可能暗示不同成員在調控大白菜器官發育過程中發揮不同的作用。

圖3 大白菜TILs基因在不同組織中的表達模式

2.3.2BrTILs基因對高溫和低溫處理的響應模式 如圖4所示，在高溫和低溫處理后均檢測不到BrTIL1基因的轉錄表達(未作圖)；高溫處理誘導BrTIL2基因的轉錄表達，而抑制BrTIL4基因的表達；低溫處理誘導BrTIL4基因的轉錄表達，而抑制BrTIL2基因的表達；高溫和低溫處理都抑制BrTIL3基因的轉錄表達。這些結果說明不同BrTILs基因在響應大白菜溫度脅迫中可能發揮不同的作用。

圖4 大白菜TILs基因對高溫和低溫處理的響應模式

2.4過量表達BrTIL2和BrTIL4基因對轉基因擬南芥耐溫度脅迫的影響

待植株長到7～8片葉時，分別對轉空載體(vector)、過量表達BrTIL2和過量表達BrTIL4基因的擬南芥進行40℃高溫和4℃低溫處理。然后在高溫處理24 h和低溫處理48 h時測定過量表達和對照植株的Fv/Fm值。結果表明，在高溫和低溫處理后，對照和BrTIL2和BrTIL4轉基因植株的Fv/Fm值都有不同程度的降低。但比較發現，對照與過量表達BrTIL2和BrTIL4植株之間的Fv/Fm值并不存在顯著差異(表4和表5)。說明過量表達BrTIL2和BrTIL4基因并沒有顯著改變擬南芥的基礎耐熱性和耐冷性。

2.5過量表達BrTIL2和BrTIL4基因對轉基因擬南芥耐NaCl脅迫的影響

待植株長到7～8片葉時，用200 mmol/L NaCl溶液處理對照、過量表達BrTIL2和過量表達BrTIL4基因的擬南芥植株，處理21 d時測定Fv/Fm值。結果表明，200 mmol/L NaCl處理21 d時，對照、BrTIL2和BrTIL4轉基因擬南芥植株的Fv/Fm值都明顯降低，說明鹽脅迫對對照和轉基因植株都造成了傷害。但比較發現，過量表達BrTIL2和BrTIL4基因植株的Fv/Fm值顯著高于對照，說明過量表達BrTIL2和BrTIL4基因提高了轉基因植株對NaCl脅迫的抗性。

表4 過量表達BrTIL2基因對溫度脅迫下擬南芥Fv/Fm值的影響

注：試驗結果以平均值±標準差表示，轉基因株系與野生型之間的差異顯著性用兩組數據的成組數據t檢驗進行分析，標記“ns”表示差異不顯著，標記“*”表示差異顯著(P<0.05)，標記“**”表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。

表5 過量表達BrTIL4基因對溫度脅迫下擬南芥Fv/Fm值的影響

表6過量表達BrTIL2和BrTIL4基因對NaCl脅迫下擬南芥Fv/Fm值的影響

3 討論與結論

大白菜與擬南芥同屬于十字花科植物，在進化上具有較近的親緣關系。但是擬南芥基因組中僅有一個TIL成員[15]，而我們從大白菜基因組中鑒定得到4個TILs成員。Wang等[12]的研究認為，大白菜和擬南芥起源于共同的祖先，然而在進化過程中大白菜基因組發生了3倍化復制。此外，在進化過程中BrTIL1基因自身也發生了一次復制并形成BrTIL2基因，從而最終導致大白菜基因組中存在4個TILs基因。

通過序列比對發現，BrTILs基因之間存在高度的序列保守性。但通過表達模式分析發現，4個BrTILs基因之間的表達模式存在較大的差異，說明不同的大白菜TIL成員在調控大白菜生長發育及響應逆境脅迫過程中可能是通過不同的方式實現的。另外，通過對不同成員啟動子區順式響應元件的分析也部分證明了上述推測，因為不同BrTILs基因啟動子區的順式響應元件的數量和種類存在顯著差異。

光合作用對脅迫傷害最為敏感，因此逆境環境中光合作用的提高是植物抗逆性增強的重要表現[16-18]，而光系統Ⅱ的Fv/Fm值則可以作為探測光合作用強弱的探針[19]。在本研究中，高溫和低溫處理后不同基因型擬南芥的Fv/Fm值都不同程度降低，但它們之間并未表現出顯著差異，說明過量表達BrTIL2和BrTIL4基因并沒有顯著提高轉基因植株對溫度脅迫的抗性，這與Chi等[7]的研究結果一致。Chi等研究發現，AtTIL1基因功能缺失會導致植株耐熱性缺陷，但過量表達AtTIL1基因并不能顯著提高轉基因植株的耐熱性。也就是說，AtTIL1對于高溫下植物的耐受性是必需的，但其本身又不足以抵抗熱脅迫。

Abo-Ogiala等[11]研究發現，AtTIL可以在鹽脅迫條件下保護葉綠體免受鹽離子的毒害。在本研究中，我們也得到了類似的結果，鹽脅迫條件下，過量表達BrTIL2和BrTIL4基因的擬南芥植株的Fv/Fm值顯著高于野生型，說明過量表達BrTILs基因能顯著提高轉基因植株的耐鹽性。

總之，本研究不僅為我們全面了解大白菜TILs基因功能奠定了基礎，也為大白菜抗逆分子育種提供了重要參考。

[1] Akerstrom B, Flower D R, Salier J P. Lipocalins: unity in diversity[J]. Biochimica Et Biophysica Acta, 2000, 1482 (1/2): 1-8.

[2] Bishop R E. The bacterial lipocalins[J]. Biochimica Et Biophysica Acta, 2000,1482 (1/2): 73-83.

[3] Rassart E, Bedirian A, Do Carmo S, et al. Apolipoprotein D[J]. Biochimica Et Biophysica Acta, 2000, 1482 (1/2):185-198.

[4] Sánchez D, Ganfornina M D, Bastiani M J. Lazarillo, a neuronal lipocalin in grasshoppers with a role in axon guidance[J]. Biochimica Et Biophysica Acta, 2000, 1482 (1/2): 102-109.

[5] Sánchez D, Ganfornina M D, Gutiérrez G, et al. Exonintron structure and evolution of the lipocalin gene family[J]. Molecular Biology & Evolution, 2003, 20 (5): 775-783.

[6] Charron J B F, Breton G, Badawi M, et al. Molecular and structural analyses of a novel temperature stress-induced lipocalin from wheat andArabidopsis[J]. FEBS Lett., 2002, 517 (1/3):129-132.

[7] Chi W, Fung R M, Liu H, et al. Temperature induced lipocalin is required for basal and acquired thermotolerance inArabidopsis[J]. Plant Cell & Environment, 2009, 32(7): 917-927.

[8] Uemura M, Tominaga Y, Nakagawara C, et al. Responses of the plasma membrane to low temperatures[J]. Physiologia Plantarum, 2006, 126: 81-89.

[9] Charron J B F, Ouellet F, Houde M, et al. The plant Apolipoprotein D ortholog protectsArabidopsisagainst oxidative stress[J]. BMC Plant Biology, 2008, 8(1): 1-12.

[10] Boca S,Koestler F,Ksas B,et al.Arabidopsislipocalins AtCHL and AtTIL have distinct but overlapping functions essential for lipid protection and seed longevity[J]. Plant Cell & Environment,2013,37(2):368-381.

[11] Abo-Ogiala A,Carsjens C,Diekmann H,et al. Temperature-induced lipocalin (TIL) is translocated under salt stress and protects chloroplasts from ion toxicity[J]. Journal of Plant Physiology,2014,171(3/4):250-259.

[12] Wang X, Wang H, Wang J, et al. The genome of the mesopolyploid crop speciesBrassicarapa[J]. Nature Genetics,2011,43:1035-1039.

[13] Cheng F, Mandáková T, Wu J, et al. Deciphering the diploid ancestral genome of the mesohexaploidBrassicarapa[J]. Plant Cell,2013,25:1541-1554.

[14] 方璐, 程鋒, 武劍, 等. 全基因組與串聯復制后白菜基因的保留[J]. 生物技術通報, 2012(11): 9-14.

[15] Charron J B F, Ouellet F, Pelletier M, et al. Identification, expression, and evolutionary analyses of plant lipocalins[J]. Plant Physiology, 2005, 139:2017-2028.

[16] Baker N R. A possible role for photosystem Ⅱ in environmental perturbation of photosynthesis[J]. Physiologia Plantarum, 1991, 81:563-570.

[17] 王玉麗, 孫居文, 荀守華, 等. 干旱脅迫對東岳紅光合特性、葉綠素熒光參數及葉片相對含水量的影響[J]. 山東農業科學, 2017，49(4): 46-50.

[18] 陳露露, 王秀峰, 劉美, 等. 外源鈣對干旱脅迫下黃瓜幼苗葉片膜脂過氧化和光合特性的影響[J]. 山東農業科學，2016，48(4):28-33.

[19] Baker N R. Chlorophyll fluorescence: a probe of photosynthesisinvivo[J]. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology, 2008, 59: 89-113.

IdentificationandFunctionalAnalysisofBrTILGenesinChineseCabbage(BrassicarapaL.ssp.pekinensis)

Yang Cuicui1,3, Cui Bing1,2*, Zhang Yihui1, Li Jingjuan1, Li Huayin1, Liu Lifeng1, Wang Fengde1, Gao Jianwei1

(1.InstituteofVegetablesandFlowers,ShandongAcademyofAgriculturalSciences/ShandongProvincialKeyLaboratoryofGreenhouseVegetableBiology/ShandongBranchofNationalVegetableImprovementCenter,Jinan250100,China; 2.CollegeofLifeSciences,ShandongNormalUniversity,Jinan250100,China; 3.CaoxianNo.1SeniorHighSchool,Heze274200,China)

10.14083/j.issn.1001-4942.2017.09.003

2017-05-12

山東省自然科學基金項目(ZR2015YL071)；國家自然科學基金項目(31471884)；山東省農業科學院青年英才計劃項目(NKYSCS-01)；山東省現代農業產業技術體系蔬菜創新團隊遺傳育種崗位(SDAIT-05-04)；山東省農業科學院創新工程項目(CXGC2016A02)

楊翠翠(1988—)，女，碩士研究生，主要從事蔬菜分子生物學研究。E-mail: cuixuncui@126.com 崔冰(1990—)，男，碩士研究生，主要從事蔬菜分子生物學研究。E-mail: bice1981@sina.com *同等第一作者。

王鳳德(1979—)，男，副研究員，主要從事蔬菜分子生物學研究。E-mail: wfengde@163.com 高建偉(1967—)，男，研究員，主要從事蔬菜遺傳育種研究。E-mail: jianweigao3@qq.com

S643.1：Q78

A

1001-4942(2017)09-0012-07