四川不同產(chǎn)地厚樸中揮發(fā)油及多糖含量分析

董佳悅，劉美琳，任波，張梅

·品種品質(zhì)·

四川不同產(chǎn)地厚樸中揮發(fā)油及多糖含量分析

董佳悅，劉美琳，任波*，張梅*

目的：分析比較四川不同產(chǎn)地厚樸中揮發(fā)油和多糖的含量，鑒別揮發(fā)油組成，為川厚樸產(chǎn)區(qū)優(yōu)質(zhì)種質(zhì)資源篩選及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。方法：采用《中國藥典》（2015年版）揮發(fā)油測定法甲法測定厚樸中揮發(fā)油含量，并運用GC-MS法鑒別揮發(fā)油組成；采用可見分光光度法測定厚樸中多糖的含量。結(jié)果：不同產(chǎn)地厚樸揮發(fā)油、多糖含量分別為0.18%～0.40%及5.47%～21.51%；從10個產(chǎn)地厚樸揮發(fā)油中共鑒定出93個化學(xué)成分，其中10種為共有成分。結(jié)論：四川境內(nèi)不同產(chǎn)地厚樸中揮發(fā)油在成分及含量上存在一定的差異，多糖含量差異較大。

川厚樸;揮發(fā)油;多糖;GC-MS分析;含量測定

厚樸Magnolia of fi cinalisRehd.et Wils為傳統(tǒng)名貴藥材，其歷史悠久、藥用價值顯著。厚樸中主要含有酚類、揮發(fā)油類、生物堿類、多糖等成分。厚樸資源分布較廣，在四川西南部、湖北西部、陜南及甘南等地均有其資源分布[1]。四川作為厚樸的主產(chǎn)區(qū)之一，其出產(chǎn)的厚樸被統(tǒng)稱為“川樸”，為傳統(tǒng)的道地藥材。川樸資源遍及四川都江堰市、樂山市（夾江、峨邊）、阿壩州、峨眉山市（黃灣、凈水、川主、高橋）、眉山、雅安等多個地區(qū)。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，由于環(huán)境及地理間的差異，不同產(chǎn)地間厚樸中化學(xué)成分組成及含量差異顯著。為了解四川各產(chǎn)區(qū)厚樸種質(zhì)資源情況，我們采集了四川省內(nèi)10個不同產(chǎn)地的二十年左右樹齡厚樸，對其中揮發(fā)油類成分的含量、組成及多糖含量進(jìn)行了分析與比較，現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。

1 材料

1.1 藥材

厚樸藥材樣品分別從四川都江堰、峨眉山、樂山、眉山、阿壩州、雅安六個地區(qū)，10個厚樸產(chǎn)區(qū)收集，由成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與鑒定系裴瑾教授鑒定。均為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalisRehd.Et Wils.的干燥干皮。

1.2 儀器

UV-2600(日本島津公司)，Agilent 7890A-5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司），BT 125D型電子天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），揮發(fā)油提取器（藥典規(guī)格）。

1.3 試劑

D-無水葡萄糖，濃硫酸、苯酚無水硫酸鈉（分析純），正己烷（色譜純）均購于成都市科龍化工試劑廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 多糖的含量測定[2-3]

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取D-無水葡萄糖對照品10.24 mg，置10 mL量瓶中，加蒸餾水溶解，并定容至刻度，搖勻，得到葡萄糖對照品貯備液A。精密移取貯備液A 適量于10 mL容量瓶中，得60 μg．mL-1對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取0.5 g厚樸粉末（過三號篩），置100 mL圓底燒瓶中，加40 mL蒸餾水，加熱回流提取2 h，放冷，濾過，取上清液濃縮至原體積的1/4，緩慢加入4倍量的無水乙醇，靜置過夜。棄去上清液，冷凍干燥，取部分干燥沉淀物加熱水溶解，得厚樸多糖供試品溶液。

2.1.3 檢測波長的確定 精密吸取葡萄糖貯備液A、厚樸多糖溶液各1.0 mL于具塞試管中，加入5%苯酚溶液0.6 mL，搖勻；再加入濃硫酸4 mL，搖勻；置100 ℃水浴加熱10 min；然后冰浴5 min，將其取出。在400～600 nm波長下分別進(jìn)行掃描，最終確定在484 nm處有最大吸收。

2.1.4 線性關(guān)系考察 分別吸取該貯備液A 0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL于10 mL量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻。再分別精密吸取1.0 mL不同系列濃度的葡萄糖溶液于具塞試管中，以1 mL蒸餾水為空白，加入5%苯酚溶液0.6 mL，搖勻；再加入濃硫酸4 mL，搖勻；置100 ℃水浴加熱10 min；然后冰浴5 min，將其取出。即得空白對照液和不同濃度葡萄糖對照品溶液。在484 nm波長分別測定上述對照品溶液吸光度。以吸光度A對濃度C（mg．mL-1）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A =11.959C-0.0175，r=0.998（n=7）。表明葡萄糖在0～0.080 mg．mL-1濃度范圍內(nèi)與其吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.1.5 精密度考察． 取1份厚樸樣品（S1）供試液，連續(xù)6次測定吸光度，其RSD為0.67%（n=6）。表明儀器的精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性考察 取1份厚樸樣品（S1）供試液，于顯色后0,20,40,60,80,100 min分別測定吸光度，其RSD為2.72%（n=6）。表明供試液于顯色反應(yīng)后在100 min內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7 重復(fù)性考察 取厚樸樣品（S1）粉末，6份。按供試液的制備方法制備，測定吸光度，計算多糖含量，其RSD為2.08%（n=6）。表明方法的重復(fù)性良好。

2.1.8 加樣回收試驗 取0.25 g厚樸粉末，平行6份，分別精密加入葡萄糖對照品，按“2.1.2”項下供試品溶液制備方法制備，測定吸光度，計算多糖含量，其平均回收率為99.52 %（n = 6），RSD為2.13%，表明方法的準(zhǔn)確度良好。

2.1.9 樣品測定 取不同產(chǎn)地厚樸樣品粉末，平行3份，按上述方法測定多糖含量。四川不同產(chǎn)地厚樸中多糖含量差異較大，其中以峨眉山市高橋鎮(zhèn)黃茅村多糖含量較高為21.51%，以雅安市漢源縣烏斯河厚樸多糖含量較少為5.47%。

2.2 揮發(fā)油分析與鑒別

2.2.1 揮發(fā)油的制備 依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)和《中國藥典》（2015年版）四部“通則2204”甲法[4-5]。準(zhǔn)確稱取100 g干燥厚樸粉末。于1000 mL的圓底燒瓶中，加入800 mL蒸餾水，連接水蒸氣蒸餾裝置，提取8 h，冷卻，靜置，讀取刻度，記錄揮發(fā)油體積（見表1）。加入正己烷、無水Na2SO4干燥后，放入冰箱中待用。

表1 四川不同產(chǎn)地厚樸樣品來源及多糖、揮發(fā)油含量（n=3）

2.2.2 GC-MS分析條件 氣相色譜條件：HP-5MS毛細(xì)管色譜柱 (30 m×250 μm×0.25 μm) ( 美國安捷倫公司) 。升溫程序，初始溫度50 ℃保持5 min，以10℃．min-1至120 ℃，再以2 ℃．min-1至150 ℃，再以5 ℃．min-1至280 ℃，運行53 min。載氣：He，載樣量：1 μL，流速1 mL．min-1，分流比30:1，進(jìn)樣口溫度280 ℃ 。質(zhì)譜條件：離子源EI，離子源溫度 250℃ ，溶劑延遲時間4 min，質(zhì)譜范圍m/z 35～550。

2.2.3 GC-MS結(jié)果分析 四川不同地區(qū)厚樸揮發(fā)油成分按“2.2.2”測定，利用NIST2008質(zhì)譜庫(美國)進(jìn)行計算機(jī)檢索，同時查閱相關(guān)文獻(xiàn)[6-8]，確定了其中93個化學(xué)成分及各成分相對含量。

2.2.4 揮發(fā)油結(jié)果分析 結(jié)果見表2。從表1中揮發(fā)油提取得率分析可知，眉山市洪雅縣張村鄉(xiāng)（S10）厚樸含油量均較高，含量為0.4%，峨眉山市川主鄉(xiāng)( S6) 以及峨眉山市黃灣鄉(xiāng)木瓜村(S7)揮發(fā)油含量均超過0.3% ，其次是都江堰龍池鎮(zhèn)虹口景區(qū)觀風(fēng)溝(S1)、峨眉山市高橋鎮(zhèn)黃茅村(S3)、峨眉山市川主鄉(xiāng)荷葉村(S5)、阿壩州(S4)、樂山市峨邊縣白村(S8)以及雅安市漢源縣烏斯河(S9)揮發(fā)油含量均達(dá)0. 2%以上，含量偏低的是產(chǎn)自峨眉山市凈水鄉(xiāng)黑水村（S2）。因此從揮發(fā)油含量的研究結(jié)果可見眉山市厚樸揮發(fā)油含量較高。

GC-MS分析：從表2中揮發(fā)油成分分析可知，不同產(chǎn)地采集的厚樸揮發(fā)油含量及成分相差較大，實驗中采用水蒸氣蒸餾法，提取揮發(fā)油的成分組成較為豐富，主要為一些萜烯類、萜醇類、倍半萜類、高級脂肪烷烴類以及含氧衍生物等。10個四川不同產(chǎn)地厚樸中，都江堰龍池鎮(zhèn)虹口景區(qū)觀風(fēng)溝(S1)成分豐富度均較高，含51個成分，占揮發(fā)油含量的79.94%，而采自雅安市漢源縣烏斯河的厚樸樣品(S9)僅測出23個成分，占揮發(fā)油含量的70.99%。從10個產(chǎn)地中共檢測出93個化學(xué)成分，其中10種為共有成分。分別為β-石竹烯、α-石竹烯 、α-衣蘭油烯、氧化石竹烯、棕櫚酸、12-Oxabicyclo[9.1.0]dodeca-3，7-diene，1，5，5，8-tetramethyl-，(1R，3E，7E，11R)-、1-isopropyl-7-methyl-4-methylene-1，2，3，4，4a，5，6，8a-octahydronaphthalene、Naphthalene，1，2-dihydro-4，7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-，(1S)-、Cadalin、Naphthalene，decahydro-4a-methyl-1-methylene-7-(1-methylethenyl)-，(4aR，7R，8aS)-。其中以β-石竹烯和氧化石竹烯含量較高，可見為厚樸揮發(fā)油的主要成分。

表2 四川不同產(chǎn)地厚樸揮發(fā)油成分分析

13.398 橙花醇 0.10 － － － － － － － － － C10H18O 13.951 香葉醇 0.61 － － － 0.09 － － － － 0.09 C10H18O 14.051 Phenol,4-(2-propen-1-yl)- 0.10 －－－－－－－－－ C9H10O 14.686 乙酸冰片酯 0.46 － － － － － － － － － C12H20O2 14.704 左旋乙酸冰片酯 － － － － － － － 0.07 － 0.11 C12H20O2 16.639 乙酸橙花酯 0.09 － － － － － － － － － C12H20O2 16.836 (+)-Cyclosativene 0.14 0.16 0.09 － 0.22 － 0.22 0.36 0.31 0.36 C15H24 17.124 a-Cubebene － 0.86 0.97 0.22 1.32 0.44 1.85 1.69 2.54 3.32 C15H24 17.110 a-蒎烯 1.77 － － － － － － － － － C15H24 18.535 β-石竹烯 6.76 4.12 6.28 0.52 5.68 1.91 1.76 6.13 4.48 9.83 C15H24 19.317 (+)-香橙烯 0.16 － 0.19 － 0.22 － 0.06 0.20 － － C15H24 19.453 [1R-(1R*,4Z,9S*)]-4,11,11-三甲基-8-亞甲基-二環(huán)[7.2.0]4-十一烯 0.26 0.16 － － － 0.12 － － 0.26 0.32 C15H24 19.474 4,7-Methanoazulene,1,2,3,4,5,6,7,8-octahydro-1,4,9,9-tetramethyl-, (1S,4R,7R)- －－－－－－0.17 －－－ C15H24 19.611 α-石竹烯 1.96 1.02 1.54 0.22 1.51 0.61 0.50 1.49 1.02 2.27 C15H24 20.409 1-isopropyl-7-methyl-4-methylene-1,2,3,4,4a,5,6,8aoctahydronaphthalene 1.96 2.08 1.87 0.85 2.56 1.60 3.15 20.42 3.45 3.01 C15H24 20.782 Naphthalene,decahydro-4a-methyl-1-methylene-7-(1-methylethenyl)-,(4aR,7R,8aS)- 2.54 1.24 1.00 1.39 1.55 0.89 1.36 1.07 1.95 1.85 C15H24 20.903 Naphthalene,1,2,4a,5,8,8a-hexahydro-4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-,(1S,4aR,8aS)- 0.58 －－－－－－－－－ C15H24 21.096 g-Selinene － 1.18 1.02 1.38 1.53 － 1.26 1.03 － 1.91 C15H24 21.090 Naphthalene,1,2,3,4,4a,5,6,8a-octahydro-4a,8-dimethyl-2-(1-methylethenyl)-, (2R,4aR,8aR)-2.68 － － － －0.86 － －1.58 － C15H24 21.257 α-衣蘭油烯 1.00 2.11 1.70 1.04 2.48 1.47 2.54 2.01 2.48 2.14 C15H24 21.480 Azulene,1,2,3,5,6,7,8,8a-octahydro-1,4-dimethyl-7-(1-methylethenyl)-, (1S,7R,8aS)- －－－－－－－－－0.03 C15H24 21.509 l-b-Bisabolene 0.13 －－－－－－－－－ C15H24 21.733 1,6-Cyclodecadiene,1-methyl-5-methylene-8-(1-methylethyl)-, (1E,6E,8S)- －－－0.13 －－－－－－ C15H24 21.781 (-)-g-Cadinene 0.32 0.34 0.28 － 0.38 0.34 0.47 0.35 0.52 0.50 C15H24 22.180 d-Cadinene 3.15 5.86 6.46 － 6.62 3.46 3.94 5.43 5.75 5.91 C15H24 22.486 Naphthalene,1,2,3,4,4a,7-hexahydro-1,6-dimethyl-4-(1-methylethyl)- －－－－0.12 －－－－－ C15H24 22.901 Naphthalene,1,2-dihydro-4,7-dimethyl-1-(1-methylethyl)-, (1S)- 0.82 0.83 0.92 0.47 0.93 1.11 1.37 1.53 1.66 1.54 C15H20 23.433 欖香素 0.43 0.24 － － － － － － － － C12H16O3 23.474 Benzene,1,2,3-trimethoxy-5-(1E)-1-propen-1-yl-－－－－0.10 －－－－－C12H16O3 23.782 反式-橙花叔醇 － 0.32 － － － 0.30 － 0.26 － 0.18 C15H26O 24.600 氧化石竹烯 3.89 8.54 8.47 2.44 7.29 6.72 4.78 7.48 9.39 7.71 C15H24O 25.330 喇叭茶醇 － － － － － 0.27 － 0.30 － － C15H26O 25.356 1H-Cycloprop[e]azulen-4-ol,decahydro-1,1,4,7-tetramethyl-, (1aR,4S,4aS,7R,7aS,7bS)- －－－－－－0.30 －－－ C15H26O 25.356 globulol －－－－－－－－－0.25 C15H26O 25.598 12-Oxabicyclo[9.1.0]dodeca-3,7-diene,1,5,5,8-tetramethyl-, (1R,3E,7E,11R)- 0.84 1.14 1.39 1.11 1.25 1.43 1.19 1.31 1.53 1.43 C15H24O 25.833 Cyclohexene,6-ethenyl-6-methyl-1-(1-methylethyl)-3-(1-methylethylidene)-, (6S)- －－－－－－0.27 －－－ C15H24 26.166 A-二去氫蓽澄茄烯 0.23 － － － 0.17 0.49 0.53 0.51 0.53 － C15H20 26.739 2-Naphthalenemethanol,1,2,3,4,4a,5,6,7-octahydroa,a,4a,8-tetramethyl-, (2R,4aR)- 8.52 － 12.99 19.26 12.19 18.03 12.06 13.19 10.73 11.21 C15H26O 26.915 b-Guaiene －2.55 －－－－－－－－ C15H24

注: “－”表示未檢出

3 討論

目前國內(nèi)外對厚樸的研究主要集中在厚樸酚、和厚樸酚兩種主要成分，現(xiàn)行版藥典控制厚樸藥材質(zhì)量亦是以厚樸酚、和厚樸酚的總含量大于2.0%為標(biāo)準(zhǔn)。而中藥常通過多成分、多途徑、多靶點發(fā)揮其藥效。多糖、揮發(fā)油作為厚樸中主要化學(xué)成分之一，多糖具有免疫調(diào)節(jié)功能，其抗氧化作用尤為顯著[9]；揮發(fā)油中β-石竹烯具有抗抑郁、抗氧化、鎮(zhèn)咳、抗炎作用[10-11]。因此，厚樸中多糖、揮發(fā)油等成分可能對厚樸藥材的質(zhì)量品質(zhì)有一定影響。本文對四川不同產(chǎn)地厚樸中揮發(fā)油和多糖含量及揮發(fā)油組成進(jìn)行了分析研究，研究結(jié)果為全面評價厚樸品質(zhì)，完善川厚樸評價體系，篩選優(yōu)良的川厚樸種質(zhì)資源地，提供了一定的實驗依據(jù)。

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(責(zé)任編輯：何瑤)

Analysis of volatile oil and polysaccharide in Houpo from different habitats /

DONG Jia-yue, LIU Mei-lin, REN Bo,ZHANG Mei //(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:The contents of volatile oil and polysaccharide in Houpo from different habitats in Sichuan Province were analyzed. The chemical components of the volatile oil were identi fi ed to provide reference for the selection of high quality germplasm resources and quality standards of Houpo in Sichuan province.MethodThe volatile oil content of Houpo was detected by the method recorded in "Chinese Pharmacopoeia" (2015 edition) and chemical components were identi fi ed by GCMS. Polysaccharide contents were detected by visible spectrophotometry.ResultThe content of volatile oil of Houpo was 0.18%～ 0.40% and the polysaccharide content was 5.11%～21.51%. Ninety-three compounds were identi fi ed from volatile oil of Houpo from ten producing areas in Sichuan province. And ten compounds were found in all the samples. Conclusion: The content and composition of volatile oil in Houpo from different area of Sichuan province are different , and polysaccharide content is varied in large range.

Sichuan Houpo; volatile oil; polysaccharide; GC-MS analysis; content determination

R 282

] A

] 1674-926X(2017)02-007-05

四川省科技計劃項目“中藥種質(zhì)資源庫建設(shè)關(guān)鍵技術(shù)研究及示范”（項目編號：2014SZ0156）

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，中藥材標(biāo)準(zhǔn)化重點實驗室，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

董佳悅（1991-），女，碩士在讀，研究方向為中藥有效成分分析研究。Tel:18280270918 Email:1070994058@qq.com

任波（1979-），男，副教授，從事中藥及復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究。Tel:(028)61800231，Email:bobofuly@163.com；張梅（1963-），女，教授，博士生導(dǎo)師，從事中藥及其復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究工作。Tel:(028)61800231，Email:zhangmei63@126.com

2016-12-22