二磷酸氯喹在血型鑒定和配血中的運用

2017-10-21 05:46:18李慶端侯麗華

實驗與檢驗醫學 2017年5期

李慶端，侯麗華

(漳州市中醫院檢驗科，福建漳州 363000)

二磷酸氯喹在血型鑒定和配血中的運用

李慶端，侯麗華

(漳州市中醫院檢驗科，福建漳州 363000)

目的探討紅細胞自凝或直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者血型鑒定和交叉配血不符的臨床用血策略。方法采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對患者紅細胞進行熱放散試驗，制備裸細胞測定血型和交叉配血。結果利用20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞正定型與反定型血型相符；交叉次側為陰性。結論采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對患者紅細胞進行熱放散試驗制備裸細胞鑒定血型和交叉配血是對紅細胞自凝或直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者鑒定血型和交叉配血的一種補救方法，為解決臨床疑難輸血多一條路徑。

血型鑒定；交叉配血；熱放散試驗；抗體篩查

臨床輸血的安全主要取決于正確的血型鑒定和交叉配血以及不規則抗體的篩查；在實際操作中，患者自身紅細胞和血漿的問題干擾血型的正確鑒定和交叉配血，給臨床用血提出挑戰，為了解決這類問題，確保安全，必須拓開思路尋求合符臨床安全輸血的新對策。

1 資料與方法

1.1 2011年至2016年我院紅細胞自凝患者13例，直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者21例。

1.2 試劑來源血型鑒定卡和Coombs檢測卡由德國Diagnostic Grifols，S.A公司生產提供，ABO正定型血型單克隆抗體、反定型檢測用ABO標準紅細胞由長春博迅生物制品有限公司生產提供，凝聚胺試劑盒由合肥天一生物技術研究所提供，抗體篩查標準紅細胞Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ（三人份O紅細胞）由上海血液生物醫藥制品有限公司提供。20%二磷酸氯喹[1]：（自備）取二磷酸氯喹20g，加生理鹽水至100ml，用 1mol/L NaOH 調 pH 至 5.1，2～8℃冷藏備用。

1.3 儀器德國Diagnostic Grifols，S.A公司生產提供的卡式離心機和卡式孵育儀；可調控水浴箱由上海醫療器械有限公司提供，血庫專用離心機有湖南湘雅醫療器械有限公司提供。

1.4 方法

1.4.1 卡式血型鑒定、試管法血型鑒定、凝聚胺交叉配血（MPT）、Coombs凝膠微柱交叉配血（MGT）、不規則抗體篩查、直接抗人球蛋白檢測均嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4.2 裸細胞制備患者EDTA-K3抗凝紅細胞1ml加入4ml20%二磷酸氯喹混勻置45℃水浴箱中，每隔10s鐘混勻一次，孵育30min趁熱1000g離心3min去除二磷酸氯喹再用生理鹽清洗4次備用。取25μl配成2.5%的紅細胞懸液直接涂片高倍鏡下鏡檢，紅細胞成單個分散；用Coombs凝膠微柱做直接抗人球蛋白試驗，結果陰性說明裸細胞制備成功。

2 結果

2.1 紅細胞自凝患者13例，直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者21例的血型不規則抗體檢測均為陰性；用于交叉配血的供血血型不規則抗體檢測均為陰性。

2.2 紅細胞自凝患者13例，EDTA-K3抗凝血未經處理直接檢測血型，正反定型不符12例，經20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞正定型與反定型血型相符13例（見表1）；其中4例臨床需用血的，未經處理直接用凝聚胺法和微柱凝膠法配血，凝聚胺法4例均出現次側凝聚，微柱凝膠法出現1例次側凝聚；經20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞做次側管交叉配血，凝聚胺法和微柱凝膠法均未出現凝集，4例患者輸血后均未出現不良反應（見表 2）。

表1 13例紅細胞自凝患者紅細胞處理前后血型鑒定結果

2.3 直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者21例，EDTA-K3抗凝血未經處理直接檢測血型，正反定型不符2例，經20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞正定型與反定型血型相符21例；未經處理直接用凝聚胺法和微柱凝膠法配血，凝聚胺法3例均出現次側凝聚，微柱凝膠法21例均出現次側凝聚；經20%二磷酸氯喹處理過的患者裸細胞做次側交叉配血，凝聚胺法和微柱凝膠法均未出現凝集，21例患者輸血后均未出現不良反應（見表2）。

3 討論

利用抗原抗體結合的可逆性，通過改變溫度和PH的方法使抗體從結合的紅細胞表面解脫，暴露出原有血型抗原。采用20%二磷酸氯喹在45℃環境下對紅細胞進行放散洗滌，充分去除紅細胞表面的黏附物如紅細胞自身IgG抗體和吸附在紅細胞膜上冷凝素，最大限度上保持紅細膜的完整和原有血型抗原的活性，用處理后的紅細胞再進行血型正定型，結果可靠。13例紅細胞自凝患者紅細胞經處理后均能排除紅細胞自凝的干擾，ABO正定型與反定型相符，且患者血漿在4℃和37℃環境下不與O型標準紅細胞發生凝聚反應，可做出血型鑒定；同樣用處理后的紅細胞做交叉配血可以排除直接抗人球蛋白Coombs試驗陽性患者的紅細胞對次側配血的干擾。紅細胞自凝機理復雜，出現紅細胞自凝的患者常伴有感染、自身免疫性疾病[8]、惡性腫瘤、妊娠、藥物致敏[2]或化學損傷等因素存在，導致紅細胞膜結構或膜外周的電子云改變，細胞之間容易發生黏連；或因血漿中存在大量異質性[10]大分子蛋白質（多數為IgM分子）吸附在紅細胞膜上，血液離體后置于常溫下易引發的紅細胞自凝或多凝[7]；冷凝集素的存在是造成血型鑒定困難的主要原因之一[3]。另一方面這些蛋白分子可作為一種異抗原致敏機體產生針對自身紅細胞的自身抗體，患者血清中含有大量游離的自身抗體在體外可使細胞凝聚[2]，干擾血型的正定型。自身抗體的存在導致患者直接抗人球蛋白試驗陽性，這也是交叉配血時微柱法次管出現陽性結果的主要原因[3，5，6]。細菌、腫瘤或藥物的代謝產物黏附或作用紅細胞膜表面，使紅細胞抗原性發生改變，出現類血型抗原物質如類B抗原，與血型鑒定試劑中相應的抗血清反應，出現凝聚反應，干擾血型正定型鑒定[4，6，9，11]。且這些代謝產物在體內多數為分子量較小，以半抗原形式存在，黏附在紅細表面，在血流的沖擊下不易使紅細胞出現凝集反應，在體外適當的條件（靜置、離心或其他介質）下出現凝聚反應，干擾血型正定型和次側配血。采用20%二磷酸氯喹在45℃條件下對患者紅細胞進行熱放散和生理鹽水充分清洗，其目的是徹底去除紅細胞表面吸附的自身抗體和外來物質如藥物分子、腫瘤、細菌代謝產物等，充分暴露其原始血型抗原。本實驗中，需要輸血的25例患者的血型不規則抗體均為陰性，所用于交叉的供者血型不規則抗體均為陰性，可排除因血液中存在血型不規則抗體引起的交叉配血不符[12，14]。用處理后的紅細胞做血型正定型和交叉次側配血，能達到預期的結果，血型鑒定正反相符，交叉配血主次相容，輸血后無出現不良反應[13，15]。用20%二磷酸氯喹處理后的紅細胞做血型正定型和交叉配血試驗可以減少因血型鑒定出現正反定型不合和交叉配血主次側不符的困惑。本方法簡單實用，成本低，可作為解決日常臨床疑難輸血另一佐證。